《動物布病診斷技術(shù)》課件

動物布病診斷技術(shù)課程目標(biāo)掌握布病診斷技術(shù)學(xué)習(xí)布病診斷方法，包括臨床樣本采集、實驗室檢測、結(jié)果分析等.了解布病防控措施掌握布病的流行病學(xué)特點，預(yù)防和控制方法，以及監(jiān)測和報告機制.提高布病診斷能力通過學(xué)習(xí)和實踐，提高布病的快速診斷能力，為動物疫病防控提供技術(shù)支持.布病概述布魯氏菌病，簡稱布病，是由布魯氏菌屬細菌引起的動物和人共患的急性或慢性傳染病。該病主要感染牛、羊、豬等家畜，也可感染馬、犬、貓等動物，人可以通過接觸病畜或食用病畜產(chǎn)品而感染。布病病原體布魯氏菌布魯氏菌屬細菌，革蘭氏陰性，無芽孢，需氧或微需氧，多形性，常呈球形或桿狀。類型有多種類型，如牛布魯氏菌、羊布魯氏菌、豬布魯氏菌等，可感染不同動物?？剐詫?、干燥和消毒劑敏感，但在冷凍條件下可存活較長時間。布病主要癥狀臨床癥狀布病的臨床癥狀多種多樣，取決于感染的動物種類、病原菌毒力和機體免疫狀態(tài)等因素。常見癥狀包括發(fā)熱、流產(chǎn)、不孕、關(guān)節(jié)炎、睪丸炎、乳房炎等。診斷依據(jù)診斷布病主要依靠臨床癥狀、病原學(xué)檢查、血清學(xué)檢查、分子生物學(xué)檢測等。通過綜合分析相關(guān)信息，才能準(zhǔn)確判斷是否感染布病。布病流行病學(xué)特點100宿主范圍布魯氏菌可感染多種動物，包括牛、羊、豬、犬等10感染途徑主要通過接觸感染動物的體液或分泌物傳播100抗藥性布魯氏菌對一些抗生素敏感，但某些菌株已產(chǎn)生耐藥性10潛伏期感染后潛伏期可長達數(shù)月，甚至數(shù)年布病診斷技術(shù)1臨床癥狀觀察動物的臨床表現(xiàn)，如發(fā)熱、流產(chǎn)、關(guān)節(jié)腫脹等，為布病診斷提供參考。2實驗室檢測對動物樣本進行實驗室檢測，包括血清學(xué)檢測、細菌培養(yǎng)、分子生物學(xué)檢測等。3病理學(xué)檢查對動物組織進行病理學(xué)檢查，以確診布病感染。臨床樣本采集1血液樣本采集靜脈血，用于血清學(xué)檢測。2乳汁樣本采集乳汁，用于細菌培養(yǎng)和血清學(xué)檢測。3組織樣本采集病變組織，用于病理學(xué)檢查。4尿液樣本采集尿液，用于細菌培養(yǎng)和血清學(xué)檢測。體液檢測技術(shù)血液檢測血清學(xué)檢測是布病診斷的常用方法，主要檢測抗體，如ELISA和凝集試驗。尿液檢測尿液檢測可用于檢測布魯氏菌及其抗原，有助于診斷布病。乳汁檢測乳汁檢測可用于檢測布魯氏菌及其抗原，有助于診斷牛布病。組織病理檢測樣本處理采集組織樣本后，需進行固定、脫水、包埋等處理，制成組織切片，以便進行顯微鏡觀察。染色與觀察切片經(jīng)染色后，在顯微鏡下觀察病變細胞形態(tài)、結(jié)構(gòu)等特征，判斷布病感染情況。病理診斷根據(jù)病理學(xué)特征，結(jié)合臨床癥狀和流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果，進行布病病理診斷。免疫學(xué)檢測方法血清學(xué)檢測包括凝集試驗、補體結(jié)合試驗、酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)等皮膚試驗如布魯氏菌素皮內(nèi)試驗(BPT)，用于診斷牛布病?？贵w檢測通過檢測動物血清中的特異性抗體來判斷動物是否感染布病。分子生物學(xué)檢測技術(shù)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)通過擴增布魯氏菌特異性基因片段，檢測樣本中是否存在布魯氏菌。實時熒光定量PCR(qPCR)對PCR擴增產(chǎn)物進行實時定量分析，可以確定樣本中布魯氏菌的含量?；驕y序?qū)Σ剪斒暇蚪M進行測序，可以確定菌株的遺傳特征，幫助追蹤疫情來源。分離培養(yǎng)技術(shù)細菌培養(yǎng)使用合適的培養(yǎng)基，在適宜的溫度和時間下進行細菌培養(yǎng)，觀察菌落形態(tài)和生長情況。顯微鏡觀察在顯微鏡下觀察菌體形態(tài)，并根據(jù)染色結(jié)果進行初步鑒定。生化試驗進行一系列生化試驗，例如糖發(fā)酵試驗、氧化酶試驗等，以確定細菌的生化特性。診斷方法的選擇1臨床癥狀依據(jù)臨床癥狀初步判斷，但布病癥狀不典型，易與其他疾病混淆。2實驗室檢測實驗室檢測結(jié)果更可靠，能夠確診布病，并區(qū)分不同病原菌。3綜合評估綜合考慮臨床癥狀、流行病學(xué)調(diào)查和實驗室檢測結(jié)果，最終確定診斷。布病ELISA檢測陽性陰性ELISA檢測是布病診斷中常用的方法之一，可以快速、有效地檢測動物血清或血漿中抗布魯氏菌抗體。