T-HSPP 0017-2024 含多肽氨基酸水溶肥料

Water-solublefertilizerscontainingpoly2024-08-24發(fā)布2024-09-24實施湖北省植物保護(hù)學(xué)會發(fā)布I 附錄A水溶肥料中多肽含量的測定 I請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利，本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識別這些專利的責(zé)任。1含多肽氨基酸水溶肥料本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了含多肽氨基酸水溶肥料的術(shù)語和定義、要求、試驗方法、檢驗規(guī)則、標(biāo)本標(biāo)準(zhǔn)適用于將以動物源、植物源、微生物發(fā)酵的蛋白質(zhì)為主要原料經(jīng)提取后23.2動物源多肽animalderivedpoly3.3植物源多肽plantderivedpolyp植物源多肽是大豆、小麥、玉米等植物來源的蛋白質(zhì)通過水解獲取的肽鏈及肽鏈片段。3.4微生物代謝多肽microbialmetabolicp微生物代謝多肽是微生物菌利用培養(yǎng)基底物合成代謝獲取的肽鏈及肽鏈3.5含多肽氨基酸水溶肥料water-solublefertilizercontainingpolypeptide含有適量動物源多肽、植物源多肽、微生物代謝多肽的氨基酸水溶均勻的固體或均相的液體，固體分為粉狀和顆粒狀，無明顯機(jī)械雜質(zhì)；液體無3表1含多肽氨基酸水溶肥料（中量元素型）固體產(chǎn)品游離氨基酸含量≥多肽含量≥0.5%中量元素含量1≥3.0%水不溶物含量≤4.0%/pH值（1:250）3.0～9.03.0～9.01、中量元素指鈣、鎂元素含量的總和，產(chǎn)品應(yīng)至少包含一種中量元素；含量不低于0.1%的單一中量元素均應(yīng)計入中量元素含量中。2、水分以生產(chǎn)企業(yè)出廠檢驗數(shù)據(jù)為準(zhǔn)。表2含多肽氨基酸水溶肥料（微量元素型）固體產(chǎn)品游離氨基酸含量≥多肽含量≥0.5%微量元素含量1≥2.0%水不溶物含量≤4.0%/pH值（1:250）3.0～9.03.0～9.01、微量元素指銅、鐵、錳、鋅、硼、鉬含量的總和，產(chǎn)品應(yīng)至少包含一種微量元素，含量不低于0.05%的單一微量元素均應(yīng)計入微量元素含量中，鉬元素含量不高于0.5%。2、水分以生產(chǎn)企業(yè)出廠檢驗數(shù)據(jù)為準(zhǔn)。本標(biāo)準(zhǔn)中所使用的水，在未說明規(guī)格時，應(yīng)試劑，在沒有注明其他要求時，均指分析純試劑；本標(biāo)準(zhǔn)中所用的標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液、標(biāo)液、試劑溶液和指示劑溶液，在未說明配制456.2本產(chǎn)品按批檢驗，以一次投料生產(chǎn)的產(chǎn)品產(chǎn)量為一批。6.3本產(chǎn)品應(yīng)由生產(chǎn)廠的質(zhì)量檢驗部門進(jìn)行檢驗，所有出廠產(chǎn)品符合本標(biāo)準(zhǔn)的要求，6.4以整批產(chǎn)品的包裝桶（袋）數(shù)作為總體的物料的單元數(shù)，液體產(chǎn)品采樣按GB/T66806.5液體產(chǎn)品從選取的包裝瓶中，用兩端開口采樣器全液位采樣：每批產(chǎn)品的采樣總量不得少于1000mL。將采取的樣品混勻后，分裝于兩個清潔干燥具有磨口的廣口瓶或聚66.6檢驗結(jié)果按GB/T8驗。