DB46T-海水 陰離子表面活性劑的測定 流動注射-亞甲基藍分光光度法編制說明

《海水陰離子表面活性劑的測定流動注射-亞甲基藍分光光度法（征求意見稿）》編制說明《海水陰離子表面活性劑的測定流動注射-亞甲基藍分光光度法》標準編制組二〇二四年十二月項目名稱：海水陰離子表面活性劑的測定流動注射-亞甲基藍分光光度法項目編號：2022-Z058承擔單位：海南省生態(tài)環(huán)境監(jiān)測中心項目負責人：熊曾恒技術負責人：何書海編制組成員：熊曾恒、何書海、陸美環(huán)、周女琬、王晟、符嬌瑰、王霞目錄TOC\o"1-3"\h\u26414一、項目簡況 《海水陰離子表面活性劑的測定流動注射-亞甲基藍分光光度法》編制說明一、項目簡況（一）標準名稱《海水陰離子表面活性劑的測定流動注射-亞甲基藍分光光度法》。（二）項目來源（項目計劃號）海南省市場監(jiān)督管理局《關于下達海南省2022年第二批地方標準制修訂項目計劃的通知》（瓊市監(jiān)函[2022]572號），項目編號：2022-Z058。（三）起草單位海南省生態(tài)環(huán)境監(jiān)測中心。（四）單位地址海南省海口市白駒大道98號。（五）參與起草單位海南省環(huán)境科學研究院、?？谑猩鷳B(tài)環(huán)境監(jiān)測站、三亞市環(huán)境監(jiān)測站、五指山市生態(tài)環(huán)境監(jiān)測站、澄邁縣生態(tài)環(huán)境監(jiān)測站、陵水縣生態(tài)環(huán)境監(jiān)測站。（六）標準起草人表1標準起草人序號姓名單位職務職稱任務分工聯(lián)系方式1何書海海南省生態(tài)環(huán)境監(jiān)測中心科室主任研究員技術負責人，負責整個項目的實驗設計，文本及編制說明編寫等內(nèi)容180897626012熊曾恒海南省生態(tài)環(huán)境監(jiān)測中心/高級工程師項目負責人，負責項目實施、方法實驗條件優(yōu)化、數(shù)據(jù)整理、報告編制等132157272353陸美環(huán)海南省生態(tài)環(huán)境監(jiān)測中心/助理工程師方法開發(fā)、條件優(yōu)化、數(shù)據(jù)整理188761655864周女琬海南省生態(tài)環(huán)境監(jiān)測中心/工程師方法開發(fā)、條件優(yōu)化186899097665王晟海南省生態(tài)環(huán)境監(jiān)測中心/助理工程師方法開發(fā)、條件優(yōu)化、組織方法驗證183892455066符嬌瑰海南省生態(tài)環(huán)境監(jiān)測中心/助理工程師方法開發(fā)152989740097王霞海南省生態(tài)環(huán)境監(jiān)測中心/助理工程師樣品采集、分、編制情況（一）編制標準的必要性和意義及背景1.陰離子表面活性劑的環(huán)境危害陰離子表面活性劑（ASs）是最常用的表面活性劑。分子的疏水部分通常是線性或支鏈的烷基、烷基苯或烷基苯醚。親水部分是一個帶負電荷的基團（羧酸鹽、硫酸鹽、磺酸鹽或磷酸鹽）。我國生產(chǎn)的洗滌劑以生物降解性好的直鏈烷基苯磺酸鹽（LinearAlkylBenzeneSulfonate,LAS）及烷基磺酸鹽（AlkylSulfonate，SAS）兩類ASs為主。近年來，不僅在家庭和工業(yè)廢水中，而且在自然水體中也發(fā)現(xiàn)了大量不同的ASs。海水中的ASs主要來源于生活污水及工業(yè)廢水，這些化合物會聚集在海水介質和其他諸如空氣、油狀液體和微粒表面，使之產(chǎn)生泡沫、乳化和微粒懸浮等現(xiàn)象，隔絕水中氧氣與空氣中氧的交換，具有抑制和殺死微生物的作用，同時ASs的兩性特性促進了生物體內(nèi)的積累，使其能夠吸附在微生物的細胞表面，阻礙其功能，從而抑制其他有毒物質的降解，影響水體凈化導致嚴重的水質污染。因此，國內(nèi)外不斷規(guī)范所使用的ASs，并監(jiān)測其在水生受體體內(nèi)的釋放，以保護環(huán)境。2.相關環(huán)保標準和環(huán)保工作的需要表面活性劑是一種兩親性的化合物，可以降低溶劑的表面張力。通常由親水性基團和疏水鏈組成。表面活性劑根據(jù)其極性基團分為陰離子、非離子、陽離子和兩性（兩性離子）。由于表面活性劑具有特殊的特性，它被廣泛應用于工業(yè)（紡織、生物技術和制藥）和家庭（洗滌劑、健康和美容輔助劑）。表面活性劑產(chǎn)量每年增長，2016-2021年的CAGR（復合年增長率）為5.4%。因此，表面活性劑是一類廣泛存在的水污染物，已造成全球性的環(huán)境問題。生態(tài)環(huán)境保護部頒布的《近岸海域環(huán)境監(jiān)測技術規(guī)范》（HJ442.3-2020）中規(guī)定海水陰離子表面活性劑為必測項目，頻率為每年三次。海南省是中國陸地面積最小、海洋面積最大的熱帶海洋島嶼省，擁有海洋面積約200萬平方千米，國家級或省級海水監(jiān)測點位多，海水樣品采集量大。傳統(tǒng)手工方法《海洋監(jiān)測規(guī)范第4部分：海水分析》（GB17378.4-2007）由于樣品需經(jīng)大量三氯甲烷多次萃取、顯色比色等步驟，操作繁瑣，分析效率低，重復性差等不足，無法滿足實際工作需求。流動注射分析法具有方法簡便而快速、正確度及精密度高、靈敏度高、自動進樣、樣品和試劑消耗量小等特點，樣品全封閉在線處理、吸收和檢測，減少了三氯甲烷對環(huán)境的污染和對人體的危害，尤其在檢測大批量的樣品上有突出的優(yōu)勢，在水質檢測中較為適用，不僅適用于實驗室，也能在野外環(huán)境中開展檢測。《水質陰離子表面活性劑的測定流動注射-亞甲基藍分光光度法》（HJ826-2017）就是將流動注射亞甲藍分光光度法應用于水質陰離子表面活性劑的測定，但是該方法適用范圍不包含海水。根據(jù)《國家生態(tài)環(huán)境標準制修訂工作規(guī)則》（國環(huán)規(guī)法規(guī)〔2020〕4號）有關規(guī)定，加強國家生態(tài)環(huán)境監(jiān)測標準的前期研究和技術儲備，提高生態(tài)環(huán)境監(jiān)測標準制修訂質量和效率，規(guī)范生態(tài)環(huán)境監(jiān)測標準預研究工作等方面做出了具體要求。此外，《海南省人民政府辦公廳關于海南省貫徹落實<國家標準化發(fā)展綱要>的實施意見》瓊府辦〔2022〕13號提出“深化標準化工作改革，建立健全高質量發(fā)展標準體系，完善標準化工作體制機制”的要求。當前國內(nèi)外仍未有海水中陰離子表面活性劑的流動注射分析方法，因此，制定科學準確、分析效率高、操作簡便、適合大批量海水樣品的分析方法，將為海南自由貿(mào)易港建設提供強有力的技術支撐，這也是相關環(huán)境保護工作的需要。（二）編制過程簡介1.成立編制組2022年9月任務下達后，海南省生態(tài)環(huán)境監(jiān)測中心立即成立標準編制組，專門承擔此項標準的研究制訂工作，編制工作方案。標準編制組成員包括精通流動注射和陰離子表面活性劑分析工作的同志。2.標準起草2.1查閱國內(nèi)外資料2023年1月～6月，標準編制組根據(jù)擬定的技術路線，開展了樣品保存、前處理條件、標準溶液保存、干擾與消除、流動注射儀器最佳條件優(yōu)化等實驗研究，并在此基礎上形成了標準文本和編制說明初稿。2023年9月～2024年2月，組織6家有資質的驗證單位對標準的方法檢出限和測定下限、方法精密度、正確度及實際樣品進行方法驗證工作；2024年3月，本標準編制組開展各實驗室數(shù)據(jù)的匯總和整理分析工作。2.2開展技術培訓、條件實驗及方法驗證工作22023年1月～6月，標準編制組根據(jù)擬定的技術路線，開展了樣品保存、前處理條件、標準溶液保存、干擾與消除、流動注射儀器最佳條件優(yōu)化等實驗研究，并在此基礎上形成了標準文本和編制說明初稿。