《食品中禁用脂溶性合成色素的測(cè)定》

ICS

CCS點(diǎn)擊此處添加CCS號(hào)

團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)

T/GDFDTAECXXXX—XXXX

食品中禁用脂溶性合成色素的測(cè)定

Determinationofprohibitedfat-solublesyntheticcolourinfood

在提交反饋意見(jiàn)時(shí)，請(qǐng)將您知道的相關(guān)專(zhuān)利連同支持性文件一并附上。

XXXX-XX-XX發(fā)布XXXX-XX-XX實(shí)施

廣東省食品藥品評(píng)審認(rèn)證技術(shù)協(xié)會(huì)??發(fā)布

T/GDFDTAECXXXX—XXXX

食品中禁用脂溶性合成色素的測(cè)定

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中禁用脂溶性合成色素（見(jiàn)附錄A）的測(cè)定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于辣椒粉、調(diào)味醬、豆制品、熟肉制品、蛋等食品中32種禁用脂溶性合成色素的測(cè)定。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

GB/T33087儀器分析用高純水規(guī)格及試驗(yàn)方法

3術(shù)語(yǔ)和定義

本文件沒(méi)有需要界定的術(shù)語(yǔ)和定義。

4方法原理

試樣經(jīng)1%乙酸-乙腈提取，C18分散萃取小管凈化后，利用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定，內(nèi)標(biāo)法或外

標(biāo)法定量。

5試劑和材料

除另有說(shuō)明，本實(shí)驗(yàn)使用試劑均為分析純，水為GB/T6682中規(guī)定的一級(jí)水或GB/T33087中規(guī)定的

高純水。

甲醇（CH4O）：色譜純。

乙腈（C2H3N）：色譜純。

乙酸（CH?COOH）：質(zhì)譜純。

三氯甲烷（CHCl?）。

十八烷基硅烷鍵合硅膠（C18材料）：粒徑40~60μm。

1%乙酸-乙腈：1mL乙酸用乙腈定容到100mL。

標(biāo)準(zhǔn)品：脂溶性合成色素標(biāo)準(zhǔn)品見(jiàn)附錄B，純度≥95%，或經(jīng)國(guó)家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書(shū)的標(biāo)準(zhǔn)

物質(zhì)。

標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

5.8.1標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（1000mg/L）：分別準(zhǔn)確稱(chēng)取經(jīng)折算相當(dāng)于50mg（精確到0.1mg）的色素標(biāo)準(zhǔn)品，

用合適的溶劑（三氯甲烷、乙腈或甲醇）溶解后，轉(zhuǎn)移至50mL容量瓶中，用甲醇定容到刻度。

5.8.2混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液A組（1mg/L）：根據(jù)附錄A化合物的濃度分組，準(zhǔn)確移取0.10mL的A組色

素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液于100mL容量瓶中，用甲醇定容到刻度。

5.8.3混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液B組（10mg/L）：根據(jù)附錄A化合物的濃度分組，準(zhǔn)確移取1.00mL的B組色

素單標(biāo)儲(chǔ)備溶液于100mL容量瓶中，用甲醇定容到刻度。

5.8.4內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液（1000mg/L）：分別準(zhǔn)確稱(chēng)取經(jīng)折算相當(dāng)于50mg（精確到0.1mg）的內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)品，

置50mL容量瓶中，用合適的溶劑（三氯甲烷、乙腈或甲醇）溶解后，甲醇定容到刻度。

5.8.5混合內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液（10mg/L）：分別準(zhǔn)確移取1mL的內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備溶液于100mL容量瓶中，用甲醇定

1

T/GDFDTAECXXXX—XXXX

容到刻度。

5.8.6混合標(biāo)準(zhǔn)中間液A組（0.1mg/L）：準(zhǔn)確吸取1.00mL的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液A組于10mL容量瓶

中，用甲醇定容到刻度。

5.8.7混合標(biāo)準(zhǔn)中間液B組（1.0mg/L）：準(zhǔn)確吸取1.00mL的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液B組于10mL容量瓶

中，用甲醇定容到刻度。

5.8.8混合內(nèi)標(biāo)中間液（0.01mg/L）：準(zhǔn)確吸取一定量的混合內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備溶液，用甲醇稀釋、定容至刻

