《家用電冰箱除菌性能技術(shù)要求及試驗(yàn)方法》

T/CNLIC00XX－202XPAGEPAGE1T/CNLIC00XX－202XPAGEPAGE2TT/CNLIC00XX－202XICS97.040.30CCSY61團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)T/CNLIC00XX－202X家用電冰箱除菌性能技術(shù)要求及試驗(yàn)方法TechnicalrequirementandtestmethodforeliminatingbacterialperformanceofHouseholdrefrigerator（征求意見稿）20232023-XX-XX發(fā)布2023-XX-XX實(shí)施中國輕工業(yè)聯(lián)合會(huì)發(fā)布家用電冰箱除菌性能技術(shù)要求及試驗(yàn)方法范圍本文件規(guī)定了家用電冰箱除菌性能的技術(shù)要求和評(píng)價(jià)等級(jí)，描述了相應(yīng)的試驗(yàn)條件和試驗(yàn)方法。本文件適用于家用電冰箱（以下簡稱“冰箱”）除菌性能的測(cè)試及評(píng)價(jià)，其他家?guī)в谐阅茈姳淇蓞⒄帐褂谩Ｒ?guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB4789.2食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)菌落總數(shù)測(cè)定GB19489實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1表面除菌surfacesterilization采用化學(xué)、物理等方法去除或減少冰箱內(nèi)物體表面上細(xì)菌的過程。3.2空氣除菌airsterilization采用化學(xué)、物理等方法去除或減少冰箱內(nèi)空氣中細(xì)菌的過程。要求4.1表面除菌表面除菌率應(yīng)不小于90.0%。4.2空氣除菌空氣除菌率應(yīng)不小于90.0%。4.3評(píng)價(jià)等級(jí)在冰箱滿足4.1和4.2條件下，按表1進(jìn)行家用電冰箱除菌等級(jí)的評(píng)價(jià)。表1家用電冰箱除菌等級(jí)評(píng)價(jià)除菌等級(jí)表面除菌率（%）空氣除菌率（%）1級(jí)≥99.0≥99.02級(jí)≥95.0≥95.03級(jí)≥90.0≥90.0試驗(yàn)方法5.1試驗(yàn)條件5.1.1環(huán)境溫濕度試驗(yàn)采取無菌操作技術(shù)，實(shí)驗(yàn)室環(huán)境應(yīng)符合GB19489的要求，實(shí)驗(yàn)室環(huán)境溫度（25±2）℃，相對(duì)濕度不超過75%。5.1.2電源試驗(yàn)電源為交流正弦波，電壓和頻率的波動(dòng)范圍不得超過額定值的±1%。5.1.3樣機(jī)預(yù)處理冰箱放置在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，溫度控制裝置設(shè)定在制造商聲明（使用說明要求）的適合儲(chǔ)藏食品的位置；如制造商沒有聲明，則將溫度控制裝置設(shè)定在智能模式或冷藏4℃、冷凍-18℃。冰箱在試驗(yàn)前，用75%酒精和蒸餾水擦拭間室并晾干；冰箱至少運(yùn)行12h后，開始試驗(yàn)。5.2儀器和設(shè)備試驗(yàn)過程中使用的儀器和設(shè)備如下：a）恒溫培養(yǎng)箱：溫控精度±1℃；b）冷藏箱：溫度控制范圍5℃～10℃；c）二級(jí)生物安全柜；d）電熱干燥箱：室溫～200℃；e）壓力蒸汽滅菌器；f）六級(jí)篩孔空氣撞擊式采樣器；g）氣溶膠發(fā)生裝置：噴出細(xì)菌氣溶膠微粒的直徑90%以上應(yīng)在1μm～10μm之間；h）移液槍、培養(yǎng)皿等實(shí)驗(yàn)室常規(guī)器皿。5.3試驗(yàn)菌種試驗(yàn)所用菌種如下：a）大腸埃希氏菌（Escherichiacoli）CGMCC1.90；b）金黃色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）CGMCC1.89；c）單核增生李斯特氏菌（Listeriamonocytogenes）CGMCC1.10753。其中大腸埃希氏菌和金黃色葡萄球菌為必測(cè)菌種，單核增生李斯特氏菌為選測(cè)菌種。