2023年9月～2024年2月，組織6家有資質的驗證單位對標準的方法檢出限和測定下限、方法精密度、正確度及實際樣品進行方法驗證工作；2024年3月，本標準編制組開展各實驗室數(shù)據(jù)的匯總和整理分析工作。2.3編寫編制說明及標準文本2024年3月-2024年6月，本標準編制組，遵循《標準化工作導則第1部分:標準的結構和編寫》（GB/T1.1-2020）和《標準編寫規(guī)則第4部分:試驗方法標準》（GB/T20001.4-2015）相關規(guī)定，并結合標準工作方案及驗證報告編寫完成了《海水陰離子表面活性劑的測定流動注射-亞甲基藍分光光度法》的標準征求意見稿和編制說明。3.征求意見過程2024年10月，由海南省生態(tài)環(huán)境廳牽頭負責通過網(wǎng)站、會議等方式公開征求意見，共向25個有關行業(yè)單位、科研院所、大專院校及有代表性的標準利益方發(fā)函征求意見。截止2024年11月，征求意見共收到3家單位5條意見，最終4條采納，1條未采納。（三）制定標準的原則和依據(jù)，與現(xiàn)行法律法規(guī)、標準的關系1.制定的原則與依據(jù)1.1分析儀器與方法等研究進展由于表面活性劑具有表面活性劑的兩親性、復雜且經(jīng)常變化的基質組成、復雜樣品中單個表面活性劑的低水平、表面活性劑的不同化學結構、各種同源的表面活性劑系列的使用等特點，使得在海水中測定低濃度的陰離子表面活性劑成為一項重要的挑戰(zhàn)。低濃度水平的ASs通常需要使用預濃縮技術，如固相萃取、液-液萃取和加速溶劑萃取等。一般采用分光光度法、電位法和色譜法測定ASs。國際化標準組織發(fā)行了ISO7875-1:1996標準，應用亞甲基藍法測定水中的陰離子表面活性劑，此法與GB7494-87一致，但該方法需要復雜的前處理過程并使用大量三氯甲烷。歐盟發(fā)行的EN13273-2001標準使用高效液相色譜法測定陰離子表面活性劑中的非離子物質含量，雖然靈敏度高，但需專用儀器。而EN14480-2004使用的電位兩相滴定法，靈敏度低于亞甲基藍法。由于亞甲藍比色法靈敏度高、選擇性好,也是海水水質測定國家標準方法《海洋監(jiān)測規(guī)范第4部分:海水分析（23陰離子洗滌劑亞甲基藍分光光度法）》（GB17378.4-2007）。流動注射分析法具有方法簡便而快速、正確度及精密度高、靈敏度高、自動進樣、樣品和試劑消耗量小等特點，樣品全封閉在線蒸餾、吸收和檢測，減少了三氯甲烷對環(huán)境的污染和對人體的危害，尤其在檢測大批量的樣品上有突出的優(yōu)勢，在水質檢測中較為適用，不僅適用于實驗室，也能在野外環(huán)境中開展檢測?！端|陰離子表面活性劑的測定流動注射-亞甲基藍分光光度法》（HJ826-2017）就是將流動注射亞甲藍分光光度法應用于水質陰離子表面活性劑的測定，但是該方法適用范圍不包含海水。隨著國內(nèi)科學儀器技術的不斷發(fā)展，國產(chǎn)流動注射分析儀逐漸崛起，在激烈的科學儀器市場占據(jù)了一席之地。我國生產(chǎn)流動分析儀的廠家主要有北京寶德儀器有限公司、北京海光儀器有限公司、北京吉天儀器有限公司、上海安杰智創(chuàng)科技有限公司等等。據(jù)不完全統(tǒng)計，海南省流動注射分析儀制造廠家主要為北京吉天儀器有限公司和北京寶德儀器有限公司，省內(nèi)流動注射分析儀配置數(shù)量近百臺，產(chǎn)品型號主要為吉天iFIA-7、吉天6000+、BDFIA-8000系列、AJ-1000系列等，應用領域主要涉及疾控、環(huán)保、水文、自來水、第三方環(huán)境監(jiān)測機構、食品檢測所、海關、高?？蒲小⒕茝S、農(nóng)業(yè)等行業(yè)。流動注射儀的使用大大提高了陰離子表面活性劑的測定效率。由于海南省擁有大面積海域，海水監(jiān)測是環(huán)境監(jiān)測的重點之一且任務繁重，因此將流動注射法用用至海水監(jiān)測具有重要意義。1.2本標準制訂的基本原則與依據(jù)本標準的制訂符合《國家環(huán)境保護標準制修訂工作管理辦法》和《環(huán)境監(jiān)測分析方法標準制修訂技術導則》（HJ168-2020）的相關要求。本標準參考《海洋監(jiān)測規(guī)范第4部分：海水分析》（GB17378.4-2007）、《水質陰離子表面活性劑的測定亞甲藍分光光度法》（GB7494-87）、《海洋監(jiān)測規(guī)范第3部分樣品采集、貯存與運輸》（GB17378.3-2007）、《近岸海域環(huán)境監(jiān)測規(guī)范》（HJ442-2020）、《水質陰離子表面活性劑的測定流動注射-亞甲基藍分光光度法》（HJ826-2017），并根據(jù)省內(nèi)環(huán)境監(jiān)測實際情況，制定出符合我省環(huán)境保護工作要求、適用于海水中陰離子表面活性劑測定的標準方法。標準制訂的基本原則如下：1.2.1方法的檢出限和測定范圍滿足相關生態(tài)環(huán)境標準和環(huán)境工作管理的要求目前，我國生態(tài)環(huán)境評價標準中關于海水中陰離子表面活性劑的標準和標準限值有：《海水水質標準》（GB3097-1997）規(guī)定第一類功能海域水體中陰離子表面活性劑限值為0.03mg/L，第二至四類功能海域水體中限值為0.10，《污水海洋處置工程污染控制標準》（GB18486-2001）規(guī)定利用進入放流管向海域或向排放點含鹽度大于5‰的年概率大于10%的河口水域中陰離子表面活性劑日均限值為10mg/L。本標準中陰離子表面活性劑的方法檢出限為0.007mg/L，低于《海水水質標準》（GB3097-1997）評價標準，方法適用于海水中陰離子表面活性劑的測定，能夠滿足國內(nèi)相關生態(tài)環(huán)境標準和環(huán)境工作管理的要求。1.2.2方法準確可靠，滿足方法各項特性指標的要求6家實驗室對海水中陰離子表面活性劑實際樣品進行正確度和精密度測試，同時開展6家實驗室間的方法適用性檢驗實驗。確保本標準的方法檢出限等指標滿足監(jiān)測要求。1.2.3方法具有普遍適用性，易于推廣使用流動注射法操作簡便、檢出限低、正確度和精密度高，已被廣泛應用檢測分析行業(yè)，我省環(huán)境監(jiān)測及相關檢測實驗室均配備了流動注射分析儀，具有普遍性和易推廣性。2.與現(xiàn)行標準的關系目前，我國現(xiàn)行的各類水質評價標準中，均規(guī)定了水中陰離子表面活性劑的分析方法及限值，見表2。表2水質評價標準中陰離子表面活性劑的分析方法及限值標準名稱標準編號執(zhí)行時段濃度限值（單位：mg/L）地下水質量標準GB/T14848-2017Ⅰ類Ⅱ類Ⅲ類Ⅳ類Ⅴ類不得檢出≤0.1≤0.3≤0.3＞0.3地表水環(huán)境質量標準GB3838-2002≤0.2≤0.2≤0.2≤0.3≤0.3海水水質標準GB3097-1997Ⅰ類Ⅱ類Ⅲ類Ⅳ類≤0.03≤0.10農(nóng)田灌溉水質標準GB5084-2021水作旱作蔬菜≤5.0≤8.0≤5.0污水綜合排放標準GB8978-1996一級標準二級標準三級標準97.12.31前建設單位合成洗滌劑工業(yè)5.01520其它排污單位5.0102098.1.1后建設單位5.01020城鎮(zhèn)污水處理廠污染物排放標準GB18918-2002基本控制項目一級標準二級標準三級標準A標準B標準0.5125污水海洋處置工程污染控制標準GB18486-2001≤10羽絨工業(yè)水污染物排放標準GB21901-2008現(xiàn)有企業(yè)2010.7.1起執(zhí)行新建企業(yè)2008.8.1起執(zhí)行3特別排放限值13.國內(nèi)外相關的研究3.1國內(nèi)相關分析方法研究國內(nèi)外關于水中陰離子表面活性劑的測定的標準，見表3。表3國內(nèi)外相關分析方法研究序號標準名稱適用范圍目標物方法檢出限1JIS