度。

5.8.9混合標(biāo)準(zhǔn)工作液：根據(jù)需要，用甲醇將混合標(biāo)準(zhǔn)中間液和混合內(nèi)標(biāo)中間稀釋成所需的標(biāo)準(zhǔn)工作

溶液。

6儀器和設(shè)備

液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀（LC-MS/MS）：配有電噴霧電離源（ESI）。

分析天平：感量為0.1mg、0.01mg。

離心機(jī)：轉(zhuǎn)速不低于8000r/min。

超聲波清洗器。

勻漿機(jī)。

食物粉碎機(jī)。

7分析步驟

試樣制備

豆制品、熟肉制品用食物粉碎機(jī)攪碎混勻；蛋煮熟后取蛋黃用食物粉碎機(jī)攪碎混勻。

試樣提取

稱(chēng)取2.00g（準(zhǔn)確至0.01g）試樣于50mL離心管中，加入混合內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液0.05mL，加入10mL的1%乙酸

-乙腈，超聲5min，在8000r/min下離心5min，重復(fù)提取一遍，合并上清液。取1mL上清液，用甲醇定容

至5mL。準(zhǔn)確移取2.00mL提取液至含有50mgC18材料的凈化管中，渦旋1min，在8000r/min下離心5min，

上清液過(guò)0.22μm膜，待測(cè)。每個(gè)樣品做2個(gè)平行測(cè)試，同時(shí)做空白測(cè)試。

儀器參考條件

7.3.1液相色譜參考條件

a)色譜柱：C18柱，100mm×2.1mm，1.7μm，或同等性能的色譜柱；

b)流動(dòng)相：A為0.1%乙酸水，B為0.1%乙酸-甲醇；梯度洗脫條件見(jiàn)表1；

c)柱溫：40℃；

d)進(jìn)樣量：2μL；

e)流速：0.3mL/min。

表1液相色譜梯度洗脫條件

時(shí)間（min）流動(dòng)相A（%）流動(dòng)相B（%）

0.008020

0.508020

5.002085

6.00595

10.00595

10.108020

15.008020

7.3.2質(zhì)譜參考條件

2

T/GDFDTAECXXXX—XXXX

a)離子源類(lèi)型：電噴霧電離源（ESI）；

b)掃描方式：正離子電離模式；

c)電噴霧電壓：2.5kV；

d)離子源溫度：150℃；

e)脫溶劑氣溫度：500℃

f)脫溶劑氣流速：1000L/h；

g)錐孔氣流速：150L/h；

h)定性離子對(duì)、定量離子對(duì)、去簇電壓和碰撞能量參見(jiàn)附錄A。

測(cè)定法

7.4.1定性測(cè)定

在同樣測(cè)試條件下，試樣溶液中脂溶性合成色素的保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)溶液相應(yīng)峰的保留時(shí)間相對(duì)偏差

在±25%以內(nèi)，且檢測(cè)到的相對(duì)離子豐度，應(yīng)當(dāng)與濃度相當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)溶液相對(duì)豐度一致。其允許偏差應(yīng)符

合表2的要求。

表2定性確證時(shí)相對(duì)離子豐度的最大允許偏差

相對(duì)離子豐度/%＞5020～5010～20≤10

允許相對(duì)偏差/%±20±25±30±50

7.4.2定量測(cè)定

取試樣溶液和相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)溶液，作單點(diǎn)或多點(diǎn)校準(zhǔn)，以目標(biāo)化合物特征離子質(zhì)量色譜峰面積外標(biāo)法

定量，或以目標(biāo)化合物與內(nèi)標(biāo)物特征離子峰面積比值內(nèi)標(biāo)法定量。標(biāo)準(zhǔn)工作液及試樣溶液中的脂溶性合

成色素響應(yīng)值均應(yīng)在儀器檢測(cè)的線性范圍內(nèi)。在上述色譜-質(zhì)譜條件下，標(biāo)準(zhǔn)溶液特征離子質(zhì)量色譜圖

見(jiàn)附錄B。

注：蘇丹紅I、蘇丹紅II、蘇丹紅III、蘇丹紅IV以內(nèi)標(biāo)法定量，其余化合物以外標(biāo)法定量。

空白試驗(yàn)

取空白試樣，除不加標(biāo)準(zhǔn)溶液外，采用相同的測(cè)定步驟進(jìn)行平行操作。

8結(jié)果計(jì)算和表述

外標(biāo)法

試樣中各色素含量按式（1）計(jì)算：

·····················································(1)

??×?×?

