《寄生蜂鑒定 DNA條形碼方法》

T/JSAEXXX—20XXVIII一、工作簡況（一）任務(wù)來源由江蘇沿海地區(qū)農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所提出，由江蘇省農(nóng)業(yè)工程學(xué)會正式立項。（二）協(xié)作單位中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護研究所；鹽城師范學(xué)院。主要工作過程為了確保本標(biāo)準(zhǔn)編制工作的科學(xué)性、權(quán)威性、廣泛性和可操作性，高效、按時完成標(biāo)準(zhǔn)的起草和編制工作，組織熟悉寄生蜂分類鑒定以及DNA條形碼技術(shù)研究的業(yè)內(nèi)專家共同組成工作小組，把關(guān)標(biāo)準(zhǔn)編制的各環(huán)節(jié)內(nèi)容質(zhì)量，直至通過評審。本標(biāo)準(zhǔn)編制過程中，主要開展了以下四方面工作：1.標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容查新2023年9月11日，根據(jù)“關(guān)于征集2023年江蘇省農(nóng)業(yè)工程學(xué)會團體標(biāo)準(zhǔn)項目的通知”精神，立足于推動寄生蜂快速精準(zhǔn)分類技術(shù)的研究，廣泛查閱國內(nèi)外相關(guān)文案資料并進行標(biāo)準(zhǔn)查新后，決定撰寫《寄生蜂鑒定DNA條形碼技術(shù)》，并于2024年2月15日向江蘇省農(nóng)業(yè)工程學(xué)會提交標(biāo)準(zhǔn)制修訂項目立項申請書。2.結(jié)構(gòu)框架確定2024年3月1日，根據(jù)通知相關(guān)要求，由江蘇沿海地區(qū)農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所承擔(dān)的《寄生蜂鑒定DNA條形碼技術(shù)》團體項目，即時組織成立標(biāo)準(zhǔn)編制小組，正式開啟《寄生蜂鑒定DNA條形碼技術(shù)（草案）》的編寫，組織討論了標(biāo)準(zhǔn)的編制原則、工作程序、基本架構(gòu)和主要內(nèi)容，明確了工作計劃、任務(wù)分工及時間節(jié)點。3.方案研討調(diào)研2024年3月1日～3月15日，深入到中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護研究所、鹽城師范學(xué)院等單位進行交流研討，對寄生蜂鑒定的術(shù)語和定義、DNA提取方法、序列比對擴增等技術(shù)問題進行詳細研討，為后續(xù)標(biāo)準(zhǔn)的撰寫和完善提供支持。4.形成標(biāo)準(zhǔn)征求意見稿2024年3月16日～4月9日，在前期文案調(diào)研和實地踏勘工作基礎(chǔ)上，組織編寫了標(biāo)準(zhǔn)文本內(nèi)容和編制說明，根據(jù)專家的建議反復(fù)修改，形成了《寄生蜂鑒定DNA條形碼方法（征求意見稿）》。主要起草人及其所做的工作標(biāo)準(zhǔn)主要起草人來源于江蘇沿海地區(qū)農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所、中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護研究所和鹽城師范學(xué)院3家單位。江蘇沿海地區(qū)農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所的主要起草人有孫星星、王凡和蔣穎潔，主要負責(zé)標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容查新、結(jié)構(gòu)框架制定與整體設(shè)計等；中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護研究所的主要起草人有張禮生研究員，主要負責(zé)DNA條形碼引物的設(shè)計與篩選等；鹽城師范學(xué)院主要起草人有黎文建，主要負責(zé)寄生蜂的形態(tài)學(xué)驗證等。二、標(biāo)準(zhǔn)編制原則和主要內(nèi)容的論據(jù)本技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)在多年寄生蜂鑒定中進行了應(yīng)用與驗證，綜合相關(guān)專家技術(shù)指導(dǎo)意見，采用GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法、GB19489實驗室生物安全通用要求和WS/T230臨床診斷中聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）技術(shù)的應(yīng)用等相關(guān)技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)。