春石斛雜交育種技術(shù)規(guī)程

春石斛雜交育種技術(shù)規(guī)程范圍本文件界定了春石斛雜交育種涉及的術(shù)語和定義，規(guī)定了育種流程及目標(biāo)、雜交、無菌苗培育、子代測定及篩選優(yōu)良單株、優(yōu)良單株擴繁等要求，描述了檔案管理、新品種登錄、審定和植物新品種權(quán)申請等內(nèi)容。本文件適用于XX自治區(qū)行政區(qū)域內(nèi)春石斛人工控制雜交育種。規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。NY/T2758植物新品種特異性、一致性和穩(wěn)定性測試指南石斛屬DB45/T1783石斛蘭組培快繁技術(shù)規(guī)程術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。

石斛DendrobiumSw.蘭科石斛屬（Dendrobium）植物，為蘭科第二大屬，全球約有2000種，分布于亞洲熱帶、亞熱帶及大洋州，我國原產(chǎn)80種，除個別種類外，皆為附生草本植物（中國原產(chǎn)的均為附生，其他國家發(fā)現(xiàn)有極個別為地生）。

春石斛NobiletypeDendrobium石斛屬植物中的落葉類石斛，自然花期在春季的3～5月，花色鮮艷多彩，具有極高的觀賞價值。

花朵flower石斛花朵由萼片、花瓣、蕊柱、子房和苞片5部分組成。

蕊柱Gynandrium蕊柱也稱鼻，頂端是藥腔，內(nèi)有4個花粉塊，外面蓋有藥帽，花藥之下近蕊柱頂端處有一腔穴，稱為蕊腔，是石斛蘭接收花粉的地方。在花藥和蕊腔之間有蕊喙，主要用于防止自花授粉和協(xié)助異花授粉。3.5單交singlecross單交指用兩個春石斛親本進行雜交。3.6單交后回交backcrossaftersinglecrossing指用兩個春石斛親本雜交，從其一代雜交種中選擇優(yōu)良單株和親本之一回交，再從回交后代中選育春石斛新品種。3.7單交后自交或姐妹交selfingaftersinglecrossingorsistercross指用兩個春石斛親本雜交后，從一代春石斛雜交種中選擇單株自交或進行姐妹交，后從這些自交或姐妹交的后代選育出春石斛新品種。3.8自交后雜交selfingafterhybridization指對兩春石斛親本先進行系統(tǒng)育種，然后選株雜交，從雜交后代中選育春石斛新品種。3.9復(fù)合雜交compositehybridization指3個或3個以上的親本參與的雜交。育種流程及目標(biāo)育種流程明確育種目標(biāo)→選擇雜交親本→配置雜交組合→雜交種子培養(yǎng)和試管苗移栽→雜交后代種植和優(yōu)良單株選擇→優(yōu)良單株繁殖，形成株系→株系栽培、性狀鑒定和穩(wěn)定性觀察→檔案記錄和管理→新品種登錄、審定和植物新品種權(quán)申請。雜交方式雜交方式包括單交、單交后回交、單交后自交或姐妹交、自交后雜交、復(fù)合雜交。育種目標(biāo)制定春石斛育種目標(biāo)分花色（粉紅、五指花系、紫紅花系、白色花系、黃色花系、線條花）、株型（大型、中小型、迷你型）、開花性（早花、易開花、多花、香花）、抗性（抗病性、抗蟲性等）。雜交親本選擇與選配根據(jù)育種目標(biāo)選擇健壯、無病蟲害，非第一次開花，性狀穩(wěn)定，可育的春石斛作雜交親本進行雜交。育種親本選擇見表1。春石斛育種親本選擇育種目標(biāo)親本選擇花色粉紅、五指花系以粉紅色至粉紫色春石斛為基本育種親本，往淺色系篩選則育出粉紅、五指花系。