式中：?=?×??×1000

X—樣品中相應(yīng)的色素含量的數(shù)值，單位為毫克每千克（mg/kg）；

CS—標(biāo)準(zhǔn)溶液中相應(yīng)色素濃度的數(shù)值，單位為納克每毫升（ng/mL）；

A—樣品溶液中相應(yīng)的色素峰面積；

AS—標(biāo)準(zhǔn)溶液中相應(yīng)的色素峰面積；

V—樣品定容體積，單位為毫升（mL）；

m—樣品質(zhì)量的數(shù)值，單位為克（g）。

計(jì)算結(jié)果保留位有效數(shù)字。

2

內(nèi)標(biāo)法

試樣中各色素含量按式（2）計(jì)算：

3

T/GDFDTAECXXXX—XXXX

·····················································(1)

??×?×?

式中：?=?×??×1000

X—樣品中相應(yīng)的色素含量的數(shù)值，單位為毫克每千克（mg/kg）；

CS—標(biāo)準(zhǔn)溶液中相應(yīng)色素濃度的數(shù)值，單位為納克每毫升（ng/mL）；

R—樣品溶液中相應(yīng)的色素與內(nèi)標(biāo)物峰面積比值；

RS—標(biāo)準(zhǔn)溶液中相應(yīng)的色素與內(nèi)標(biāo)物峰面積比值；

V—樣品定容體積，單位為毫升（mL）；

m—樣品質(zhì)量的數(shù)值，單位為克（g）。

計(jì)算結(jié)果保留位有效數(shù)字。

2

9精密度

在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的20%。

10其他

本方法禁用脂溶性合成色素的檢出限為0.05mg/kg（A組化合物）、0.50mg/kg（B組化合物）。

4

T/GDFDTAECXXXX—XXXX

A

A

附錄A

（資料性）

禁用脂溶性合成色素的定量離子、定性離子、去簇電壓、碰撞電壓和保留時(shí)間

禁用脂溶性合成色素的定量離子、定性離子、去簇電壓、碰撞電壓和保留時(shí)間，見(jiàn)表A.1。

表A.1禁用脂溶性合成色素的定量離子、定性離子、去簇電壓、碰撞電壓和保留時(shí)間

標(biāo)準(zhǔn)溶定量離子定性離子

序母離子定量離子定性離子去簇電保留時(shí)間檢出限

中文名稱(chēng)英文名稱(chēng)液濃度碰撞電壓碰撞電壓

號(hào)(m/z)(m/z)(m/z)壓(V)(min)(mg/kg)

分組(V)(V)

1堿性紅5BasicRed5B組253.3237.7209.23035353.800.50

2堿性紅9BasicRed9A組288.1195.2151.23033533.320.05

3堿性藍(lán)1BasicBlue1A組363.4347.3311.13036434.680.05

4堿性紫2BasicViolet2A組330.4223.1208.13031414.200.05

5堿性橙21BasicOrange21A組315.3300.2285.23023304.350.05

6堿性橙22BasicOrange22A組391.3376.2361.43028364.880.05

7堿性嫩黃OAuramineOA組268.2147.2122.23028254.240.05

8堿性綠1BasicGreen1A組385.4341.2297.33036485.360.05

9堿性藍(lán)7BasicBlue7A組478.3434.5390.43046605.910.05

10硫黃素TThioflavineTB組283.1267.1252.13027433.740.50

11堿性紫4EthylViolet4A組456.4412.6368.33032605.970.05

12羅丹明6GRhodamine6GA組443.2415.3341.33033455.110.05

13羅丹明BRhodamineBA組443.3399.2355.03041565.270.05

14堿性綠4BasicGreen4A組329.3313.3208.23036364.680.05

15結(jié)晶紫CrystalvioletA組372.3356.2340.33038505.130.05

16堿性藍(lán)41BasicBlue41A組371.1164.1133.13019354.220.05

17堿性紅46BasicRed46A組321.2224.1196.03011163.980.05

18堿性黃51BasicYellow51A組292.2160.1106.13020254.200.05

19堿性黃24BasicYellow24A組322.4160.1136.13020254.350.05

5

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標(biāo)準(zhǔn)溶定量離子定性離子

序母離子定量離子定性離子去簇電保留時(shí)間檢出限

中文名稱(chēng)英文名稱(chēng)液濃度碰撞電壓碰撞電壓

號(hào)(m/z)(m/z)(m/z)壓(V)(min)(mg/kg)