K0126-2019

流動分析用通用規(guī)則水陰離子表面活性劑、揮發(fā)酚、氰化物等可用流動注射分析的物質/2ISO

7875-1:1996

亞甲基藍法飲用水、地表水和廢水陰離子表面活性劑0.05

mg/L3EN

13273-2001高效液相色譜法水陰離子表面活性劑中的非離子物質含量0.04

mg/L4EN

14480-2004電位兩相滴定法GB/T

5173-2018表面活性劑洗滌劑

陰離子活性物含量的測定直接兩相滴定法產(chǎn)品陰離子表面活性劑和洗滌劑中陰離子活性物含量的/5HJ826-2017水質

陰離子表面活性劑的測定

流動注射地下水、地表水、生活污水和工業(yè)廢水陰離子表面活性劑0.04

mg/L6GB

7494-87

水質

陰離子表面活性劑的測定

亞甲藍分光光度法飲用水、地面水、生活污水和工業(yè)廢水陰離子表面活性劑0.05

mg/L7GB

17378.4-2007

海洋監(jiān)測規(guī)范

第4部分:海水分析（23

陰離子洗滌劑

亞甲基藍分光光度法）海水，對有較深顏色的水樣本法受干擾。陰離子洗滌劑0.01

mg/L3.2國外及地區(qū)相關分析方法研究國內(nèi)外關于水中陰離子表面活性劑的測定方法文獻，見表4。表4內(nèi)外相關分析方法研究序號文獻名稱介質使用方法方法檢出限1ContinuousFlowMethyleneBlueActiveSubstancesMethodfortheDeterminationofAnionicSurfactantsinRiverWaterandBiodegradationTestSamples.地表水連續(xù)流動注射亞甲藍分光光度法0.025mg/L2DeterminationofLinearAlkylbenzeneSulfonatesinWaterSamplesbyLiquidChromatography-UVDetectionandConfirmationbyLiquidChromatography-MassSpectrometry.地表水液相色譜質譜法1.5~11.5

mg/L3DevelopmentofaTubularSensorBasedonaPolypyrrole-DopedMembraneforthePotentiometricDeterminationoftheDodecylsulfateAnioninaFIASystem.產(chǎn)品流動注射電位法1.58×10-5mol/L4PolymerChipIncorporatedwithAnionicSurfactantISFETforMicroflowAnalysisofAnionicSurfactants.產(chǎn)品聚合芯微流動分析法1.0×10?6mol/L5碳棒涂膜電極流動注射法測定環(huán)境水樣中的陰離子表面活性劑環(huán)境水樣碳棒涂膜電極流動注射法4.0×10-7

mol/L6流動注射分光光度法測定環(huán)境水樣中的十二烷基硫酸鈉流動注射分光光度法測定水中的陰離子表面活性劑流動注射法測定水中陰離子表面活性劑及條件改進.現(xiàn)代儀器流動注射分光光度法在線測定飲用水中陰離子合成洗滌劑方法的研究環(huán)境水樣流動注射分光光度法0.05

mg/L7流動注射法測定水源水中陰離子表面活性劑水源水酸、堿兩組萃取流動注射法測定0.0016mg/L8在線萃取流動注射法快速測定水體中陰離子表面活性劑環(huán)境水樣在線萃取流動注射法0.0102mg/L9流動注射法測定海水中的陰離子表面活性劑海水流動注射分光光度法0.006mg/L（四）主要條款的說明，主要技術指標、參數(shù)、試驗驗證的論述1.主要條款本文件的章節(jié)由方法研究目標、規(guī)范性引用文件、術語和定義、方法原理、干擾與消除、試劑與材料、儀器與設備、樣品采集與保存、實驗部分、方法比對、結果計算與表示、檢出限、精密度、正確度、質量保證與質量控制、注意事項組成。其中，“實驗部分”與“方法比對”是本文件的主要技術內(nèi)容。本標準規(guī)定了海水陰離子表面活性劑的測定流動注射-亞甲基藍分光光度法。2.主要技術指標、參數(shù)本標準規(guī)定了海水中海水陰離子表面活性劑的測定流動注射-亞甲基藍分光光度法。利用流動注射分析儀自動進樣、在線顯色與光度測定等特點，直接取樣上機測定。通過完整樣品采集與保存方法、試樣制備、樣品干擾及消除、儀器條件等適用性驗證，以及本研究方法與國標方法比對驗證，完成性能指標（方法檢出限、精密度、正確度）、質量保證與質量控制等內(nèi)容試驗驗證，確定各項關鍵技術指標如方法檢出限、精密度、正確度等。并開展外部實驗室驗證，確定本方法的可行性和正確性。從而制定出能夠滿足海洋生態(tài)環(huán)境監(jiān)測要求的流動注射法。本研究的制定技術路線如圖1。