紫紅花系選擇具紫紅色系的春石斛親本進行雜交白色花系以粉色原種與白色系反復(fù)雜交可篩選出白花色系黃色花系重要原種有束花石斛（Dendrobiumchrysanthum）、尖刀唇石斛（Dendrobiumheterocarpum）等黃花系做親本株型大型育種選大型種做親本中小型育種重要原種有細(xì)莖石斛（Dendrobiummoniliforme）、獨角石斛（Dendrobiumunicum）等小型種做親本開花性育種早花選擇開花早的優(yōu)良品種作親本易開花選擇花芽對低溫要求不高的優(yōu)良品種作親本多花選擇花量大、多節(jié)開花的優(yōu)良品種作親本香花選擇具有香味的優(yōu)良品種作親本抗性抗病性選擇抗病性強的優(yōu)良品種作親本抗蟲性選擇抗蟲性強的優(yōu)良品種作親本其他生長勢育種有倍數(shù)芽特性的親本，可選育出縮短生長周期的后代工具準(zhǔn)備照相機、記錄本、鉛筆及消毒過的鑷子、標(biāo)簽（2x2cm）、玻璃皿等。人工授粉根據(jù)擬定的雜交組合進行人工授粉，授粉時間以母本花朵開放4d～6d，父本花朵開放1d～3d內(nèi)為宜，授粉時先將母本花朵的唇瓣和花粉塊除去，用消毒過的鑷子從父本藥腔內(nèi)取花粉塊放入干凈的玻璃皿中。將父本的花粉塊送入母本蕊腔中。標(biāo)記記錄用鉛筆標(biāo)明父母本、花朵編號、授粉日期和操作人等，對授粉的花枝掛上標(biāo)簽，并登記在記錄本。授粉后管理授粉后子房膨大時疏果，每株保留2-3個幼果。雜交果采收雜交后120d～200d，觀察到果皮黃綠色，開始皺縮且開裂前采收果實。雜交果保存采收后將果莢裝入封口袋后放置4℃冰箱保存，可保存一周。無菌苗培育果莢處理將蒴果用體積濃度2％洗潔精水溶液浸泡10min，然后用自來水沖洗10min，在超凈臺上將蒴果置于5％次氯酸鈉溶液中消毒15min，無菌水沖洗2～3遍，再次用5％次氯酸鈉消毒15min，取出后用無菌水沖洗2～3次，最后用消毒濾紙去除蒴果表面的水分。無菌播種將處理好的蒴果在超凈臺內(nèi)用手術(shù)刀剖開，挑取種子接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中。增殖、分化、生根培養(yǎng)增殖、分化、生根培養(yǎng)參照DB45/T1783的規(guī)定執(zhí)行。煉苗及移栽煉苗及移栽參照DB45/T1783的規(guī)定執(zhí)行。移栽后管理管理參照DB45/T1783的規(guī)定執(zhí)行。子代測定及篩選優(yōu)良單株子代測定雜交后代開花株按照NY/T2758進行性狀觀測。優(yōu)良單株選擇根據(jù)雜交育種方向選擇雜交后代優(yōu)良植株?？稍谡麄€生育期進行選擇，在苗期對抗病性、抗逆性、株型和葉藝等進行選擇；在花期對花色、花型和香味等進行選擇。優(yōu)良單株擴繁優(yōu)良單株繁殖，形成株系選取優(yōu)良單株的幼莖或嫩葉為外植體進行組織培養(yǎng)擴繁，組培快繁技術(shù)參照DB45/T1783的規(guī)定執(zhí)行。株系栽培對篩選植株群體組培移栽參照DB45/T1783進行管理。移栽后成大苗進行栽培管理大苗種植以水苔、3cm的樹皮或椰塊等作為作為大苗移栽基質(zhì)，選用2.5寸營養(yǎng)杯將原來小杯的植株進行換盆。溫度、濕度管理放置于溫度為22℃～32℃，空氣相對濕度為60%～80%，通風(fēng)良好且空氣流通無礙的場地。光照管理提供適宜的光照條件，以50%～60%的遮光率為宜。水分管理見盆面干燥時可澆水，以水從盆底流出為度。肥料管理以基肥為主，按每株2～2.5g，每3個月撒施1次有效成分N:P:K為14:13:13的固體緩釋肥；結(jié)合澆水，根外追肥，薄肥勤施，每15天噴施一次葉面肥，直至得到成苗。冬季一般不施肥，必要時可用磷酸二氫鉀1000倍液根外追肥。特異性、一致性、穩(wěn)定性觀測對新的株系按照NY/T2758進行性狀鑒定及穩(wěn)定性的觀察。檔案管理建立生產(chǎn)技術(shù)管理檔案（見附錄A），記錄雜交組合及雜交授粉情況。技術(shù)檔案要有專人記載，技術(shù)負(fù)責(zé)人審查后存檔。新品種登錄、審定和植物新品種權(quán)申請國際登陸可在英國皇家園藝學(xué)會（RoyalHorticulturalSociety，RHS）進行國際登錄。國內(nèi)登陸可在中國蘭花協(xié)會和中國蘭花學(xué)會聯(lián)合組成的中國蘭花品種