分組(V)(V)

20蘇丹橙GSudanorangeGA組215.1122.193.13015256.200.05

21蘇丹黃SudanyellowA組226.077.1121.13022206.780.05

22對(duì)位紅PararedA組294.1156.0128.03018286.990.05

Disperseorange

23分散橙11A組238.177.1165.13057326.130.05

11

24蘇丹紅ISudanredIA組249.3156.293.13015237.310.05

25蘇丹紅IISudanredIIA組277.2121.1155.93018168.200.05

26蘇丹紅IIISudanredIIIA組353.1196.1156.23024238.910.05

27蘇丹紅IVSudanredIVA組381.190.9224.230392110.910.05

28二乙基黃DiethylyellowA組254.3134.277.03025257.080.05

29分散紅9DisperseRed9A組238.3223.3220.33025196.620.05

DisperseBlue

30分散藍(lán)124A組378.3220.386.93018326.440.05

124

31分散紅11Dispersered11A組269.2254.2226.13025325.180.05

32溶劑紅169SolventRed169A組266.3224.0167.23017417.090.05

內(nèi)

蘇丹紅組——

標(biāo)I-d5SudanI-d5A254.2156.198.13015237.30

內(nèi)

蘇丹紅組——

標(biāo)II-d6SudanII-d6A283.2121.2162.13018158.15

內(nèi)

蘇丹紅組——

標(biāo)III-d6SudanIII-d6A359.377.1196.03042258.85

內(nèi)

