DB51T 1175-2010 飼料中苯乙醇胺A的測(cè)定高效液相色譜法

DB51/T1175—2010飼料中苯乙醇胺A的測(cè)定高效液相色譜法四川省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布IDB51/T1175—2010前言 II 12規(guī)范性引用文件 1 1 15試劑和材料 16儀器和設(shè)備 2 28操作方法 29結(jié)果計(jì)算 310重復(fù)性 4附錄A(資料性附錄)色譜圖 5本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A為資料性附錄。本標(biāo)準(zhǔn)由四川省畜牧食品局提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)由四川省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局批準(zhǔn)。本標(biāo)準(zhǔn)由四川省飼料工作總站負(fù)責(zé)起草。本標(biāo)準(zhǔn)起草人：柏凡、李云、趙立軍、張靜、林順全。1飼料中苯乙醇胺A的測(cè)定高效液相色譜法本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了飼料中苯乙醇胺A含量的高效液相色譜法檢測(cè)方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于配合飼料、預(yù)混合飼料和濃縮飼料中苯乙醇胺A的測(cè)定。方法最低定量限為2.0mg/kg。2規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法(GB/T6682-2008,ISO3696:1987,MOD)GB/T20195動(dòng)物飼料試樣的制備3術(shù)語(yǔ)和定義下列定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。3.1苯乙醇胺A2-(4-(nitrophenyl)butan-2-ylamino)-1-(4-methoxyphenyl)ethanol苯乙醇胺A,俗稱克倫巴胺，分子量：344.17分子式Ci?H??N?O?,2-[4-(4-硝基苯基)丁基-2-基氨基]-1-甲氧基苯乙醇，英文名稱為2-(4-(nitrophenyl)butan-2-ylamino)-1-(4-methoxyphenyl)ethanol。化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下：4原理樣品中的苯乙醇胺A以鹽酸甲醇溶液提取，提取液經(jīng)固相萃取柱凈化，用高效液相色譜法進(jìn)行測(cè)定，外標(biāo)法定量。5試劑和材料除方法另有規(guī)定外，試劑均為分析純，實(shí)驗(yàn)室用水符合GB/T6682中一級(jí)水的規(guī)定。25.4苯乙醇胺A對(duì)照品：純度≥95%。5.5混合型陽(yáng)離子固相萃取柱(60mg/3mL),或性能相當(dāng)者。5.60.1%甲酸溶液：取甲酸1.0mL加水定容至1000mL,搖勻，即得。5.7鹽酸-甲醇溶液：取0.1moL/L鹽酸80mL,加入甲醇(5.2)20mL,搖勻，即得。5.9氨化甲醇溶液：取氨水5mL,加入甲醇(5.2)至100mL,混勻。5.10飽和醋酸鉛溶液：在50mL水中加入一定量的醋酸鉛，超聲5min,直至固體不再溶解。5.12標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：根據(jù)需要，臨用時(shí)用稀釋液(5.8)稀釋標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液(5.11),配制成濃度范6.2電子天平：感量0.0001g、感量0.001g。6.3離心機(jī)：可達(dá)5000r/min(相對(duì)離心力為2988g)。8.1試樣提取3稱取試樣2g(精確到0.001g),置于50mL離心管中，準(zhǔn)確加入鹽酸甲醇溶液(5.7)19mL和1mL飽和醋酸鉛溶液(5.10),充分搖動(dòng)30s,充分振蕩20min,然后于離心機(jī)上5000r/min離心10min,8.2試樣凈化固相萃取柱(5.5)分別用3mL甲醇和3mL水活化，準(zhǔn)確移取5mL上清液(8.1)過(guò)柱，分別用2mL水、8.2.1液相色譜參考條件柱溫：30℃;流動(dòng)相：0.1%甲酸溶液：乙腈，梯度洗脫，梯度見表1;表1梯度洗脫條件時(shí)間(min)0.1%甲酸溶液(%)乙腈(%)28.2.2定量測(cè)定9結(jié)果計(jì)算9.1.1飼料中苯乙醇胺A的含量X,以毫克每千克(mg/kg)表示，單點(diǎn)校正按公式(1)計(jì)算：Pi——試樣溶液峰面積值；Cs——標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，單位為微克每毫升(μg/mL);