DB4505T 0006-2023 島礁海參生態(tài)增殖技術(shù)規(guī)范

4505TechnicalspecificationforecologicI 1 1 1 2 2 2 2 2 2 2 3 38生態(tài)增殖 38.1苗種轉(zhuǎn)運(yùn) 38.2適應(yīng)性馴化 38.3底播增殖 4 4 4 411效果評(píng)估 4 4 5 512管理 5附錄A(規(guī)范性)海參生態(tài)增殖放流情況記錄表 6附錄B(資料性)基于環(huán)境DNA的海參豐度計(jì)算 7 7 7 7 7附錄C(資料性)基于微衛(wèi)星分子標(biāo)記的海參增殖群體回捕占比率計(jì)算 9 C.6海參回捕抽樣樣本的遺傳區(qū)分及回 本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定1島礁海參生態(tài)增殖技術(shù)規(guī)范GB/T12763.6海洋調(diào)查規(guī)范第6部分：海洋SC/T9401.11水生生物增殖放流技術(shù)規(guī)程第11部分：投放生態(tài)增殖ecologicalenhanc適應(yīng)性馴化adaptivedome通過(guò)播撒底棲生物苗種到適合的海底生境中，利用天然生產(chǎn)力增加放流種群產(chǎn)量的過(guò)從環(huán)境樣本中提取的所有DNA的集合，包括環(huán)境微生物以及從生物體上脫落下來(lái)的活細(xì)胞DNA和因24海域選擇4.1自然條件類的海參，篩選確定海參生態(tài)增殖的海域。增殖海域應(yīng)生態(tài)環(huán)4.2海水理化條件表1增殖海域海水理化因子要求糙刺參(S.horrens)、玉足海參(Holothurialeucospilota)和糙海參(H.scabra)。6種苗培育及苗種要求6.2用于生態(tài)增殖的參苗應(yīng)活力強(qiáng)、外觀無(wú)損傷、無(wú)畸形、規(guī)格整齊。規(guī)格應(yīng)符合表2的要求。表2生態(tài)增殖海參苗種規(guī)格規(guī)格等級(jí)g/頭小規(guī)格中規(guī)格7苗種檢驗(yàn)檢疫3規(guī)格合格率≥90%以上，死亡個(gè)體比例、傷殘采用PCR方法對(duì)引起海參腐皮病的弧菌病原進(jìn)行檢測(cè)，無(wú)病害8生態(tài)增殖8.1苗種轉(zhuǎn)運(yùn)a)在參苗運(yùn)輸桶或塑料袋內(nèi)加入清潔海水，加水量不超過(guò)容器體積的2/3;制在小規(guī)格參苗150頭/L或中規(guī)格參苗100頭/L或大規(guī)格參苗50頭/L;內(nèi)充入純氧，氧氣與水體體積比為1:3,并用寬橡皮筋軋緊袋口；e)將運(yùn)輸桶或塑料袋放入轉(zhuǎn)運(yùn)車內(nèi)，運(yùn)送至待增殖海域。將海參苗種運(yùn)輸至待增殖海域后，在海域淺水區(qū)放置規(guī)格為2m×2m×2m的沉水式小型網(wǎng)箱，使其底部與海底接觸，每個(gè)網(wǎng)箱可暫養(yǎng)小規(guī)格參苗4萬(wàn)頭或中規(guī)格參苗3萬(wàn)頭或大規(guī)格參苗2萬(wàn)頭，暫養(yǎng)時(shí)間為3d,暫養(yǎng)期間每天觀察參苗的攝食和存活情況。8.3底播增殖8.3.1底播時(shí)間8.3.2底播天氣選擇晴朗、多云或陰天進(jìn)行海參底播生態(tài)增殖，海面最大風(fēng)力≤5級(jí)，氣溫≤35℃。8.3.3運(yùn)輸船及暫養(yǎng)桶配置移動(dòng)式增氧泵，可平穩(wěn)放置暫養(yǎng)桶。暫養(yǎng)桶體積為100L~300L,每個(gè)暫養(yǎng)桶放置增氧氣石1個(gè)，桶48.3.4苗種運(yùn)輸以抄網(wǎng)將參苗從暫養(yǎng)網(wǎng)箱內(nèi)撈至裝有清潔海水的暫養(yǎng)桶內(nèi)，密度控制在小規(guī)格參苗150頭/L或中規(guī)格參苗100頭/L或大規(guī)格參苗50頭/L,運(yùn)輸至底播預(yù)定海域。8.3.5苗種底播船速：2m/s~4m/s,投放密度：0.1頭/m2~0.2頭/m2,苗種底播按照SC/T9401.11中的方法進(jìn)行，記錄投放中心位點(diǎn)的經(jīng)緯度、投放數(shù)量和覆蓋范圍，填寫海參增殖放流情況記錄表(見附錄A)。9增殖容量不超過(guò)增殖海域歷史上礁棲海參最大捕撈產(chǎn)量的2倍。10海參豐度監(jiān)測(cè)10.1潛水員和設(shè)備按GB/T12763.6的規(guī)定進(jìn)行潛水員配備和設(shè)備準(zhǔn)備。10.2潛水?dāng)嗝嬖O(shè)置在生態(tài)增殖海域每平方公里設(shè)置1個(gè)監(jiān)測(cè)斷面，斷面應(yīng)均勻分布于生態(tài)增殖海域，每個(gè)斷面寬1.2m,直線距離50m,斷面設(shè)置方法為：在監(jiān)測(cè)海域內(nèi)，通過(guò)潛水設(shè)定起點(diǎn)，沿礁石走向拉皮尺至終點(diǎn)，起點(diǎn)到終點(diǎn)總距離為50m。10.3豐度監(jiān)測(cè)與計(jì)算潛水員沿皮尺方向進(jìn)行斷面內(nèi)海參調(diào)查，觀察到的海參個(gè)體均計(jì)入海參數(shù)量，并根據(jù)海參形態(tài)辨別海參種類，進(jìn)行斷面內(nèi)海參數(shù)量統(tǒng)計(jì)。