根據(jù)使用要求，可增加其它菌種作為試驗(yàn)用菌，但所有菌種必須由國家相應(yīng)菌種保藏管理中心提供并在報(bào)告中標(biāo)明試驗(yàn)用菌品種及分類號(hào)。5.4試驗(yàn)準(zhǔn)備5.4.1培養(yǎng)基5.4.1.1營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基（NB）的制備牛肉膏3.0g蛋白胨10.0g氯化鈉5.0g制法：取上述成分加入1000mL蒸餾水中，加熱溶解后，0.1mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)使滅菌后pH值為7.2～7.4，分裝，于壓力蒸汽滅菌器內(nèi)121℃滅菌20min。若使用商品化培養(yǎng)基，應(yīng)按照產(chǎn)品明示的配制方法和滅菌條件進(jìn)行配制和滅菌。5.4.1.2營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（NA）的制備牛肉膏3.0g蛋白胨10.0g氯化鈉5.0g瓊脂15.0g制法：取除瓊脂外的其他成分加入1000mL蒸餾水中，加熱溶解后，用0.1mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)使滅菌后pH值為7.2～7.4，加入瓊脂，溶解后分裝，于壓力蒸汽滅菌器內(nèi)121℃滅菌20min。若使用商品化培養(yǎng)基，應(yīng)按照產(chǎn)品明示的配制方法和滅菌條件進(jìn)行配制和滅菌。5.4.1.3PYG液體培養(yǎng)基的制備蛋白胨10.0g酵母提取物5.0g葡萄糖1.0g制法：取上述成分加入1000mL蒸餾水中，加熱溶解后，用0.1mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)使滅菌后pH值為6.8～7.0，加入瓊脂，溶解后，于壓力蒸汽滅菌器內(nèi)115℃滅菌30min。若使用商品化培養(yǎng)基，應(yīng)按照產(chǎn)品明示的配制方法和滅菌條件進(jìn)行配制和滅菌。5.4.1.4PYG瓊脂培養(yǎng)基的制備蛋白胨10.0g酵母提取物5.0g葡萄糖1.0g瓊脂15.0g制法：取除瓊脂外的其他成分加入1000mL蒸餾水中，加熱溶解后，用0.1mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)使滅菌后pH值為6.8～7.0，加入瓊脂，溶解后分裝，于壓力蒸汽滅菌器內(nèi)115℃滅菌30min。若使用商品化培養(yǎng)基，應(yīng)按照產(chǎn)品明示的配制方法和滅菌條件進(jìn)行配制和滅菌。5.4.2接種培養(yǎng)液的制備用含有營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基（NB）的生理鹽水溶液制備大腸埃希氏菌和金黃色葡萄球菌的接種培養(yǎng)液。用于大腸埃希氏菌培養(yǎng)的NB濃度為0.2%，用于金黃色葡萄球菌培養(yǎng)的NB濃度為1.0%。為便于細(xì)菌分散可加入少量表面活性劑吐溫-80，于壓力蒸汽滅菌器內(nèi)121℃滅菌20min。用含有PYG液體培養(yǎng)基的生理鹽水溶液制備單核增生李斯特氏菌的接種培養(yǎng)液，其濃度為0.2%，為便于細(xì)菌分散可加入少量表面活性劑吐溫-80，于壓力蒸汽滅菌器內(nèi)115℃滅菌30min。5.4.3菌種保藏將標(biāo)準(zhǔn)菌株接種于相應(yīng)固體培養(yǎng)基斜面上，在（37±1）℃，培養(yǎng)（24±1）h后，在5℃～10℃下保藏（不得超過1個(gè)月），作為斜面保藏菌。5.4.4菌種活化將斜面保藏菌轉(zhuǎn)接到相應(yīng)固體培養(yǎng)基平板上，在（37±1）℃，培養(yǎng)（24±1）h。每天轉(zhuǎn)接1次。試驗(yàn)時(shí)應(yīng)采用3~5代，24h內(nèi)轉(zhuǎn)接的新鮮細(xì)菌培養(yǎng)物。5.5表面除菌5.5.1菌懸液制備用接種環(huán)從5.4.4新鮮培養(yǎng)物上刮1環(huán)~2環(huán)新鮮細(xì)菌，加入接種培養(yǎng)液中，并依次做10倍梯度稀釋液，選擇菌液濃度為1.0×108CFU/mL~9.0×108CFU/mL的稀釋液作為試驗(yàn)用菌液，按GB4789.2的方法測(cè)定菌液濃度。5.5.2表面除菌試驗(yàn)按下述方法進(jìn)行表面除菌試驗(yàn)：a）將0.45μm無菌濾膜置于無菌培養(yǎng)皿中，用移液管吸取5.5.1中制備的菌懸液0.2mL滴加到濾膜上，將菌液涂布均勻。