復(fù)檢結(jié)果即使有一項指標(biāo)不符合本標(biāo)準(zhǔn)要求時，則判整批產(chǎn)品為不合7.2本產(chǎn)品使用說明書應(yīng)在包裝容器上，并包括注意事項等內(nèi)容，編寫應(yīng)符合國家標(biāo)G8.5在符合上述條件下，產(chǎn)品的質(zhì)量7附錄A（規(guī)范性）水溶肥料中多肽含量的測定試樣用IEC氨基酸分析法（離子交換色譜法）測定游離氨基酸總含量。試樣用三氯乙酸預(yù)處理，去除沉淀大分子蛋白質(zhì)，提取多肽氨基酸和游離氨基酸,然后用鹽酸溶液全部水解得到酸溶蛋白，用IEC氨基酸分析法測定酸溶蛋白含量。多肽即為酸溶蛋白含量與游離氨基酸總含量的差值。試驗用水應(yīng)符合GB/T6682中一級用水的規(guī)格。使用試劑除特殊規(guī)定外，均為分析純。A.2.1檸檬酸鈉（Na3C6H5O7·2H2O）。A.2.2鹽酸（優(yōu)級純）：12mol/L。A.2.3乙二胺四乙酸二鈉溶液：10g/L。A.2.4鹽酸水解溶液（6mol/L將500mL鹽酸（A.2.2）與500mL水混合，加1g苯酚，混勻。A.2.5三氯乙酸溶液（150g/L稱取150g三氯乙酸，加水溶解并定容至1000mL，A.2.6檸檬酸鈉緩沖液[pH=2.2，C（Na+）=0.2mol/L]：稱取19.6g檸檬酸鈉（A.2.1）,用水溶解并轉(zhuǎn)移至1000mL容量瓶中，加入16.5mL鹽酸（A.2.2硫二甘醇5.0mL,苯酚1g，用水定容并過濾。A.2.7氨基酸標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液：含天冬氨酸、蘇氨酸、絲氨酸、谷氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、胱氨酸、纈氨酸、甲硫氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、賴氨酸、組氨酸和精氨酸共17種氨基酸，各組分濃度均為2.5μmol/mL，應(yīng)使用有證標(biāo)8A.2.8氨基酸標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：準(zhǔn)確移取2mL的氨基酸標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液（A.2.6）置于50mL容量瓶中，以檸檬酸鈉緩沖溶液（A.2.5）定容，各氨基酸組分濃度為100nmol/mL,用安瓿分裝密封，每支約1mL，在2℃~8℃下保存，有效期3個月。A.2.9不同pH值和離子強(qiáng)度的檸檬酸鈉緩沖溶液與茚三酮溶液：按照儀器說明書配制或購買。A.3儀器與設(shè)備A.3.1天平：感量0.1mg和0.01mg。A.3.2氨基酸自動分析儀：具備陽離子交換柱、茚三酮柱后衍生裝置及570nm和440nm光度檢測器。A.3.3離心機(jī)：轉(zhuǎn)速不低于4000r/min。A.3.4真空泵。A.3.6恒溫干燥箱：溫度可達(dá)110℃±2℃。A.3.7旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器或濃縮器：可在室溫至65℃間調(diào)溫，控溫精度±1℃,真空度可低至33.3×10Pa（25mmHg）。A.4操作步驟A.4.1試樣的制備固體樣品經(jīng)多次縮分后，取出約100g，將其迅速研磨至全部通過0.25mm孔徑篩，混合均勻，置于潔凈、干燥的容器中，用于測定。A.4.2試樣溶液的制備稱取上述固體試樣5g，精確至1mg，置于250mL具塞三角瓶中。在10℃~35℃條件下，準(zhǔn)確加入100mL三氯乙酸溶液（A.2.5如樣品形成小球或者團(tuán)塊，先均9質(zhì)后再振蕩提?。?。對于固態(tài)試樣，搖勻后，于150r/min振蕩30min。