圖1方法研究技術路線圖3.試驗驗證的論述本方法采用流動注射法測定海水中陰離子表面活性劑。參考標準方法HJ826-2017、GB7494-87與GB17378.4-2007，通過對方法的適用性、配套的評價標準以及性能指標（方法檢出限、精密度、正確度）等內(nèi)容的驗證、條件優(yōu)化的研討、干擾的排除及選取6家實驗室對模擬海水、近岸海域、趕潮河段海水樣品進行檢出限、精密度、正確度等驗證。驗證結果表明，流動注射-亞甲基藍分光光度法具有較好的重復性和再現(xiàn)性，方法各項特性指標達到預期要求，能夠應用于測定海水陰離子表面活性劑。4.方法研究報告4.1方法研究的目標4.1.1適用范圍本文件規(guī)定了測定海水中陰離子表面活性劑的流動注射-亞甲基藍分光光度法。本文件適用于海水中陰離子表面活性劑的測定。對有較深顏色的水樣本法受干擾。當檢測光程為10mm時，本方法的檢出限為0.007mg/L（以十二烷基苯磺酸鈉，LAS計），測定下限為0.028mg/L，測定范圍為0.020mg/L～0.500mg/L（以LAS計）。4.1.2指標要求（1）根據(jù)目前資料調(diào)查情況，要求海水中陰離子表面活性劑的檢出限至少達到0.01mg/L。（2）回收率要求：本方法在擬定條件下目標化合物回收率在80~110%之間。（3）精密度和正確度要求：本方法在擬定條件下實驗室內(nèi)平行樣品測試結果相對標準偏差小于10%，正確度實驗測試結果的相對標準偏差小于10%。（4）本方法在擬定條件下與《海洋監(jiān)測規(guī)范第4部分:海水分析（23陰離子洗滌劑亞甲基藍分光光度法）》（GB17378.4-2007）的比對結果無顯著性差異。4.2規(guī)范性引用文件GB7494水質陰離子表面活性劑的測定亞甲藍分光光度法GB17378.3海洋監(jiān)測規(guī)范第3部分樣品采集、貯存與運輸GB17378.4海洋監(jiān)測規(guī)范第4部分海水分析HJ442近岸海域環(huán)境監(jiān)測規(guī)范HJ826水質陰離子表面活性劑的測定流動注射-亞甲基藍分光光度法4.3術語和定義陰離子表面活性劑anionicsurfactants指普通合成洗滌劑的活性成分，本方法中是指使用最廣泛的直鏈烷基苯磺酸鈉（LAS）。4.4方法原理4.4.1流動注射分析儀工作原理在封閉的管路中，將一定體積的試樣注入連續(xù)流動的載液中，試樣與試劑在化學反應模塊中按特定的順序和比例混合、反應，在非完全反應的條件下，進入流動檢測池進行光度檢測。4.4.2化學反應原理樣品中的陰離子表面活性劑與陽離子染料亞甲藍形成亞甲基藍活性物質（MBAS），三氯甲烷萃取，有機相于650nm波長處測量吸光度。參與工作流程見圖2。1.蠕動泵；2.注入閥；3.反應環(huán)；4.相分離裝置；5.檢測池10mm,650nm；R1.堿性亞甲基藍溶液（6.4.16）；R2.酸性亞甲基藍溶液（6.4.17）C.載液（6.4.15）；S.試樣；W1.廢液（三氯甲烷相）；W2.廢液（水相）圖2流動注射-亞甲藍分光光度法測定陰離子洗滌劑的參考工作流程圖4.5干擾和消除GB17378.4-2007提到“對有較深顏色的水樣本法受干擾。有機的硫酸鹽、磺酸鹽、羧酸鹽、酚類以及無機的氰酸鹽、硝酸鹽和硫氰酸鹽等引起正干攏，有機胺類則引起負干擾。”因此，本法研究過程中，參考《海水水質標準（GB3097-1997）》中的監(jiān)測項目，綜合考慮各項干擾物質在海水中的濃度，分別考察色度、無機的硝酸鹽、酚類和有機胺在一定的濃度范圍內(nèi)對海水中陰離子表面活性劑檢測結果的影響。4.5.1色度對檢測結果的影響分別在加標量為0.10mg/L的模擬海水中加入鉑-鈷標準溶液，使樣品色度為0度，5度，10度，20度，30度，50度?？疾焐葘z測結果的影響，結果見圖3(a)。結果表明，色度會對結果產(chǎn)生干擾，因此本法不適用于有色度海水樣品，建議采用其他方法，如色譜法，滴定法等。4.5.2酚類干擾試驗分別在加標量為0.10mg/L的模擬海水中加入0.02mg/L、0.05mg/L、0.10mg/L、0.15mg/L、0.20mg/L的苯酚標準溶液，考察酚類的存在對檢測結果的影響，結果見圖3(b)。結果表明，酚類物質含量在0.20mg/L以內(nèi)時，對檢測結果沒有影響。4.5.3無機硝酸鹽干擾試驗分別在加標量為0.10mg/L的模擬海水中加入0.04mg/L、0.06mg/L、0.08mg/L、0.12mg/L、0.16mg/L的硝酸鹽標準溶液，考察硝酸鹽的存在對檢測結果的影響，結果見圖3(c)。結果表明，硝酸鹽含量在0.16mg/L以內(nèi)時，對檢測結果沒有影響。4.5.4有機胺類干擾試驗分別在加標量為0.10mg/L的模擬海水中加入2.00mg/L、3.00mg/L、5.00mg/L、8.00mg/L、10.0mg/L的苯胺標準溶液，考察苯胺的存在對檢測結果的影響，結果見圖3(d)。結果表明，苯胺含量在10mg/L以內(nèi)時，對檢測結果沒有影響。圖3干擾實驗4.6試劑與材料除非另有說明，分析時均使用符合國家標準的分析純試劑，實驗用水為符合GB/T6682的一級水。4.6.1硫酸：ρ（H2SO4）=1.84g/mL，優(yōu)級純。4.6.2鹽酸：ρ（HCl）=1.19g/mL。4.6.3氫氧化鈉（NaOH）：優(yōu)級純。4.6.4氯化鈉（NaCl）：分析純。4.6.5十水四硼酸鈉（Na2B4O7·10H2O）。4.6.6三氯甲烷（CHCl3）：以戊烯（amylene）或乙醇（alcohol?）穩(wěn)定。注1：三氯甲烷試劑中一般會有氣泡，在分析過程中容易產(chǎn)生周期性氣泡峰，影響測定結果。建議使用前用超聲波儀超聲脫氣20min。三氯甲烷的純度影響反應的穩(wěn)定性和靈敏度，若基線長時間無法穩(wěn)定，可對三氯甲烷進行過濾。4.6.7無水乙醇（C2H5OH）。4.6.8模擬海水：ρ（NaCl）=30g/L。將30.0g氯化鈉（4.6.4）溶解于600ml的水中，溶解后移至1000ml容量瓶中，用水定容至標線，混勻。4.6.9十二烷基苯磺酸鈉（C18H29NaO3S，LAS）。4.6.10亞甲基藍（C16H18N3ClS），指示劑級。4.6.11磷酸二氫鈉（NaH2PO4·2H2O）。4.6.12異丙醇（C3H8O）：分析純。4.6.13堿性硼酸鈉儲備液。稱取1.6g十水四硼酸鈉（4.6.5）和0.34g氫氧化鈉（4.6.3）溶于適量水中，溶解后移至100ml容量瓶中，加水至標線，混勻。4.6.14亞甲基藍儲備液。稱取0.2g亞甲基藍（4.6.10），溶于50ml無水乙醇（4.6.7）中，充分溶后用水定容至100mL，超聲振蕩10min確保充分溶解，用0.22μm膜過濾，濾液儲存于棕色玻璃瓶中，有效期3個月。4.6.15載液在專用試劑玻璃瓶中加入700ml三氯甲烷（4.6.6）和200ml水，超聲波儀超聲20min左右，靜置保存于容器中?，F(xiàn)用現(xiàn)配。4.6.16堿性亞甲基藍溶液。在試劑瓶中加入200ml超純水，加入100ml堿性硼酸鈉儲備液（4.6.13），然后加入36ml亞甲基藍儲備液（4.6.14），混勻后加入100ml無水乙醇（4.6.7），并定容至1000ml，棕色瓶儲存1個月，使用前超聲真空脫氣10分鐘。4.6.17酸性亞甲基藍溶液。在試劑瓶中加入400ml超純水，然后加入56g磷酸二氫鈉（4.6.11），充分溶解后加入50ml無水乙醇（4.6.7），混勻后加入6.8ml濃硫酸（4.6.1），混勻后加入7.6ml亞甲基藍儲備液（4.6.14），最后定容至1000ml，棕色瓶儲存1個月，使用前超聲真空脫氣10分鐘。4.6.18十二烷基苯磺酸鈉標準貯備液：ρ=100.0mg/L（以LAS計）。使用市售的有證標準溶液或稱取0.100g十二烷基苯磺酸鈉（4.6.9），準確至0.001g，溶于50ml水中，然后移至100ml容量瓶中，加水至標線，緩慢混勻。于5℃下保存，可保存2周。4.6.19十二烷基苯磺酸鈉標準使用液：ρ=10.00mg/L（以LAS計）。量取十二烷基苯磺酸鈉標準貯備液（4.6.18）10.00ml至100ml容量瓶中，加水至標線，緩慢混勻。當天配制。4.6.20載流槽清洗液：20%異丙醇（4.6.12）水溶液。4.7儀器和設備4.7.1流動注射儀：包括自動進樣器、化學反應模塊（預處理通道、注入泵、反應通道及流動檢測池，光程一般為10mm，通光管道孔徑約1.5mm）蠕動泵、數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)。4.7.2分析天平：精度為0.1mg。4.7.3過濾裝置：布氏漏斗、吸濾瓶、安全瓶、抽氣泵4.7.4超聲波儀：頻率范圍在20～50kHz。4.7.5一般實驗室常用儀器和設備。4.8樣品的采集與保存4.8.1樣品的采集按照GB17378.3－2007和HJ442.3的相關規(guī)定采集樣品。GB17378.3－2007和HJ442.3中對陰離子表面活性劑海水樣品采集和保存已經(jīng)有了規(guī)定：容器用（1+3）鹽酸或硝酸溶液或鉻酸洗液洗1次，自來水3次，去離子水洗2~3次，萃取液2次；采樣容器一般采用100mL硬質玻璃瓶（G）。采樣時應記錄樣品的名稱、來源、采樣量、保存狀況、采樣點位、采樣日期、采樣人員等信息。采樣人員應應及時填寫采樣記錄或采樣報告。4.8.2樣品的保存將海水樣品分成三份，分別添加濃度為0.1mg/L的LAS。取兩份一份用濃硫酸調(diào)節(jié)pH<2，一份加入1%甲醛，于4℃冷藏箱中避光保存。隨著樣品保存時間延長，分析樣品加標回收率的變化情況，見圖4。結果表明不加硫酸調(diào)節(jié)pH和加入1%甲醛的海水樣品，LAS的加標回收率在第2天后顯著下降，加硫酸調(diào)節(jié)pH的海水樣品，加標回收率在第3天有明顯降低。綜合考慮，若樣品采集后不加硫酸調(diào)節(jié)pH，則樣品需在24小時內(nèi)分析。若加硫酸至pH＜2，于4℃條件下避光冷藏，可在48小時內(nèi)分析。

圖4海水中加標0.1mg/LLAS樣品的存放天數(shù)4.8.2樣品前處理對于有明顯顆粒物的樣品，考慮到陰離子表面活性劑易吸附在懸浮固體或沉積物上，樣品應充分混勻，應用超聲波儀超聲粉碎后進樣。由于流動注射分析儀的管路較細，易造成管路堵塞，因此考慮在上機前是否需對水樣進行過濾，選擇了不同材質的濾膜，包括0.45μm、0.22μm親水聚四氟乙烯（PTFE）、0.22μm聚醚砜（PES），0.22μm尼龍（NYLON）、定性濾紙，對加標量為0.10mg/L的海水樣品分別進行加標回收分析。不同濾膜的加標回收率見圖5。結果表明，實際水樣過濾膜后目標物平均加標回收率有明顯降低，不建議上機前對樣品進行過濾。為防止管路堵塞，將1.0mm的管路替換成1.5mm管路。同時考慮到部分渾濁樣品會對檢測結果的造成影響，故分析了離心分離對實際樣品加標回收率的影響。綜合考慮，不建議上機前對海水樣品進行過濾，若水樣渾濁，上機前應離心分離。圖5前處理條件優(yōu)化

