活細(xì)胞染色專題

關(guān)鍵詞：活細(xì)胞探針，微管，溶酶體，線粒體，飛躍的載體你絕對不容錯過的多彩活細(xì)胞探針活細(xì)胞成像技術(shù)徹底革新了生物學(xué)家研究細(xì)胞、蛋白質(zhì)以及眾多分子之間相互作用和生理過程的方式。與固定細(xì)胞的成像研究中提供的“快照”相比，對于動態(tài)變化的觀察使得人們對細(xì)胞的運作過程的認(rèn)識更加深入。此外，由于活細(xì)胞成像更不容易引入實驗偽影，它通常能提供比固定細(xì)胞成像更加真實可靠的信息。然而，目前市面上的但由于目前商業(yè)化的大多數(shù)性能優(yōu)秀的熒光染料（例如Alexa、Atto系列）大多存在以下弊端：它們大多數(shù)具有一定的細(xì)胞毒性；染料短時間曝光，容易淬滅；大多數(shù)染料與高分辨率顯微鏡（如SIM,TIRF,STORM,PALM）不兼容。在Abbkine技術(shù)團(tuán)隊的持續(xù)努力下，我們突破了層層困難，不斷精選和優(yōu)化，開發(fā)出了多款不同的活細(xì)胞探針。一、活細(xì)胞微管熒光探針微管蛋白（tubulin）是微管的主要組成部分。這種細(xì)胞內(nèi)圓柱形絲狀結(jié)構(gòu)存在于幾乎所有真核細(xì)胞中。微管在有絲分裂，細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)運，鞭毛運動和細(xì)胞骨架中起結(jié)構(gòu)和移動元件的作用。Tubulin是一種異二聚體，由α-微管蛋白和b-微管蛋白組成;兩個亞基的分子量均為55kDa，具有相當(dāng)大的同源性。研究最多的微管蛋白均已從脊椎動物腦中提取分離了出來。通過在免疫熒光顯微鏡中對微管的觀察，使得研究者能夠觀察到超分子結(jié)構(gòu)形式的蛋白質(zhì)在細(xì)胞中的組織結(jié)構(gòu)。該系列探針是帶有熒光的可以特異性標(biāo)記哺乳動物活細(xì)胞中微管的熒光探針，具有較強的水溶性和pH穩(wěn)定性；該探針可實現(xiàn)活細(xì)胞的標(biāo)記，需注意使用前細(xì)胞密度適宜及Buffer的使用濃度在適用范圍以保證良好的細(xì)胞狀態(tài)。該試劑盒與市售的熒光性能相比：在同等拍攝參數(shù)的HiS-SIM超分辨顯微鏡及Spiningdisk共聚焦顯微鏡成像結(jié)果對比顯示，它標(biāo)記效果好、抗漂白能力強。經(jīng)過測試，該系列可在U2OS、Hela、MCF-7、MDA-MB-231等細(xì)胞系中實現(xiàn)微管特異性標(biāo)記，具有較強的普適性。Fig.1.Abbkine的TraKine?ProLive-cellTubulin-trakerkit(GreenFluorescence)成像效果明亮且清晰，可以觀察到細(xì)胞微管形態(tài)的動態(tài)變化。高特異性，低背景，具有完美的熒光穩(wěn)定性。Fig.2.Abbkine的TraKine?ProLive-cellMitochondrionStainingkit(DeepRedFluorescencewithSuperResolution)(15μM)對活細(xì)胞和固定細(xì)胞染色結(jié)果，這個結(jié)果顯示細(xì)胞固定對線粒體標(biāo)記形式幾乎無影響。二、活細(xì)胞溶酶體探針溶酶體（Lysosome）是動物細(xì)胞中重要的細(xì)胞器,其存在的完整性與動物生理病理均密切相關(guān)。溶酶體是單層膜圍繞、內(nèi)含多種酸性水解酶類的囊泡狀細(xì)胞器，其主要功能是進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)消化，專司分解各種外源和內(nèi)源的大分子物質(zhì)。細(xì)胞內(nèi)的溶酶體具有異質(zhì)性，形態(tài)大小及內(nèi)含的水解酶種類都可能有很大的不同，標(biāo)志酶為酸性磷酸酶。最新研究發(fā)現(xiàn)，吞噬體與溶酶體具有雙向信號功能；溶酶體朝向轉(zhuǎn)運囊泡的運動能力，對于降解生物大分子而言至關(guān)重要。該系列染料具有的明顯優(yōu)勢如下：?優(yōu)化的哺乳動物活細(xì)胞和固定細(xì)胞溶酶體染色方案，該產(chǎn)品目前已在U2OS,Hela,Cos-7,ARPE等多種細(xì)胞系測試，均能實現(xiàn)活細(xì)胞標(biāo)記。如果樣本種類不包含在以上細(xì)胞系，我們可提供針對特定細(xì)胞系的實驗服務(wù)。?特別適合激光共聚焦顯微鏡（Confocal）及長時超分辨率顯微鏡（如SIM,STED,TIRF）下的活細(xì)胞研究，完美用于觀察三維空間內(nèi)的細(xì)胞動態(tài)。?專利染料LysOrange?高特異性，低背景，完美的熒光穩(wěn)定性。?幾乎無細(xì)胞毒性。Fig.2.Abbkine的TraKine?ProLive-cellLysosomeStainingkit(OrangeFluorescencewithSuperResolution)對U2OS細(xì)胞系染色的SIM結(jié)果。此圖說明該試劑盒可以清晰標(biāo)記活細(xì)胞的線粒體結(jié)構(gòu)，同時進(jìn)行超分辨率成像。相關(guān)產(chǎn)品推薦如下：產(chǎn)品名稱貨號染料Ex/Em(nm)規(guī)格價格（元）TraKineTMPro活細(xì)胞溶酶體染色試劑盒（綠色熒光）KTC4200490/525nm50T/250T1598/3998TraKineTMPro活細(xì)胞溶酶體染色試劑盒（紅色熒光）KTC4210564/590nm50T/250T1598/3998TraKineTMPro活細(xì)胞微管染色試劑盒（綠色熒光）KTC4100500/520nm50T/250T1598/3998TraKineTMPro活細(xì)胞微管染色試劑盒（紅色熒光）KTC4110652/674nm50T/250T1598/3998活細(xì)胞探針技術(shù)還有很大的發(fā)展空間，將來會應(yīng)用到更多的實驗領(lǐng)域，在生物行業(yè)發(fā)展中具有舉足輕重的地位，正持續(xù)獲得生物學(xué)家的關(guān)注。abbkine的技術(shù)專家為了給廣大讀者提供學(xué)習(xí)生物知識的平臺，經(jīng)過不懈努力，將多種高端生物實驗的干貨整理出來，后期陸續(xù)在微信公眾號中刊登，請廣大熱愛科學(xué)的讀者持續(xù)關(guān)注Abbkine公眾號。Abbkine專注于蛋白學(xué)和細(xì)胞學(xué)領(lǐng)域，致力于創(chuàng)新和研發(fā)各類抗體、蛋白質(zhì)、分析試劑與試劑盒，以期成為生命科學(xué)研究發(fā)展、藥物研發(fā)等領(lǐng)域的關(guān)鍵推動者。我們?yōu)槟峁┑鞍缀兔庖哐芯坑脩糇钕矏鄣漠a(chǎn)品，從免疫學(xué)基礎(chǔ)產(chǎn)品，如蛋白提取定量，到免疫學(xué)實驗的內(nèi)參標(biāo)簽抗體、一抗及二抗等；細(xì)胞研究用