將上層溶液倒入100mL離心管中，在4000r/min條件下離心5min，上清液為試樣提取液；如上層溶液有漂浮物，需過濾。量取上述試樣提取液0.5mL~5.0mL（精確至0.1mg），置于20mL安瓿或水解管中，加適量水至溶液總體積為5mL，再加入10mL鹽酸水解溶液（A.2.4），置于液氮（A.2.10）中冷凍，使用真空泵抽真空至7Pa(≤5×10-2mmHg）后用噴燈封口或充氮?dú)?min后旋緊管蓋。將安瓿或水解管放在110℃±2℃恒溫干燥箱中，水解22h~24h。冷卻、混勻、開管、過濾，用移液管精確吸取適量的濾液，置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器或濃縮器中，在60℃下抽真空蒸發(fā)至干，必要時，加少許水，重復(fù)蒸干1次~2次。加入3~5mL檸檬酸鈉緩沖溶液（A.2.6）復(fù)溶，使試樣溶液中氨基酸濃度達(dá)到50~250nmol/mL，搖勻，過濾或離心，上清液待上機(jī)測定。注：當(dāng)試樣中含有金屬元素時，則在“冷卻，混勻，開管”后吸取水解液2mL，準(zhǔn)確加入10g/L的乙二胺四乙酸二鈉溶液（A.2.3）2mL，混勻，然后按“過濾，用移液管精確吸取適量的濾液……上清液待上機(jī)測定”進(jìn)行操作。A.4.3測定將氨基酸標(biāo)準(zhǔn)工作溶液（A.2.8）注入氨基酸分析儀，以不同pH值和離子強(qiáng)度的檸檬酸鈉緩沖溶液與茚三酮溶液（A.2.9）作為流動相和衍生劑，適當(dāng)調(diào)整儀器操作程序及參數(shù)和洗脫用緩沖溶液試劑配比，應(yīng)符合JJG1064氨基酸分析儀檢定規(guī)程的要求，并保證蘇氨酸-絲氨酸，甘氨酸-丙氨酸以及亮氨酸-異亮氨酸分離度分別不得小于85%、90%、80%。注入制備好的試樣溶液和相應(yīng)的氨基酸標(biāo)準(zhǔn)工作溶液進(jìn)行測定，每5個樣品（即10個單樣）為一組，組間插入氨基酸標(biāo)準(zhǔn)工作溶液（A.2.8）進(jìn)行校準(zhǔn)。以保留時間定性，單點(diǎn)外標(biāo)法定量。試樣中氨基酸的峰面積應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)工作溶液相應(yīng)峰面積的30%~200%，否則應(yīng)用檸檬酸鈉緩沖溶液（A.2.6）稀釋后重測。按NY/T1975的規(guī)定測定游離氨基酸的含量，檢測結(jié)果保留兩位小數(shù)。A.4.5分析結(jié)果的表述A.4.5.1酸溶蛋白含量以質(zhì)量分?jǐn)?shù)ω1計，數(shù)值以百分率（%）表示，按式（A.1）計1k—氨基酸的種類數(shù)；n—試樣水解溶液稀釋倍數(shù)；Ai—試樣溶液中第i種氨基酸的峰面積；Vhv—試樣水解溶液體積，單位為毫升（mL）；ci—標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中第i種氨基酸的濃度，單位為納摩爾/毫升（nmol/mLMi—第i種氨基酸的摩爾質(zhì)量，單位為克/摩爾（g/molVst0—氨基酸標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣體積，單位為微升(μL）；Asti—氨基酸標(biāo)準(zhǔn)溶液中第i種氨基酸的峰面積；m—試樣的質(zhì)量，單位為毫克（mg）；V0—試樣溶液進(jìn)樣體積，單位為微升(μL）；以兩個平行試樣測定結(jié)果的算術(shù)平均值報告結(jié)果，保留兩位小數(shù)。A.4.5.2多肽含量以質(zhì)量分?jǐn)?shù)Χ計，數(shù)值以百分率（%）表示，按式（A.2）計算Χ=ω1-ω2.................................................