4.9分析步驟本標準按照HJ168-2020的要求確定分析步驟，包括儀器調(diào)試與校準，測定，空白試驗。4.9.1儀器的調(diào)試與校準安裝分析系統(tǒng)，按照儀器說明書給出的最佳工作參數(shù)進行儀器調(diào)試。按儀器操作規(guī)程開機后，進行流路系統(tǒng)的預調(diào)節(jié)，注意避免水相進入流通池。待相分離系統(tǒng)預調(diào)節(jié)后，對流路系統(tǒng)進行細調(diào)以獲得最佳的分析條件。待流路系統(tǒng)穩(wěn)定大約5min后，開始校準和測定。用模擬海水制備陰離子表面活性劑質量濃度（以LAS-計）分別為：0.00mg/L、0.02mg/L、0.05mg/L、0.10mg/L、0.20mg/L、0.50mg/L的標準系列，移取約10ml標準系列溶液分別置于進樣管中，從低濃度到高濃度依次取樣分析，得到不同濃度陰離子表面活性劑的信號值（峰面積）。以信號值（峰面積）為縱坐標，對應的陰離子表面活性劑質量濃度（以LAS計，mg/L）為橫坐標，繪制校準曲線。實驗室內(nèi)繪制校準曲線的試驗數(shù)據(jù)見表5。表5陰離子表面活性劑空白值測定及校準曲線的繪制第一天含量（mg/L）00.020.0空白1空白2峰面積6.26329.2048.9985.27144.8374.66.7855.374曲線y=723.6x+9.9278，r=0.9997空白測定值（mg/L)0.0000.000第二天含量（mg/L）00.020.0空白1空白2峰面積5.88228.9850.5187.98142.9352.65.9435.574曲線y=677.7x+13.208，r=0.9997空白測定值（mg/L)0.0000.000第三天含量（mg/L）00.020.0空白1空白2峰面積5.09720.7043.4378.26149.8370.55.0186.030曲線y=728.6x+5.6434，r=0.9999空白測定值（mg/L)0.0000.001第四天含量（mg/L）00.020.0空白1空白2峰面積9.61219.8042.0777.05147.6376.88.9279.157曲線y=738.5x+5.0629，r=0.9997空白測定值（mg/L)0.0050.0064.9.2不同品牌三氯甲烷對基線的影響三氯甲烷的純度對陰離子表面活性劑的基線影響較大。通過使用國藥沃凱（以乙醇穩(wěn)定，色譜純）、國藥（以戊烯穩(wěn)定）、科密歐（色譜純）、成都科隆、廣化等5種常見品牌的三氯甲烷進行驗證，發(fā)現(xiàn)國藥沃凱和科密歐（色譜純）效果較好，基線平穩(wěn)，其他測試品牌在使用前需進行抽濾。

表6三氯甲烷檢測結果三氯甲烷品牌基線抽濾后基線國藥集團化學試劑有限公司，沃凱（以乙醇穩(wěn)定，色譜純）-國藥集團化學試劑有限公司（以戊烯穩(wěn)定）天津市科密歐化學試劑有限公司，三氯甲烷（色譜純）-成都市科隆化學品有限公司，三氯甲烷（色譜純）廣州化學試劑廠（以戊烯穩(wěn)定）4.9.3鹽度試驗海水和感潮河段水均存在一定鹽度，且鹽度差異較大。因此我們用不同濃度梯度的氯化鈉溶液模擬不同鹽度海水（0‰，10‰，20‰，30‰，40‰）為基質，配置濃度為0.061mg/L的陰離子表面活性劑標準物質，結果見表7。鹽度對標樣的檢測結果影響不大，但是無鹽度水的空白峰面積相對有鹽度的值小，因空白值對最終的結果有影響，因此建議采用鹽度為30‰的模擬海水配置曲線。表7鹽度檢測結果鹽度（‰）標準物質平均濃度（mg/L）空白平均峰面積空白平均濃度（mg/L）00.0634.76800.000100.0647.83150.003200.0638.59800.004300.0627.36070.002400.0639.27950.0054.9.4pH對檢測結果的影響在GB17378.4-2007中陰離子表面活性劑的檢測方法中需要將加硫酸固定劑的水樣的pH調(diào)節(jié)至中性。故在本方法中，我們考察不同pH對檢測結果的影響，以確定是否需要在上機前對水樣進行pH調(diào)節(jié)。分別對鹽度為30‰的模擬海水進行pH調(diào)節(jié)，使pH值在1~10之間。以模擬海水為基質，配置濃度為0.061mg/L的陰離子表面活性劑標準物質，結果見表8。結果表明在pH<10以內(nèi)對檢測結果基本沒有影響，因此采用本方法時，不需要在上機前對水樣進行pH調(diào)節(jié)。表8pH檢測結果pH12345678910測定結果均值（mg/L）0.0640.0630.0630.0620.0640.0620.0620.0600.0620.0634.9.5校準海水中陰離子表面活性劑濃度較低，因此參考GB17378.4-2007中標準曲線各濃度點的檢測，確定了標準曲線范圍為0.00~0.50mg/L。分別將濃度為10.0mg/L的十二烷基苯磺酸鈉標準溶液配制成濃度為0.00mg/L、0.02mg/L、0.05mg/L、0.10mg/L、0.20mg/L、0.50mg/L的標準曲線溶液。線性相關系數(shù)良好（＞0.995），能滿足檢測的要求。海水陰離子表面活性劑標準曲線測定結果如圖6所示。圖6校準曲線4.9.6試樣測定按照與繪制校準曲線相同測定條件，量取約10ml待測樣品進行測定，記錄信號值（峰面積）。如果濃度高于標準曲線最高點，要對樣品進行適當稀釋。4.9.7空白試驗用10ml模擬海水（6.8）代替樣品，按照與樣品分析相同步驟進行測定，記錄信號值（峰面積）。4.9.8方法比對按照《環(huán)境監(jiān)測分析方法標準制修訂技術導則》（HJ168-2020）的相關規(guī)定，分別用本方法和《海洋監(jiān)測規(guī)范第4部分:海水分析（23陰離子洗滌劑亞甲基藍分光光度法）》（GB17378.4-2007）連續(xù)分析7個加標量為0.050mg/L的平行雙樣，計算配對差值，通過配對雙側t檢驗，檢查兩個方法的測試結果是否存在顯著性差異，測試結果見表9。結果表明，P＞0.05，說明兩個方法檢測結果不存在顯著差異。

表9方法配對記錄表平行樣品編號本方法GB17378.4-2007配對差值測定結果(mg/L)10.0510.0490.00220.0470.049-0.00230.0450.047-0.00240.0460.048-0.00250.0470.053-0.00560.0440.049-0.00570.0700.065-0.005平均值(mg/L)0.0500.051-0.001標準偏差SD0.0090.0060.003t統(tǒng)計值-0.989配對樣本顯著性P值0.3164.10結果計算與表示4.10.1結果計算樣品中陰離子表面活性劑的濃度（以LAS計，mg/L）,按照公式（1）進行計算：（2）式中：ρ—樣品中陰離子表面活性劑的質量濃度，mg/L；y—測定信號值（峰面積）；a—校準曲線方法的截距；b—校準曲線方法的斜率；f—稀釋倍數(shù)。4.11.2結果表示當測定結果小于1mg/L時，保留小數(shù)點后3位，測定結果大于等于1mg/L時，保留3位有效數(shù)字。4.12檢出限按照《環(huán)境監(jiān)測分析方法標準制修訂技術導則》（HJ168-2020）的相關規(guī)定，連續(xù)分析7個接近于檢出限濃度的模擬海水加標樣品，計算其標準偏差S。用公式：MDL=S×t（0.99）（連續(xù)分析7個樣品，在99%的置信區(qū)間，t（6,0.99）=3.143）進行計算。其中：t（n-1,0.99）為置信度為99%、自由度為n-1時的t值；n為重復分析的樣品數(shù)。測定下限為4倍檢出限。MDL=t(n-1,0.99)×S（3）式中：MDL——方法檢出限；n——樣品的平行測定次數(shù)；t——自由度為n-1，置信度為99%時的分布（單側）；S——n次平行測定的標準偏差。根據(jù)儀器靈敏度情況，配制7份濃度為0.020mg/L的空白加標樣品，數(shù)據(jù)結果見表10。表10方法檢出限和測定下限計算結果（n=7）平行號試樣（0.020mg/L）測定結果（mg/L）10.02020.01830.01840.02250.01860.02170.023平均值`xi（mg/L）0.020標準偏差Si（mg/L）0.002t值3.143檢出限（mg/L）0.007測定下限（mg/L）0.0284.13精密度分別用模擬海水加標和實際樣品加標進行方法的精密度試驗。樣品加標濃度分別為0.050mg/L、0.100mg/L和0.300mg/L（見表11），每個濃度水平配制6份平行樣品，計算6次測定的平均值、標準偏差、相對標準偏差。結果表明，不同濃度的空白加標水樣的相對標準偏差在0.6%~5.9%，實際樣品加標的相對標準偏差在1.8%~7.3%之間，說明方法的精密度良好。表11方法精密度樣品加標回收計算結果（n=6）（單位：mg/L）樣品平均濃度加標量測定值（mg/L）平均值標準偏差相對標準偏差（%）空白0.0040.0500.0510.0520.0520.0500.0500.0490.0510.0015.90.1000.1040.0950.1010.1070.0980.1050.1020.0054.50.3000.3070.3070.3070.3040.3090.3090.3070.0020.6近岸海域水樣0.0060.0500.0480.0520.0510.0490.0510.0500.0500.0017.30.1000.0960.0990.1010.0950.0920.0930.0960.0033.60.3000.2910.2860.2960.2930.3000.2870.2920.0051.8直排海水樣0.072鹽度：10‰0.0500.1450.1540.1450.1460.1540.1550.1500.0054.10.1000.1730.1810.1650.1770.1790.1680.1740.0063.60.3000.3580.3720.3650.3750.3610.3540.3640.0083.14.14正確度分別用模擬海水加標和實際樣品加標進行方法的正確度試驗。加標濃度分別為0.050mg/L、0.100mg/L和0.200mg/L，每個濃度水平配制6份平行樣品，其相對誤差及加標回收率分析結果見表12。樣品的平均加標回收率在95.7%~102%之間。表12方法正確度加標回收率數(shù)據(jù)（n=6）（單位：mg/L）樣品平均濃度加標量測定值平均值平均加標回收率（%）空白0.0040.0500.0510.0520.0520.0500.0500.0490.0511020.1000.1040.0950.1010.1070.0980.1050.1021020.3000.3070.3070.3070.3040.3090.3090.307102近岸海域水樣0.0060.0500.0480.0520.0510.0490.0510.0500.0501000.1000.0960.0990.1010.0950.0920.0930.09696.00.3000.2910.2860.2960.2930.3000.2870.29297.0直排海水樣0.072鹽度：10‰0.0500.1150.1240.1150.1160.1240.1250.12095.70.1000.1730.1810.1650.1770.1790.1680.1741020.3000.3580.3720.3650.3750.3610.3540.36496.14.15方法的適用性研究用本方法和《海洋監(jiān)測規(guī)范第4部分:海水分析（23陰離子洗滌劑亞甲基藍分光光度法）》（GB17378.4-2007）對不同鹽度、不同濃度的不同區(qū)域海水進行加標回收實驗，加標量為0.05mg/L，樣品差異說明見表13，樣品測定結果見表14。結果表明，兩個方法的加標回收率均在《海洋監(jiān)測規(guī)范》（GB17378.4-2007）方法規(guī)定的60%~110%范圍內(nèi)。表13實際樣品說明海水樣品名稱特征鹽度陰離子表面活性劑濃度遠海海域樣品指距海岸線200海里以外的海域海水樣品。36%未檢出近海海域樣品通常指距海岸線200海里以內(nèi)的海域海水樣品。34.5%未檢出趕潮河段樣品指河口至潮區(qū)界的河段海水樣品。20%未檢出直排海水樣廢水和海水混合的區(qū)域海水樣品10.1%有檢出

