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DBS江蘇省衛(wèi)生和計劃生育委員會發(fā)布I1食品安全地方標(biāo)準(zhǔn)食源性致病微生物快速檢測核細胞增生李斯特氏菌、大腸埃希氏菌O157：H7、副溶血性弧菌和志賀氏菌）：），3.6引物和探針：引物和探針序列見附錄2）：3.7.3亞硒酸鹽胱氨酸（SC）增菌）：恒溫空氣振蕩搖床，200r/min振溫空氣振蕩搖床，200r/min振搖4oC、200r/min振搖4h；移取0.1mL，r/min，4oC離心5min，取上清，-20oC保存，作為模板DNA備用。注：也可使用商品化的細菌DNA提取試劑盒，按照試劑盒說明書操作提取3陽性對照應(yīng)出現(xiàn)典型擴增曲線，Ct值<30；同時，陰性對照和空白對照應(yīng)未檢出；Ct值≤35，樣品結(jié)果為陽性；Ct值>35而<40，為可疑結(jié)果。陽性結(jié)果與可疑結(jié)果須按照相應(yīng)GB4789標(biāo)準(zhǔn)進行檢驗，根據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)方法得出的結(jié)果判4.5檢測過程中防止交叉污染及生物安全檢測過程中防止交叉污染按照GB/T27403中的規(guī)定執(zhí)行，4A.1致病菌實時熒光PCR法中所用的引物探針序列見表A.AATATTAATTGT-3’5’-CGCACAAGGCTCGACGGCTCATC-3’CCTGCGACA-3’GCTTT-3’ACCTTTGTA-3’AACCTGGT-3’CTGG-3’CTA-3’TACCAAAGG-3’A-3’GTC-3’ATGGTCTCAA-3’TTAAGG-3’CAAGGTGAT-3’TTCC-3’AA-3’
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