臨床常見(jiàn)病毒的實(shí)驗(yàn)室檢查（微生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)課件）

肝炎病毒掌握甲肝、乙肝病毒的主要生物學(xué)特點(diǎn)、傳播途徑掌握乙肝病毒臨床檢驗(yàn)和防治原則熟悉其他肝炎病毒的致病性和傳播途徑了解肝炎道病毒結(jié)構(gòu)肝炎病毒一、甲型肝炎病毒（一）生物學(xué)特性1、形態(tài)結(jié)構(gòu)屬小RNA病毒科,直徑約為27nm，呈球形，二十面體立體對(duì)稱甲型肝炎病毒形態(tài)模式圖第二節(jié)肝炎病毒HAV電鏡圖肝炎病毒2、抵抗力耐受乙醚、氯仿等脂溶劑耐酸：在pH3的酸性環(huán)境中穩(wěn)定不耐熱：100℃5

min可使之滅活在海水、淡水、毛蚶、泥沙中存活數(shù)天至數(shù)月肝炎病毒3、培養(yǎng)特性易感動(dòng)物：黑猩猩，狨猴，鷹面猴，短尾猴允許性細(xì)胞：Vero、恒河猴胚腎細(xì)胞（FRHK-4）、人肝癌細(xì)胞株（PLC/PRF/S）等在培養(yǎng)細(xì)胞中生長(zhǎng)緩慢，無(wú)CPE肝炎病毒（二）微生物學(xué)檢驗(yàn)HAV-IgM檢測(cè)：早期、快速診斷最可靠的血清學(xué)指標(biāo)HAV-IgG檢測(cè)：主要用于了解既往感染史、疫苗免疫效果評(píng)價(jià)或流行病學(xué)調(diào)查分離培養(yǎng)：原代肝細(xì)胞或恒河猴胚腎傳代株細(xì)胞對(duì)HAV敏感，生長(zhǎng)緩慢，不引起細(xì)胞裂解肝炎病毒（三）臨床意義傳染源：主要為急性患者和隱性感染者傳播途徑：糞－口途徑傳播肝炎病毒HBV流行久遠(yuǎn)、傳播廣泛，是全球性公共衛(wèi)生問(wèn)題全球3.5億人攜帶HBV我國(guó)為高流行區(qū)感染率：60%

HBsAg攜帶率：8%~10%慢性乙肝病人：1000萬(wàn)80%原發(fā)性肝癌與HBV慢性感染有關(guān)

肝炎病毒二、乙型肝炎病毒（一）生物學(xué)特性1．形態(tài)與結(jié)構(gòu)

①小球形顆粒:直徑22nm；②管形顆粒:直徑22nm，長(zhǎng)度在50～700nm之間；③大球形顆粒:即Dane顆粒，直徑42nm。肝炎病毒肝炎病毒2.抗原組成（1）表面抗原HBsAg存在于三型顆粒中,是HBV感染的主要標(biāo)志pres1和preS2抗原的檢作為病毒復(fù)制的指標(biāo)抗-preS抗體陽(yáng)性常見(jiàn)于急性乙肝的恢復(fù)期，表示病毒正在或已經(jīng)被清除?？?HBs：保護(hù)性抗體（中和抗體）乙肝痊愈（臨床）或免疫成功（接種疫苗）的標(biāo)志肝炎病毒（2）核心抗原HBcAg僅存在于Dane顆粒中，刺激機(jī)體產(chǎn)生抗HBc（IgG、IgM）可在感染的肝細(xì)胞核心部位的表面存在，表明病毒在復(fù)制到血液中即被降解為HBeAg，一般血清學(xué)方法檢測(cè)不到HBcAg，而只能檢測(cè)到抗-HBc?？?HBc：對(duì)機(jī)體無(wú)保護(hù)作用抗HBc-IgM：是HBV近期感染或慢性感染者病毒活動(dòng)的標(biāo)志抗HBc-IgG：持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)凡有過(guò)HBV感染者均可陽(yáng)性，并可終身伴隨肝炎病毒（3）e抗原HBeAg僅存在于Dane顆粒中，HBeAg是HBcAg的降解產(chǎn)物，游離存在于血液中，為病毒復(fù)制及強(qiáng)傳染性的指標(biāo)，產(chǎn)生抗－HBe，是預(yù)后良好的征象?？?HBe隨著HBeAg的消失而出現(xiàn)抗-HBe的出現(xiàn)標(biāo)志著病毒復(fù)制減少、傳染性降低保護(hù)作用？肝炎病毒（4）PreS1、PreS2與HBV-DNA成正比是病毒復(fù)制的指標(biāo)

抗-PreS1、抗-PreS2在恢復(fù)期的早期出現(xiàn)陽(yáng)性提示病毒正在或已經(jīng)被清除是預(yù)后良好的指標(biāo)肝炎病毒（二）微生物學(xué)檢驗(yàn)HBV抗原、抗體檢測(cè)血清HBV-DNA檢測(cè)血清DNA多聚酶檢測(cè)肝炎病毒（三）臨床意義傳染源：患者或無(wú)癥狀HBsAg攜帶者