表14不同類型海水樣品測定樣品名稱本方法GB17378.4-2007濃度mg/L加標后濃度mg/L加標回收率%濃度mg/L加標后濃度mg/L加標回收率%近岸海域水樣0.0050.0511020.01L0.04998.0趕潮河段樣品0.0060.04794.00.01L0.04998.0遠海海域樣品0.0040.04590.00.01L0.04794.0直排海水樣（鹽度:10.1%）0.0700.11692.00.0650.10886.04.16質量保證和質量控制4.16.1空白試驗每20個樣品或每批次（少于20個樣品/批）至少分析2個空白試樣，空白試樣的測定值應低于方法檢出限。4.16.2標準曲線每批樣品分析均須繪制校準曲線，校準曲線的相關系數(shù)應≥0.9990。每分析20個樣品需用一個校準曲線的中間濃度校準溶液進行校準核查，其測定結果與校準曲線該點濃度的相對偏差應＜±10%。4.16.3精密度和正確度控制根據(jù)HJ442要求，每批樣品應至少測定10%的平行雙樣，應至少測定10%的加標樣品（或有證標準物質），實驗室內(nèi)精密度和正確度的參考標準，見表15。表15實驗室質量控制參考標準分析結果所在數(shù)量級（mg/L）精密度（%）準確度（%）平行雙樣相對偏差實驗室內(nèi)相對標準偏實驗室間相對標準偏加標回收率實驗室內(nèi)相對誤差實驗室間相對誤差1001.0≤5≤1095～105±5±10102.5≤5≤1090～110±5±1015≤10≤1590～110±10±150.110≤10≤1580～110±10±150.0120≤15≤2060～110±15±200.00130≤15≤2060～120±15±200.000150≤20≤2560～120±20±254.17注意事項(1)本方法使用的玻璃器皿，不能用合成洗滌劑清洗，而用鹽酸-甲醇清洗液和去離子水清洗（常規(guī)實驗室玻璃器皿包括移液管、容量瓶、滴定管、量筒、帶PTFE塞子的分液漏斗和燒杯）。(2)三氯甲烷試劑中一般存有大量氣泡，而該模塊并無任何脫氣裝置，在測試中很容易產(chǎn)生周期性氣泡峰，直接影響積峰。建議采用真空抽濾泵對三氯甲烷進行45～60min的抽真空處理，或用氦氣脫氣5分鐘，然后水封。實驗中其他溶液（堿性亞甲基藍溶液、酸性亞甲基藍溶液、甲醇溶液、去離子水）均應放入超聲波清洗器中脫氣20min。否則在實驗中出現(xiàn)氣泡而影響測定結果。(3)實驗結束后，觀察亞甲基藍廢液瓶中是否含有三氯甲烷，若下層有少量三氯甲烷，則說明分離膜的分離效果變差，應檢查膜相分離器或更換分離膜。(4)應注意管路系統(tǒng)的保養(yǎng)，經(jīng)常清洗管路；每次實驗前都應檢查泵管是否磨損，并及時更換已損壞的泵管。經(jīng)常檢查微量閥，如果有顆粒物聚積在微量閥內(nèi)，則必須進行清洗。(5)應防止水相進入流通池，如果流通池與水相接觸，會顯著增加噪音，或者使基線顯著提高，導致檢測不到信號。5.方法驗證5.1方法驗證方案5.1.1驗證單位情況本標準按照《國家生態(tài)環(huán)境標準制修訂工作規(guī)則》（國環(huán)規(guī)法規(guī)〔2020〕4號）、《標準編寫規(guī)則第4部分：試驗方法標準》（GB/T20001.4-2015）及《環(huán)境監(jiān)測分析方法標準制訂技術導則》（HJ/T168-2020）的規(guī)定。選取6家通過計量認證或實驗室認可的實驗室進行方法驗證，各實驗室均具有陰離子表面活性劑測定的儀器設備，儀器設備覆蓋我省主流儀器品牌，通過驗證以確保本標準方法采用的分析技術、規(guī)定的各項技術指標準確可靠。參與方法驗證的實驗室分別是：海南省環(huán)境科學研究院、?？谑猩鷳B(tài)環(huán)境監(jiān)測站、三亞市環(huán)境監(jiān)測中心、五指山市生態(tài)環(huán)境監(jiān)測站、陵水黎族自治縣生態(tài)環(huán)境監(jiān)測站、澄邁縣生態(tài)環(huán)境監(jiān)測站。5.1.2方法驗證內(nèi)容按照《環(huán)境監(jiān)測分析方法標準制修定技術導則》（HJ/T168-2020）的規(guī)定，組織6家有資質的實驗室進行驗證。驗證樣品為標準編制組統(tǒng)一分發(fā)給各驗證實驗室。根據(jù)影響方法的精密度和正確度的主要因素和數(shù)理統(tǒng)計學的要求，編制方法驗證方案，確定樣品類型、含量水平、分析人員、分析設備、分析時間及重復測試次數(shù)等，驗證單位按《環(huán)境監(jiān)測分析方法標準制訂技術導則》（HJ168-2020）的要求完成方法驗證報告。方法驗證報告主要包括檢出限、精密度、正確度等驗證數(shù)據(jù)。儀器參考條件不同型號儀器的最佳測試條件不同，根據(jù)儀器使用說明書優(yōu)化測量條件或參數(shù)，將儀器調(diào)節(jié)至最佳工作狀態(tài)。標準曲線的建立量取適量標準系列溶液分別置于樣品管中，從低濃度到高濃度依次進樣分析，得到不同濃度陰離子表面活性劑的信號值（峰面積）。以信號值（峰面積）為縱坐標，對應的陰離子表面活性劑質量濃度（以LAS計，mg/L）為橫坐標，繪制曲線?；貧w方程按公式（1）計算，曲線及相關系數(shù)為y=bx+a，實際標準曲線應包含0點在內(nèi)的至少6個濃度點，可根據(jù)樣品的實際情況調(diào)節(jié)濃度范圍。y=bx+a(1)式中：y——測定信號值（峰面積）；x——陰離子表面活性劑的質量濃度，mg/L；a——標準曲線截距；b——標準曲線斜率。方法檢出限和測定下限根據(jù)HJ168-2020中關于檢出限的有關規(guī)定，空白試樣中未檢測出目標物的檢出限確定法，配制濃度為0.020mg/L的陰離子表面活性劑標準溶液，按照樣品的全部分析步驟進行測定，平行測定7次，按公式（3）計算檢出限。如果連續(xù)測定7個樣品，在99%的置信區(qū)間，此時t(n-1,0.99)=3.143。以4倍的樣品檢出限作為測定下限，即RQL=4×MDL。MDL=t(n-1,0.99)×S（3）式中：MDL——方法檢出限；n——樣品的平行測定次數(shù)；t——自由度為n-1，置信度為99%時的分布（單側）；S——n次平行測定的標準偏差。方法精密度各驗證實驗室按實驗步驟分別對人工海水及其加標樣品進行測定，每個樣品平行測定6次，并對測定值、實驗室內(nèi)相對標準偏差、實驗室間相對標準偏差、重復性限、再現(xiàn)性限等各項參數(shù)進行了計算。方法正確度及適用性驗證各驗證實驗室按實驗步驟對3類不同海水樣品及其加標樣品進行測定，平行測定6次，并對測定值、實驗室內(nèi)相對誤差、實驗室間相對誤差、相對誤差最終值等參數(shù)進行了計算。各驗證實驗室通過在實際海水樣品中加入一定量的陰離子表面活性劑標準溶液，進行加標回收試驗，計算其加標回收率。5.2方法驗證過程5.2.1主要工作過程首先，通過篩選確定方法驗證單位。按照方法驗證方案準備實驗用品，與驗證單位確定驗證時間。在方法驗證前，參加驗證的分析人員應熟悉和掌握方法原理、操作步驟及流程。方法驗證過程中所用的試劑和材料、儀器和設備及分析步驟符合方法相關要求。方法驗證過程中所用的試劑和材料、儀器和設備及分析步驟應符合方法相關要求。6家驗證實驗室依據(jù)《海水陰離子表面活性劑的測定流動注射-亞甲基藍分光光度法》驗證方案，進行精密度、正確度驗證實驗，同時進行了檢出限的相關實驗。確定驗證報告提交時間。驗證過程中遇到問題及時溝通、交流和解決。5.2.2方法驗證結論《方法驗證報告》見附件。各實驗室驗證結果表明，方法檢出限低于各類海水控制標準限值，能夠滿足測定需求，方法精密度和正確度統(tǒng)計結果能滿足方法特性指標要求。（五）標準中如果涉及專利，應有明確的知識產(chǎn)權說明本標準未涉及專利。（六）采用國際標準或國外先進標準的，說明采標程度，以及國內(nèi)外同類標準水平的對比情況目前，關于水中陰離子表面活性劑的測定方法許多，有光度法、光譜法、連續(xù)流動法、流動注射法等。國內(nèi)外水中陰離子表面活性劑測定現(xiàn)行的標準分析方法見表3，國內(nèi)外相關分析方法研究見表4。本標準參考《海洋監(jiān)測規(guī)范第4部分：海水分析》（GB17378.4-2007）、《水質陰離子表面活性劑的測定亞甲藍分光光度法》（HJGB/T7494-87）、《海洋監(jiān)測規(guī)范第3部分樣品采集、貯存與運輸》（GB17378.3-2007）、《近岸海域環(huán)境監(jiān)測規(guī)范》（HJ442-2020）、《水質陰離子表面活性劑的測定流動注射-亞甲基藍分光光度法》（HJ826-2017），根據(jù)省內(nèi)環(huán)境監(jiān)測實際情況制定，并對方法性能指標（檢出限、精密度、正確度、實際樣品加標測定、方法比對）等方面進行試驗，以獲得適合海水水質標準的流動注射分析方法。驗證結論顯示，該方法具有普遍適用性，易于推廣使用，且與主要國際組織和國家推薦使用的技術方法具有可比性。保證方法標準的科學性、先進性、可行性和可操作性。（七）重大分歧意見的處理依據(jù)和結果由于本標準為地方性基本要求，在制定過程中經(jīng)常與行業(yè)專家、地方有關部門、科研機構、高等院校、有關企業(yè)及其他單位等進行溝通，本標準文本未見重大分歧意見。（八）貫徹標準的要求和措施建議（包括組織措施、技術措施、過渡辦法、實施日期等）1.組織措施由省生態(tài)環(huán)境廳牽頭，加強組織領導和監(jiān)督檢查，確保標準的落實。2.技術措施開展對相關部門和人員的標準宣貫和培訓工作，介紹本標準制訂的原因、過程及意義，講解本標準的主要技術內(nèi)容及本標準實施過程中可能遇到的問題及解決辦法，以求逐步在海南省各級有關單位及企業(yè)推廣實施。3.過渡方法針對不同階段的工作，制定合理的過渡措施，確保各項工作的順利銜接。4.實施日期本文件正式發(fā)布實施之日起。（九）預期效果1.社會效益流動注射分析法準確、快速地測定海水中陰離子表面活性劑，能更好的為環(huán)境保護和治理工作提供真實可靠的依據(jù)，為海南省海水質量管理提供決策支持，為海南自由貿(mào)易試驗區(qū)和美好新海南建設提供重要技術保障，對促進海南島的經(jīng)濟發(fā)展，具有重要的社會效益。2.生態(tài)效益開展海水中陰離子表面活性劑流動分析監(jiān)測技術研究可為海南省海水污染治理提供科學依據(jù)，提升我省在海水陰離子表面活性劑監(jiān)測、生態(tài)風險評估和管控方面的綜合能力，積極地應對海洋污染，推進海南國家生態(tài)文明試驗區(qū)建設，具有重要的生態(tài)效益。（十）其他應予說明的事項無。