蘇丹紅組——

標(biāo)IV-d6SudanIV-d6A387.291.1224.130352410.86

6

T/GDFDTAECXXXX—XXXX

B

B

附錄B

（資料性）

禁用脂溶性合成色素的英文中文名稱(chēng)對(duì)照索引

禁用脂溶性合成色素的中英文名稱(chēng)對(duì)照索引（按英文字母順序），見(jiàn)表B.1。

表B.1禁用脂溶性合成色素的中英文名稱(chēng)對(duì)照索引（按英文字母順序）

附錄中的序

序號(hào)A中文名稱(chēng)英文名稱(chēng)號(hào)分子式

號(hào)CAS

17堿性嫩黃OAuramineO2465-27-2C17H22ClN3

23堿性藍(lán)1BasicBlue13521-06-0C23H24Cl2N2

316堿性藍(lán)41BasicBlue4112270-13-2C20H26N4O6S2

49堿性藍(lán)7BasicBlue72390-60-5C33H40N3Cl

58堿性綠1BasicGreen1633-03-4C27H34N2O4S

614堿性綠4BasicGreen42437-29-8C52H54N4O12

75堿性橙21BasicOrange213056-93-7C22H23ClN2

86堿性橙22BasicOrange224657-00-5C28H27ClN2

917堿性紅46BasicRed4612221-69-1C18H23BrN6

101堿性紅5BasicRed5553-24-2C15H17ClN4

112堿性紅9BasicRed9569-61-9C19H17N3.HCl

124堿性紫2BasicViolet23248-91-7C22H24ClN3

1319堿性黃24BasicYellow2452435-14-0C19H21N5O4S2

1418堿性黃51BasicYellow5183949-75-1C20H25N3O4S

1515結(jié)晶紫Crystalviolet548-62-9C25H30ClN3

1628二乙基黃Diethylyellow2481-94-9C16H19N3

1730分散藍(lán)124DisperseBlue12461951-51-7C16H19N5O4S

1823分散橙11Disperseorange1182-28-0C15H11NO2

1931分散紅11Dispersered112872-48-2C15H12N2O3

2029分散紅9DisperseRed982-38-2C15H11NO2

7

T/GDFDTAECXXXX—XXXX

附錄中的序

序號(hào)A中文名稱(chēng)英文名稱(chēng)號(hào)分子式

號(hào)CAS

2111堿性紫4EthylViolet42390-59-2C31H42ClN3

2222對(duì)位紅Parared6410-10-2C16H11N3O3

2312羅丹明6GRhodamine6G989-38-8C28H31ClN2O3

2413羅丹明BRhodamineB81-88-9C28H31ClN2O3

2532溶劑紅169SolventRed16927354-18-3C17H15NO2

2620蘇丹橙GSudanorangeG2051-85-6C12H10N2O2

2724蘇丹紅ISudanredI842-07-9C16H12N2O

2825蘇丹紅IISudanredII3118-97-6C18H16N2O

2926蘇丹紅IIISudanredIII85-86-9C22H16N4O

3027蘇丹紅IVSudanredIV85-83-6C24H20N4O

3121蘇丹黃Sudanyellow60-11-7C14H15N3

3210硫黃素TThioflavineT2390-54-7C17H19ClN2S

34內(nèi)標(biāo)蘇丹紅I-d5SudanI-d5752211-63-5C16H7N2OD5

35內(nèi)標(biāo)蘇丹紅II-d6SudanII-d61014689-15-6C18H10D6N2O

36內(nèi)標(biāo)蘇丹紅III-d6SudanIII-d61014689-17-8C22H10D6N4O

37內(nèi)標(biāo)蘇丹紅IV-d6SudanIV-d61014689-18-9C24H14D6N4O

8

T/GDFDTAECXXXX—XXXX

C

C

附錄C

（資料性）

禁用脂溶性合成色素定量離子提取流圖

禁用脂溶性合成色素定量離子提取流圖（A組：10ng/mL；B組：100ng/mL），見(jiàn)圖C.1。

std10ppb

20211112-327:MRMof28ChannelsES+

3.80

100253.3>237.7(B001)

5.09e6

%

0Time

-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.00

1.堿性紅5

std10ppb

20211112-323:MRMof10ChannelsES+

3.32

100288.1>195.2(B002)

7.07e6

%

0Time

2.004.006.008.0010.0012.0014.00

2.堿性紅9

std10ppb

20211112-326:MRMof22ChannelsES+

4.68

100363.4>347.3(B007)

1.37e6

%

0Time

-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.00

3.堿性藍(lán)1

std10ppb

20211112-327:MRMof28ChannelsES+

4.20

100330.4>223.1(B013)

4.18e6

%

0Time

-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.00

4.堿性紫2

9

T/GDFDTAECXXXX—XXXX

std10ppb

20211112-326:MRMof22ChannelsES+

4.35

100315.3>300.2(B016)

5.89e6

%

0Time

-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.00

5.堿性橙21

std10ppb

20211112-321:MRMof32ChannelsES+

4.88

100391.3>376.2(B017)

1.47e7

%

0Time

2.004.006.008.0010.0012.0014.00

6.堿性橙22

std10ppb

20211112-326:MRMof22ChannelsES+

4.24

100268.2>147.2(B019)

1.87e7

%

0Time

-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.00

7.堿性嫩黃O

std10ppb

20211112-321:MRMof32ChannelsES+

5.36

100385.4>341.2(B020)

1.46e7

%

0Time

2.004.006.008.0010.0012.0014.00

8.堿性綠1

10

T/GDFDTAECXXXX—XXXX

std10ppb

20211112-325:MRMof32ChannelsES+

5.91

100478.3>434.5(B021)

7.61e6

%

0Time

-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.00

9.堿性藍(lán)7

std10ppb

20211112-327:MRMof28ChannelsES+

3.74

100283.1>267.1(B022)

4.38e7

%

0Time

-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.00

10.硫黃素T

std10ppb

20211112-325:MRMof32ChannelsES+

5.97

100456.4>412.6(B023)

4.21e6

%

0Time

-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.00

11.堿性紫4

std10ppb

20211112-321:MRMof32ChannelsES+

5.11

100443.2>415.3(B024)

1.82e7

%

0Time

2.004.006.008.0010.0012.0014.00

12.羅丹明6G

11

T/GDFDTAECXXXX—XXXX

std10ppb

20211112-321:MRMof32ChannelsES+

5.27

100443.3>399.2(B025)

3.44e7

%

0Time

2.004.006.008.0010.0012.0014.00

13.羅丹明B

std10ppb

20211112-326:MRMof22ChannelsES+

4.68

100329.3>313.3(B026)

4.47e6

%

0Time

-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.00

14.堿性綠4

std10ppb

20211112-321:MRMof32ChannelsES+

5.13

100372.3>356.2(B027)

2.06e7

%

0Time

2.004.00