傳播途徑：密切接觸、血液及體液、母嬰傳播乙型肝炎的臨床表現(xiàn)呈多樣性，可由無(wú)癥狀攜帶至急性肝炎、慢性肝炎、重癥肝炎等。病毒不僅存在于肝內(nèi)，也存在于脾臟和血細(xì)胞等。一般認(rèn)為，病毒在細(xì)胞內(nèi)增殖對(duì)肝細(xì)胞的直接破壞作用不大，而機(jī)體對(duì)肝臟的免疫病理?yè)p害才是引起肝炎發(fā)生的主要原因。肝炎病毒三、丙型肝炎病毒（一）生物學(xué)特性有包膜的單正鏈RNA病毒。病毒體呈球形，直徑為30～60nm（二）微生物學(xué)檢驗(yàn)1.檢測(cè)病毒抗體：用ELISA法檢測(cè)抗-HCV2.檢測(cè)病毒RNA：因HCV在血液中含量很少，常用敏感的RT-PCR法肝炎病毒（三）臨床意義主要通過(guò)血液/體液傳播，其他如性傳播、垂直傳播是引起輸血后慢性肝炎和肝硬化的主要原因HCV感染極易轉(zhuǎn)為慢性無(wú)癥狀HCV攜帶者和慢性丙肝者多見(jiàn)人群普遍易感，HCV感染的母親所生嬰兒感染率高誘發(fā)肝外損傷：腎小球腎炎免疫力不牢固肝炎病毒四、丁型肝炎病毒（一）生物學(xué)特性

HDV是一種缺陷病毒由HBsAg構(gòu)成其外殼HDV定位于肝細(xì)胞核內(nèi)在血液中由HBsAg包被形成35-37nm顆粒單負(fù)鏈環(huán)狀RNAHDV結(jié)構(gòu)模式圖

肝炎病毒（二）微生物學(xué)檢驗(yàn)

HDAg是HDV感染的直接標(biāo)志

抗-HD抗體檢測(cè)抗HDV-IgM：是HDV早期感染標(biāo)志抗HDV-IgG：是HDV既往感染的標(biāo)志慢性HDV感染時(shí)，兩種抗體可長(zhǎng)期共存

HDV-RNA HDVRNA是HDV存在及復(fù)制的一個(gè)有用指標(biāo)肝炎病毒（三）臨床意義只能感染HBsAg陽(yáng)性的病人

共同感染(coinfection)：與HBV同時(shí)感染；

重疊感染(superinfection)：在慢性乙型肝炎或HBsAg攜帶者的基礎(chǔ)上再感染HDV。肝炎病毒五、戊型肝炎病毒（一）生物學(xué)特性屬杯狀病毒科，球形，無(wú)包膜，直徑32～34nm，單正鏈RNA一個(gè)血清型（二）微生物學(xué)檢驗(yàn)檢測(cè)HEV：電鏡或免疫電鏡觀察檢測(cè)抗-HEV抗HEV-IgM：是近期內(nèi)HEV感染的標(biāo)志，有早期診斷價(jià)值抗HEV-IgG：HEV感染后可長(zhǎng)期存在，可用于流行病學(xué)調(diào)查HEVRNA肝炎病毒（三）臨床意義主要通過(guò)糞-口途徑傳播，患者多見(jiàn)于20～40歲成年人，潛伏期為2～9w，多數(shù)患者于病后6w即好轉(zhuǎn)或痊愈。少數(shù)患者可表現(xiàn)為重癥肝炎，甚至可導(dǎo)致死亡。孕婦感染時(shí)，發(fā)病率高，病情嚴(yán)重，常發(fā)生流產(chǎn)或死產(chǎn)。HEV致病機(jī)制尚不明了，可能是病毒本身作用及機(jī)體免疫應(yīng)答造成肝細(xì)胞損傷。病后有一定免疫力。肝炎病毒六、其他肝炎相關(guān)病毒1.庚型肝炎病毒

屬黃病毒科，為單股正鏈RNA。主要通過(guò)輸血等非腸道途徑傳播，呈全球分布，我國(guó)主要在非甲至戊型肝炎病人、獻(xiàn)血員、血透病人、器官移植患者及肝癌患者中存在。2.TT型肝炎病毒

是從一例日本輸血后非甲至庚型肝炎病人（TT）血液中發(fā)現(xiàn)的一類新型DNA病毒，屬細(xì)小DNA病毒科，通過(guò)血液和血制品傳播，也可經(jīng)消化道傳播。逆轉(zhuǎn)錄病毒掌握HIV病毒的主要生物學(xué)特點(diǎn)掌握HIV防治原則掌握HIV病毒的傳播途徑熟悉HIV感染的檢驗(yàn)