參考文獻HJ442.3-2020近岸海域環(huán)境監(jiān)測技術規(guī)范第三部分近岸海域水質監(jiān)測GB7494-87水質陰離子表面活性劑的測定亞甲藍分光光度法GB13199-99水質陰離子洗滌劑的測定電位滴定法GB17378.4-2007海洋監(jiān)測規(guī)范第4部分:海水分析（23陰離子洗滌劑亞甲基藍分光光度法）HJ826-2017水質陰離子表面活性劑的測定流動注射-亞甲基藍分光光度法ISO7875-1：1996\hWaterquality-Determinationofsurfactants-Part1:Determinationof\hanionicsurfactantsbymeasurementofthemethyleneblueindex（MBAS）EN13273-2001 Determinationofthecontentofnon-ionicsubstancesinanionicsurfaceactiveagentsbyhighperformanceliquidchromatography（HPLC）EN 14480-2004 Surface active agents-Determination of anionic surface activeagents-Potentiometrictwo-phasetitrationmethod楊勝科,費曉華.水中陰離子表面活性劑的光度法測定[J].分析科學學報,2004,20（4）:444-445張曉麗,王彬,張曉光等.吸光光度法測定水中微量陰離子表面活性劑[J].理論檢驗-化學分冊,2001,37（6）:283-285李玉,俞志明,宋秀賢,等.膠州灣海水中陰離子表面活性劑的含量及分布[J].海洋與湖沼,2005,36(3):284-288.王玉杰,關勝,郝電等.碳棒涂膜電極流動注射法測定環(huán)境水樣中的陰離子表面活性劑[J].分析化學,2002,30（12）:1455-1458．劉必心,王萬緒,陸用海.離子選擇電極法分析非離子／陰離子表面活性劑體系[J].日用化學工業(yè),2008,38（4）:267-269．齊文啟,孫宗光.流動注射分析（FIA）及其在環(huán)境監(jiān)測中的應用[J].現(xiàn)代科學儀器,1999,(1-2):24-35．肖文,余萍.間隔流動分析和流動注射分析在環(huán)境監(jiān)測中的應用[J].環(huán)境科學動態(tài),2003,(1):40-42．韓曉嫣,邵志剛.高效液相色譜法測定廢水中陰離子表面活性劑[J].凈水技術,2006,25(3):71-73．袁東,付大友,張新申等.流動注射分光光度法測定環(huán)境水樣中的十二烷基硫酸鈉[J].日用化學工業(yè),2007,37(3):201-203．魏良,張新申,代以春等.流動注射分光光度法測定水中的陰離子表面活性劑[J].皮革科學與工程,2008,18(3):54-57．馬琳,王濤.流動注射法測定水中陰離子表面活性劑及條件改進.現(xiàn)代儀器.2007(6):47-51郭少維,陳星,許麗等.流動注射法測定水源水中陰離子表面活性劑[J].水資源與水工程學報,2010,21(3):77-79王麗平,田芹,江林等.在線萃取流動注射法快速測定水體中陰離子表面活性劑[J].巖礦測試,2009,28(6):553-556蘇占峰.流動注射分光光度法在線測定飲用水中陰離子合成洗滌劑方法的研究[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志,2007,l7(7):1223-1224．黃薇,符式錦,周女琬.流動注射法測定海水中的陰離子表面活性劑[C].環(huán)境工程，2017，增刊2.0.HJ/T168-2020環(huán)境監(jiān)測分析方法標準制訂技術導則李國剛,池靖,夏新等編著.環(huán)境監(jiān)測質量管理工作指南.北京:中國環(huán)境科學出版社.Jozanovi?M,Saka?N,Karna?M,etal.Potentiometricsensorsforthedeterminationofanionicsurfactants–areview[J].Criticalreviewsinanalyticalchemistry,2021,51(2):115-137.WyrwasB,Zgo?a‐Grze?kowiakA.Continuousflowmethyleneblueactivesubstancesmethodforthedeterminationofanionicsurfactantsinriverwaterandbiodegradationtestsamples[J].JournalofSurfactantsandDetergents,2014,17(1):191-198.WangkarnS,SoisungnoenP,RayanakornM,etal.Determinationoflinearalkylbenzenesulfonatesinwatersamplesbyliquidchromatography–UVdetectionandconfirmationbyliquidchromatography–massspectrometry[J].Talanta,2005,67(4):686-695.álvarez‐RomeroGA,Morales‐PérezA,Rojas‐HernándezA,etal.DevelopmentofaTubularSensorBasedonaPolypyrrole‐DopedMembraneforthePotentiometricDeterminationoftheDodecylsulfateAnioninaFIASystem[J].Electroanalysis:AnInternationalJournalDevotedtoFundamentalandPracticalAspectsofElectroanalysis,2004,16(15):1236-1243.MasadomeT,KugohS,IshikawaM,etal.Polymerchipincorporatedwithanionicsurfactant-ISFETformicroflowanalysisofanionicsurfactants[J].SensorsandActuatorsB:Chemical,2005,108(1-2):888-892.