b）在試驗(yàn)組和對(duì)照組冰箱試驗(yàn)間室中心位置分別放置培養(yǎng)皿，打開培養(yǎng)皿上蓋，試驗(yàn)組開啟除菌程序，對(duì)照組不開啟除菌程序。若試驗(yàn)間室是冷藏間室，則在每層擱架中心位置放置培養(yǎng)皿；試驗(yàn)間室若是抽屜，則在抽屜左中右三個(gè)位置放置培養(yǎng)皿，如圖1所示。試驗(yàn)程序時(shí)間應(yīng)≤24h。圖1抽屜培養(yǎng)皿擺放示意圖c）程序運(yùn)行結(jié)束后，將培養(yǎng)皿從試驗(yàn)組和對(duì)照組冰箱中取出，將濾膜置于裝有10mL無菌生理鹽水的采樣袋中，均質(zhì)器上拍打5min。取洗脫液依次做10倍稀釋，選擇適宜的稀釋度進(jìn)行培養(yǎng)，按GB4789.2的方法進(jìn)行計(jì)數(shù)。對(duì)照組回收的活菌數(shù)應(yīng)不低于1.0×105CFU/片。5.5.3.表面除菌率計(jì)算表面除菌率按照公式（1）計(jì)算：R2=1-A式中：R2——除菌率，用百分比表示（%）A2——試驗(yàn)組平均回收菌數(shù)，用CFU每片表示（CFU/B2——QUOTEB2——對(duì)照組平均回收菌數(shù)，用CFU每片表示（CFU/片）5.6空氣除菌5.6.1樣機(jī)準(zhǔn)備待測(cè)冰箱密封性能要求良好，門封條安裝完好、無縫隙。在冰箱冷藏室門的水平中心線上打兩個(gè)直徑為2cm的孔（一個(gè)是進(jìn)樣孔，一個(gè)是取樣孔；如果冷藏室是單門的冰箱，則孔的位置在門水平中心線的1/3處和2/3處；如果冷藏室是對(duì)開門的冰箱，則孔的位置在左、右兩個(gè)門各自的水平中心線的中點(diǎn)處；孔的位置可以適當(dāng)偏離，但浮動(dòng)距離應(yīng)不超過10cm），取出箱體內(nèi)所有可移除的部件（如層架、擱架、抽屜等），按5.1.3進(jìn)行樣機(jī)處理。。1/21/21/21/21/31/21/31/2冷藏室為單門冰箱的開孔示意圖冷藏室為對(duì)開門冰箱的開孔示意圖5.6.2菌懸液制備用接種環(huán)從5.4.4新鮮培養(yǎng)物上刮1環(huán)~2環(huán)新鮮細(xì)菌，加入相應(yīng)的液體培養(yǎng)基中，并依次做10倍梯度稀釋液，稀釋成所需的濃度。5.6.3空氣除菌試驗(yàn)分別向試驗(yàn)組和對(duì)照組冰箱冷藏室中噴菌，按照不同的氣溶膠發(fā)生裝置設(shè)定壓力、氣體流量和噴菌時(shí)間噴霧染菌。邊噴霧染菌邊用空氣攪拌裝置（如風(fēng)扇）攪拌。噴霧染菌完畢，繼續(xù)攪拌2min，靜止2min。靜止2min后，同時(shí)對(duì)試驗(yàn)組和對(duì)照組冰箱進(jìn)行初始采樣，初始采樣冷藏室空氣中菌數(shù)應(yīng)達(dá)5×104CFU/m3～5×105CFU/m3。采樣結(jié)束后試驗(yàn)組開啟除菌程序，對(duì)照組不開啟除菌程序。運(yùn)行結(jié)束后，進(jìn)行結(jié)束采樣。試驗(yàn)程序時(shí)間應(yīng)≤2h。5.6.4采樣要求試驗(yàn)用六級(jí)篩孔空氣撞擊式采樣器采樣，采樣流量為28.3L/min，采樣時(shí)間依據(jù)預(yù)測(cè)試驗(yàn)確定（一般對(duì)照組和試驗(yàn)組的初始采樣5s～10s，除菌結(jié)束后，對(duì)照組采樣1min~3min，試驗(yàn)組視其消毒效果，如除菌合格采樣3min～5min）。5.6.5培養(yǎng)與結(jié)果觀察采樣后，無菌操作取出平板，置37℃±1℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)（24±1）h進(jìn)行活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。在完成試驗(yàn)組與陽性對(duì)照組采樣后，將未用的同批培養(yǎng)基與上述兩組樣本同時(shí)進(jìn)行培養(yǎng)，作為陰性對(duì)照。若陰性對(duì)照組有菌生長，說明所用培養(yǎng)基有污染，試驗(yàn)無效，更換無菌器材重新進(jìn)行。5.6.6數(shù)據(jù)處理5.6.6.1空氣中含菌量計(jì)算空氣中含菌量按式（2）計(jì)算。X=S28.3式中：X——空氣含菌量，用CFU每立方米表示（CFU/m3）；S——六級(jí)采樣平板上總菌數(shù)，用CFU表示（CFU）；t——采樣時(shí)間，用分