ELISA檢測結(jié)果可以幫助獸醫(yī)判斷動物是否感染布病，并指導(dǎo)后續(xù)的治療和防控措施。ELISA檢測原理1抗原抗體結(jié)合酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）利用抗原抗體特異性結(jié)合的原理，通過酶標(biāo)記的抗體或抗原與待測樣品中的抗體或抗原反應(yīng)，檢測樣品中抗體或抗原的存在及其含量。2酶催化反應(yīng)當(dāng)抗原抗體結(jié)合后，加入酶底物，酶催化底物發(fā)生顏色反應(yīng)，通過比色法或其他檢測方法測定反應(yīng)程度，從而判斷樣品中抗體或抗原的濃度。3結(jié)果判定根據(jù)反應(yīng)顏色深淺或其他指標(biāo)，結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線或參考值，判定樣品中抗體或抗原的陽性或陰性，以及其濃度。ELISA檢測步驟樣本準(zhǔn)備收集血清、血漿或組織樣本，并進行預(yù)處理，例如離心去除細胞沉淀。包被抗體將特異性抗體包被在ELISA板的孔中，使抗體固定在孔壁上。封閉用封閉液封堵ELISA板孔壁上的剩余結(jié)合位點，防止非特異性結(jié)合。樣本孵育加入樣本，使樣本中的抗原與包被的抗體結(jié)合。洗滌洗滌ELISA板，去除未結(jié)合的樣本和雜質(zhì)。酶聯(lián)抗體加入標(biāo)記有酶的抗體，與已結(jié)合抗原形成抗原-抗體-酶復(fù)合物。顯色加入底物，酶催化底物產(chǎn)生有色反應(yīng)產(chǎn)物。終止反應(yīng)加入終止液，停止酶促反應(yīng)。測定結(jié)果使用酶標(biāo)儀或分光光度計測定反應(yīng)液的吸光度，并根據(jù)吸光度值進行結(jié)果判定。ELISA結(jié)果判定陰性樣品中沒有檢測到抗體，結(jié)果為陰性。陽性樣品中檢測到抗體，結(jié)果為陽性。通常需要進行進一步的確認實驗?？梢蓸悠窓z測結(jié)果接近臨界值，需要進行重復(fù)實驗。布病PCR檢測PCR檢測原理利用PCR技術(shù)，通過擴增布魯氏菌特異基因片段，判斷樣本中是否存在布魯氏菌。PCR檢測步驟提取樣本DNA，進行PCR擴增，通過電泳檢測擴增產(chǎn)物。PCR結(jié)果判定根據(jù)電泳結(jié)果，判斷樣本中是否存在布魯氏菌DNA。PCR檢測原理1擴增DNA片段通過反復(fù)循環(huán)，將目標(biāo)DNA片段擴增至可檢測水平。2引物結(jié)合特異性引物與目標(biāo)DNA片段兩側(cè)的互補序列結(jié)合。3模板DNA提取布魯氏菌的DNA作為模板。PCR檢測步驟1樣本準(zhǔn)備提取布病病原體的DNA或RNA。2PCR反應(yīng)體系準(zhǔn)備包含引物、dNTP、DNA聚合酶、緩沖液等成分的反應(yīng)體系。3PCR擴增在合適的溫度條件下進行PCR擴增，使目標(biāo)DNA片段大量復(fù)制。4電泳分析通過瓊脂糖凝膠電泳將擴增產(chǎn)物分離，觀察是否出現(xiàn)預(yù)期大小的DNA條帶。PCR結(jié)果判定1陽性結(jié)果出現(xiàn)特異性條帶，表明樣本中存在布病病原體DNA。2陰性結(jié)果未出現(xiàn)特異性條帶，表明樣本中未檢測到布病病原體DNA。3疑似結(jié)果出現(xiàn)非特異性條帶，需要重復(fù)檢測或進行其他檢測方法驗證。布病診斷總結(jié)多種診斷技術(shù)布病診斷可根據(jù)不同情況選擇合適的技術(shù)組合，如臨床癥狀觀察、實驗室檢測、病理學(xué)檢查等。準(zhǔn)確診斷至關(guān)重要準(zhǔn)確診斷是有效控制布病的關(guān)鍵，避免誤診或漏診，確保及時治療和防控措施。定期監(jiān)測定期對動物進行布病監(jiān)測，及時發(fā)現(xiàn)感染個體，防止疫情擴散。布病防控措施免疫接種對易感動物進行免疫接種是防控布病最有效的手段之一，可有效降低發(fā)病率和死亡率。隔離治療對已感染動物進行隔離治療，防止病原體傳播，避免其他動物感染。環(huán)境消毒對動物生活環(huán)境進行定期消毒，殺滅病原體，降低感染風(fēng)險。監(jiān)測與報告定期監(jiān)測定期采集樣本進行檢測，評估布病感染情況。建立數(shù)據(jù)庫建立布病監(jiān)測數(shù)據(jù)系統(tǒng)，方便數(shù)據(jù)分析和報告。及時報告及時上報布病疫情情況，以便采取防控措施。預(yù)防與控制預(yù)防性措施通過疫苗接種、定期健康檢查、隔離病畜、消毒等措施降低布病發(fā)生率?？刂苽鞑疾游镞M行隔離治療，并進行徹底消毒，防止病原擴散。主要參考文獻《動物傳染病學(xué)》中國農(nóng)業(yè)出版社《獸醫(yī)微生物學(xué)》中國農(nóng)業(yè)出版社《布魯氏菌病