調(diào)查海域的海參豐度計(jì)算見公式(1):Asc——調(diào)查海域的海參豐度，單位為頭/hm2;S;——第i個(gè)斷面內(nèi)觀察到的海參數(shù)量，單位為頭。11效果評(píng)估11.1基于海參豐度的增殖效果評(píng)估11.1.1生態(tài)增殖實(shí)施一年后，潛水調(diào)查海參豐度，基于海參豐度的生態(tài)增殖效果評(píng)估值(Ro)計(jì)算見Ro——生態(tài)增殖效果評(píng)估值，用%表示；Ao?——實(shí)施一年后生態(tài)增殖海域的海參豐度，單位為頭/hm2;511.1.2按照表4的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)行海參生態(tài)增殖效果的分級(jí)評(píng)估。表4基于海參豐度的生態(tài)增殖效果評(píng)估分級(jí)增殖效果評(píng)估分級(jí)優(yōu)良差11.2.1生態(tài)增殖實(shí)施一年后，調(diào)查增殖海域底層海水中的生態(tài)增殖種類海參DNA豐度(方法見附錄B),基于環(huán)境DNA的海參生態(tài)增殖效果評(píng)估值(RE)計(jì)算見公式(3):RE生態(tài)增殖效果評(píng)估值，用%表示；11.2.2按照表5的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)行海參生態(tài)增殖效果的分級(jí)評(píng)估。表5基于環(huán)境DNA的海參生態(tài)增殖效果評(píng)估分級(jí)增殖效果評(píng)估分級(jí)優(yōu)良差11.3基于增殖群體回捕占比率的增殖效果評(píng)估參增殖群體回捕占比率的計(jì)算方法(見附錄C)計(jì)算增殖群體回捕占比率(Ra)。11.3.2按照表6的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)行海參生態(tài)增殖效果的分級(jí)評(píng)估。表6基于增殖群體回捕占比率的海參生態(tài)增殖效果評(píng)估分級(jí)增殖效果評(píng)估分級(jí)優(yōu)良差6pH7分別針對(duì)所有用于生態(tài)增殖的海參種類的線粒體COI基因或基因組DNA特異區(qū)域設(shè)計(jì)種特異性qPCR!=6.02×10#×$%&?(660×&!)×10'(·········································(B.1)ST——質(zhì)粒濃度，單位為拷貝/μL；CON——質(zhì)粒檢測(cè)濃度，單位為μg/μL；NT——質(zhì)粒堿基數(shù)量，單位為bp。用本文件B.1設(shè)計(jì)的特異性引物進(jìn)行qPCR擴(kuò)增，以測(cè)得的擴(kuò)增循環(huán)數(shù)(Ct值)為縱坐標(biāo)，以質(zhì)粒濃度的對(duì)使用標(biāo)準(zhǔn)采水器收集海參生態(tài)增殖海域的底層海水，每個(gè)點(diǎn)采集膜對(duì)底層海水進(jìn)行過(guò)濾，剪碎濾膜，采用海洋動(dòng)物組織基因組DNA提取試劑盒對(duì)濾膜上的生物樣本進(jìn)行B.4.2環(huán)境DNA的qPCR擴(kuò)增及增殖種擴(kuò)增體系為20μL，測(cè)量樣品Ct值，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線，求得Ct值8在調(diào)查海域至少設(shè)置采樣點(diǎn)6個(gè)，采集采樣點(diǎn)海域的底層海水500mL，提取環(huán)境DNA，并按照本文件B.4.2的方法對(duì)樣品中生態(tài)增殖種類海參的DNA進(jìn)行定量，底層海水中生態(tài)增殖種類海參DNA豐度的計(jì)算）：=∑∑)?+··························································a——生態(tài)增殖的海參種類個(gè)數(shù)；AEij——調(diào)查海域第i個(gè)采樣點(diǎn)底層海水中第j種生態(tài)增殖種類海參DNA豐度，單位為拷貝/mL。9樣本采集后，用剪刀剪取一塊200mg～500mg的海參體壁組織，置于10mL離心管中，加入5mL95%采用常規(guī)的海洋動(dòng)物組織基因組DNA提取試劑盒提取海參樣本DNA，DNA濃度≥50ng/μL，對(duì)于每個(gè)用于生態(tài)增殖的海參種類，分別篩選具有種特異性的高度多態(tài)性SSR標(biāo)記。篩選方法為：采集不同地理分布的各種海參群體，進(jìn)行基因組測(cè)序并利用MISA軟件分別查找具有地理差異的各種海組中分別篩選出20個(gè)～30個(gè)具有高度多態(tài)性伸6min。采用遺傳分析儀對(duì)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行分型，獲得所有海C.6海參回捕抽樣樣本的遺傳區(qū)分及回捕占比利用本文件C.5的分型結(jié)果，通過(guò)GenAIEx6.51b2和原生種群間的遺傳距離，如某一種類海參回捕抽樣樣本與該種類增殖苗種群體具有相似的分子遺傳特征，且聚為一類時(shí)，可確定其為該種類增殖群統(tǒng)計(jì)每種海參回捕抽樣樣本中增殖群體的回捕個(gè)體數(shù)，計(jì)算海參增殖群