嚴(yán)格按照GB/T1.1-2020的要求進行編寫，遵循“針對性、先進性、實用性、統(tǒng)一性、規(guī)范性”的原則，注重標(biāo)準(zhǔn)的可操作性。本標(biāo)準(zhǔn)主要技術(shù)內(nèi)容包括：寄生蜂DNA的提取方法、引物的選擇與設(shè)計、PCR擴增體系與反應(yīng)程序、PCR產(chǎn)物的檢測、DNA測序與拼接、序列比對和結(jié)果判定。根據(jù)寄生蜂分類鑒定研究現(xiàn)狀和存在問題，充分汲取和利用國內(nèi)現(xiàn)有相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)、規(guī)范的精華，使本標(biāo)準(zhǔn)能天敵資源挖掘、農(nóng)業(yè)害蟲管理和生態(tài)平衡維護中發(fā)揮著重要作用。本研究目的在于開發(fā)和優(yōu)化基于DNA條形碼的寄生蜂鑒定技術(shù)，實現(xiàn)對寄生蜂種類的快速、準(zhǔn)確鑒定。不僅能夠加深對寄生蜂生物多樣性的認(rèn)識，而且對于促進生物防治技術(shù)的應(yīng)用、提高農(nóng)業(yè)害蟲管理的效率和生態(tài)安全性具有重要意義。三、主要試驗（或驗證）的分析、綜述報告、技術(shù)經(jīng)濟論證、預(yù)期的社會經(jīng)濟效益項目組于2018-2024年期間通過馬來氏網(wǎng)以及掃網(wǎng)法對沿海濕地、農(nóng)田生態(tài)系統(tǒng)以及桃園生態(tài)系統(tǒng)的寄生蜂進行收集，收集到包括赤眼蜂、姬蜂科、繭蜂科等寄生蜂多種，目前共存有5093頭寄生蜂標(biāo)本，涉及18科150余種，每個標(biāo)本均留有電子照片，初步構(gòu)建了寄生蜂試驗標(biāo)本庫。對桃園內(nèi)57種寄生蜂共109個樣本進行了DNA條形碼測序，得到CO1序列52條，28SrDNA序列94條，ITS1序列75條，16SrRNA序列22條；進行了4種DNA條形碼在寄生蜂鑒定應(yīng)用中的評估，篩選得到對寄生蜂鑒定效果好的DNA條形碼。相關(guān)數(shù)據(jù)將在《中國生物防治學(xué)報》、《Cropprotection》、《Biocontrol》等期刊雜志上發(fā)表。本研究具有顯著的經(jīng)濟效益，通過精確鑒定寄生蜂種類，可以有針對性地選擇對特定害蟲有控制效果的寄生蜂，從而提高生物防治的效率和成功率。這有助于減少對化學(xué)農(nóng)藥的依賴，降低環(huán)境污染，同時減少農(nóng)業(yè)生產(chǎn)成本。本項目也具有顯著的生態(tài)效益，準(zhǔn)確的物種鑒定是生物多樣性研究和保護的基礎(chǔ)。該技術(shù)能夠幫助科學(xué)家更好地了解寄生蜂在生態(tài)系統(tǒng)中的角色和分布情況，為制定保護策略提供科學(xué)依據(jù)，有助于生態(tài)平衡和生物多樣性的保護。四、與國際、國外對比情況在國際上，基于DNA條形碼的物種鑒定技術(shù)已經(jīng)成為生物多樣性研究的重要工具。許多國家和區(qū)域，特別是在北美、歐洲和澳大利亞，這項技術(shù)已經(jīng)被廣泛用于野生動植物的分類、物種新記錄的確認(rèn)、以及入侵物種的監(jiān)測等方面。國際上的科研機構(gòu)和組織，如國際生物多樣性信息標(biāo)準(zhǔn)組織（TDWG）、全球生物多樣性信息設(shè)施（GBIF）、以及加拿大的國際條形碼生命項目（iBOL），都在推動DNA條形碼技術(shù)的發(fā)展和應(yīng)用。這些努力包括建立全球物種數(shù)據(jù)庫、發(fā)展高通量DNA測序技術(shù)以及推廣DNA條形碼在生物多樣性監(jiān)測和環(huán)境DNA分析中的應(yīng)用。五、與現(xiàn)行相關(guān)法律、法規(guī)和強制性國家標(biāo)準(zhǔn)的關(guān)系本文為試驗標(biāo)準(zhǔn)，標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容符合現(xiàn)行法律法規(guī)的要求，與我國現(xiàn)行其他國家標(biāo)準(zhǔn)協(xié)調(diào)一致。六、重大分歧意見的處理過程及依據(jù)無。七、涉及相關(guān)知識產(chǎn)權(quán)的有關(guān)說明無。八、貫徹團體標(biāo)準(zhǔn)的要求和措施建議本標(biāo)準(zhǔn)適用于寄生蜂物種的鑒定，可首先在相關(guān)領(lǐng)域的科研機構(gòu)及社會環(huán)保