反轉(zhuǎn)錄病毒包括腫瘤病毒亞科、泡沫病毒亞科和慢病毒亞科人類嗜T細(xì)胞病毒人類免疫缺陷病毒（HIV）

HIV-I型和HIV-II型

獲得性免疫缺陷綜合癥（AIDS）中國(guó)AIDS流行現(xiàn)狀截至2014年2月28日，我國(guó)累計(jì)報(bào)告報(bào)告的HIV/AIDS587182例，死亡138956例?，F(xiàn)存活艾滋病病毒感染者271624例，艾滋病病人176602例。我國(guó)艾滋病疫情總體上保持低流行態(tài)勢(shì)，但依然呈上升趨勢(shì)，幅度較以前有所減緩。據(jù)統(tǒng)計(jì)，自2005年至今，性傳播比例持續(xù)攀升。2014年3月新發(fā)現(xiàn)的HIV/AIDS中，異性性傳播4515例（69.8%），同性性傳播1260例（19.5%），注射毒品傳播430例（6.6%），母嬰傳播36例（0.6%），性接觸加注射毒品傳播13例（0.2%），既往輸血及使用血制品傳播11例（0.2%），既往采血漿傳播5例（0.1%），傳播途徑不詳203例（3.1%）。50歲以上群體和學(xué)生群體所占比例上升，這也是我國(guó)HIV傳播的新特點(diǎn)。知識(shí)拓展

反轉(zhuǎn)錄病毒一、人類免疫缺陷病毒（一）生物學(xué)特性1．形態(tài)與結(jié)構(gòu)RNA，有包膜球形病毒。

關(guān)鍵結(jié)構(gòu)：gp120gp412．HIV復(fù)制（1）吸附----gp120+CD4（2）穿入和脫殼（3）生物合成（4）裝配與釋放

反轉(zhuǎn)錄病毒

3．HIV的理化特性對(duì)熱敏感56℃處理30分鐘失去感染性，但不能完全滅活血清中的HIV

滅活方法是100℃20分鐘對(duì)化學(xué)因素敏感，在室溫下70%酒精只需1分鐘即不能檢出活性；對(duì)紫外線或γ射線不敏感，因此紫外線或γ射線不能滅活HIV病毒。反轉(zhuǎn)錄病毒反轉(zhuǎn)錄病毒（二）微生物學(xué)檢驗(yàn)1．標(biāo)本采集

采集血液、體液標(biāo)本2．HIV檢驗(yàn)

包括HIV抗體、P24抗原、HIV病毒載量、CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)等

抗體檢測(cè)是診斷HIV感染的唯一標(biāo)準(zhǔn)（1)HIV-1P24

HIV-1P24------可用于“窗口期”及HIV-1抗體陽(yáng)性的母親所生嬰兒早期的輔助鑒別診斷（2）血清抗體檢測(cè)

分為篩查和確認(rèn)試驗(yàn)。免疫印跡法----是HIV血清學(xué)檢測(cè)中最常用的確證性試驗(yàn)。篩查陽(yáng)性者必須進(jìn)行確認(rèn)試驗(yàn)反轉(zhuǎn)錄病毒（3）測(cè)定病毒核酸臨床常用于測(cè)定感染者體內(nèi)游離病毒的RNA含量即病毒載量。（4）CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)應(yīng)用流式細(xì)胞儀（FCM）進(jìn)行CD4+T細(xì)胞記數(shù)及占淋巴細(xì)胞的百分率（正常情況下與CD8+T細(xì)胞比例為2:1）CD4+T細(xì)胞數(shù):

＜0.5×109/L時(shí)，為抗反轉(zhuǎn)錄病毒藥物治療的指征；

＜0.2×109/L時(shí)，應(yīng)立刻進(jìn)行卡氏肺孢子菌的預(yù)防治療；

＜0.1×109/L時(shí)，易感染巨細(xì)胞病毒和結(jié)核分枝桿菌。（5）耐藥性檢測(cè)檢測(cè)患者標(biāo)本中HIV基因序列，監(jiān)控變異的發(fā)生，間接估計(jì)藥物耐藥情況。反轉(zhuǎn)錄病毒（三）臨床意義HIV無(wú)癥狀攜帶者和AIDS患者。傳播途徑性接觸、輸血或血制品、母-嬰傳播。傳染源病毒選擇性侵犯CD4+細(xì)胞，細(xì)胞變性、壞死，導(dǎo)致以CD4+細(xì)胞缺陷為主的嚴(yán)重免疫缺陷。1．致病機(jī)制

反轉(zhuǎn)錄病毒（1）急性期：（2）無(wú)癥狀潛伏期：（3）AIDS期:感染后2~6周內(nèi)一般為8~10年通常難以檢測(cè)到HIV抗體血清抗體陽(yáng)性，具傳染性。持續(xù)發(fā)熱、盜汗、失重、不明原因的慢性腹瀉、濕疹、銀屑病、脂溢性皮炎、皮炎、皰疹-帶狀