附件方法驗證報告方法名稱：海水陰離子表面活性劑的測定流動注射-亞甲基藍分光光度法項目主編單位：海南省環(huán)境監(jiān)測中心站驗證單位：海南省環(huán)境科學研究院、?？谑猩鷳B(tài)環(huán)境監(jiān)測站、三亞市環(huán)境監(jiān)測中心、澄邁縣生態(tài)環(huán)境監(jiān)測站、陵水黎族自治縣生態(tài)環(huán)境監(jiān)測站、五指山市生態(tài)環(huán)境監(jiān)測站項目負責人及職稱：熊曾恒（高級工程師）通訊地址：海南省?？谑邪遵x大道98號電話告編寫人及職稱：熊曾恒（高級工程師）、何書海（研究員）、周女琬（工程師）、陸美環(huán)（助理工程師）、王晟（助理工程師）、王霞（助理工程師）、黃丹（助理工程師）報告日期：2024年03月20日

按照《環(huán)境監(jiān)測分析方法標準制修訂技術導則》（HJ168-2020）的規(guī)定，組織六家有資質的實驗室進行方法驗證。根據(jù)影響方法的精密度和準確度的主要因素和數(shù)理統(tǒng)計學的要求，編制方法驗證報告。1原始測試數(shù)據(jù)本方法的6家驗證實驗室依次為：1-海南省環(huán)境科學研究院、2-?？谑猩鷳B(tài)環(huán)境監(jiān)測站、3-三亞市環(huán)境監(jiān)測中心、4-澄邁縣生態(tài)環(huán)境監(jiān)測站、5-陵水黎族自治縣生態(tài)環(huán)境監(jiān)測站、6-五指山市生態(tài)環(huán)境監(jiān)測站。對《海水陰離子表面活性劑的測定流動注射-亞甲基藍分光光度法》進行方法驗證的結果進行匯總及統(tǒng)計分析，其結果如下：1.1實驗室基本情況附表1-1參加驗證的人員情況登記表編號單位姓名性別年齡（歲）職務/職稱所學專業(yè)從事分析工作年限（年）1海南省環(huán)境科學研究院曹小聰男33工程師化學工程7藍才鑫男31工程師海洋技術82海口市生態(tài)環(huán)境監(jiān)測站蘇益皇男37高級工程師工業(yè)催化7郭昭財女32工程師無機化學63三亞市環(huán)境監(jiān)測中心蔡春茂男42工程師農(nóng)藥學15蘭斌男33助理工程師農(nóng)業(yè)資源與環(huán)境64澄邁縣生態(tài)環(huán)境監(jiān)測站王琦男34站長/工程師土木工程6朱有信男26助理工程師環(huán)境工程35陵水黎族自治縣生態(tài)環(huán)境監(jiān)測站陳國姬女36工程師應用化學10林悄悄女28技術員護理5王草梅女34助理工程師市場營銷76五指山市生態(tài)環(huán)境監(jiān)測站吉敏訥女30工程師環(huán)境工程8黃祎多女30工程師應用化學9附表1-2參加驗證單位儀器情況登記表編號單位儀器名稱規(guī)格型號出廠編號性能情況1海南省環(huán)境科學研究院全自動流動注射分析儀吉天iFIA7iFIA7-S-05-2011234性能良好2?？谑猩鷳B(tài)環(huán)境監(jiān)測站全自動流動注射分析儀吉天iFIA7FIA7-S-05-1903034性能良好3三亞市環(huán)境監(jiān)測中心全自動流動注射分析儀吉天iFIA7iFIA7-S-05-1909075性能良好4澄邁縣生態(tài)環(huán)境監(jiān)測站全自動陰離子表面活性劑檢測儀寶德BDFIA-8000800019041811130206性能良好5陵水黎族自治縣生態(tài)環(huán)境監(jiān)測站全自動陰離子表面活性劑檢測儀寶德BDFIA-8000800032042007280389性能良好6五指山市生態(tài)環(huán)境監(jiān)測站全自動陰離子表面活性劑檢測儀寶德BDFIA-80008000I50AI805290166性能良好附表1-3參加驗證單位試劑及溶劑情況登記表名稱廠家、規(guī)格純化處理方法驗證單位三氯甲烷國藥集團化學試劑有限公司，以戊烯穩(wěn)定抽濾海南省環(huán)境科學研究院亞甲基藍西格瑪奧德里奇（上海）貿(mào)易有限公司，指示劑級/硫酸廣州化學試劑廠，分析純/氫氧化鈉國藥集團化學試劑有限公司，分析純/氯化鈉國藥集團化學試劑有限公司，分析純/磷酸二氫鈉天津市科密歐化學試劑有限公司/無水乙醇西隴科學股份有限公司，分析純/十水四硼酸鈉阿拉丁，分析純/三氯甲烷國藥集團化學試劑有限公司，以戊烯穩(wěn)定抽濾?？谑猩鷳B(tài)環(huán)境監(jiān)測站亞甲基藍西格瑪奧德里奇（上海）貿(mào)易有限公司，指示劑級/硫酸廣州化學試劑廠，分析純/氫氧化鈉廣州化學試劑廠，分析純/氯化鈉國藥集團化學試劑有限公司，優(yōu)級純/磷酸二氫鈉廣州化學試劑廠，分析純/無水乙醇國藥集團化學試劑有限公司，優(yōu)級純/十水四硼酸鈉廣州化學試劑廠，分析純/三氯甲烷科密歐化學試劑有限公司，色譜純/三亞市環(huán)境監(jiān)測中心亞甲基藍西格瑪奧德里奇（上海）貿(mào)易有限公司，指示劑級/硫酸廣州化學試劑廠，分析純/氫氧化鈉廣州化學試劑廠，分析純/氯化鈉廣州化學試劑廠，分析純/磷酸二氫鈉國藥集團化學試劑有限公司，分析純/無水乙醇廣州化學試劑廠，分析純/十水四硼酸鈉國藥集團化學試劑有限公司，分析純/三氯甲烷廣州化學試劑廠，以戊烯穩(wěn)定抽濾澄邁縣生態(tài)環(huán)境監(jiān)測站亞甲基藍阿拉丁，指示劑級/硫酸廣州化學試劑廠，分析純/氫氧化鈉國藥集團化學試劑有限公司，分析純/氯化鈉廣州化學試劑廠，分析純/磷酸二氫鈉國藥集團化學試劑有限公司，分析純/無水乙醇西隴科學股份有限公司，分析純/十水四硼酸鈉西隴科學股份有限公司，分析純/三氯甲烷國藥集團化學試劑有限公司，以戊烯穩(wěn)定抽濾陵水黎族自治縣生態(tài)環(huán)境監(jiān)測站亞甲基藍西格瑪奧德里奇（上海）貿(mào)易有限公司，指示劑級/硫酸廣州化學試劑廠，分析純/氫氧化鈉國藥集團化學試劑有限公司，分析純/氯化鈉國藥集團化學試劑有限公司，分析純/磷酸二氫鈉廣州化學試劑廠，分析純/無水乙醇西隴科學股份有限公司，分析純/十水四硼酸鈉廣東光華科技股份有限公司，分析純/三氯甲烷廣州化學試劑廠，以戊烯穩(wěn)定抽濾五指山市生態(tài)環(huán)境監(jiān)測站亞甲基藍西格瑪奧德里奇（上海）貿(mào)易有限公司，指示劑級/硫酸廣州化學試劑廠，分析純/氫氧化鈉廣東光華科技股份有限公司，分析純/氯化鈉廣東光華科技股份有限公司，分析純/磷酸二氫鈉廣州化學試劑廠，分析純/無