地標(biāo)-標(biāo)準(zhǔn)文本-混合型飼料添加劑中解熱鎮(zhèn)痛類(lèi)藥物測(cè)定技術(shù)規(guī)范

ICS65.120CCSB46DBDeterminationofFourAntipyreticandAnalgesicDrugsinmixedfeedadditives:paracetamol,dipyrone,aminopyrineandantipyrine20××-××-××發(fā)布20××-××-××實(shí)施上海市市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布DB/T××××—20XX本文件按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專(zhuān)利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別這些專(zhuān)利的責(zé)任。本文件由上海市農(nóng)業(yè)農(nóng)村委員會(huì)提出，上海市畜牧業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)提出并歸口。本文件起草單位：上海市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心。本文件主要起草人：1DB/T××××—20XX混合型飼料添加劑中解熱鎮(zhèn)痛類(lèi)藥物測(cè)定技術(shù)規(guī)范本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了混合型飼料添加劑中對(duì)乙酰氨基酚、安乃近、氨基比林、安替比林四種解熱鎮(zhèn)痛類(lèi)藥物的檢測(cè)試驗(yàn)的基本要求（包括樣品前處理要求、儀器要求、結(jié)果判定等）。本標(biāo)準(zhǔn)適用于指導(dǎo)混合型飼料添加劑中對(duì)乙酰氨基酚、安乃近、氨基比林、安替比林四種解熱鎮(zhèn)痛類(lèi)藥物的高效液相色譜法和液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法分析試驗(yàn)。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T20001.5標(biāo)準(zhǔn)編寫(xiě)規(guī)則第5部分：規(guī)范標(biāo)準(zhǔn)GB/T23182飼料中獸藥及其他化學(xué)物檢測(cè)試驗(yàn)規(guī)程GB/T27417合格評(píng)定化學(xué)分析方法確認(rèn)和驗(yàn)證指南GB/T20195動(dòng)物飼料試樣的制備3術(shù)語(yǔ)和定義GB/T27417-2017、GB/T32467-2015中界定的術(shù)語(yǔ)和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。4采樣和樣品制備按GB/T14699規(guī)定的方法和程序進(jìn)行采樣。采樣對(duì)象只限于混合型飼料添加劑。按GB/T20195制備樣品，至少200g，粉碎使其全部通過(guò)0.425mm孔徑的試驗(yàn)篩，充分混勻，裝入密閉容器中，備用。5樣品前處理要求5.1對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取目標(biāo)對(duì)照品適量，用甲醇或者其他適宜溶劑配制成濃度合適的溶液，作為液相色譜法及液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法的對(duì)照品溶液。5.2供試品溶液的制備一般包含提取、凈化、富集/稀釋等操作。首先稱(chēng)取樣品細(xì)粉適量，用甲醇或者其他適宜溶劑（超聲）定量溶解，凈化，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液定量稀釋?zhuān)ㄏ♂尡稊?shù)要確保不造成儀器污染或光譜圖失真即得；液體制劑量直接精密量取或稱(chēng)取適量，稀釋?zhuān)吹?。?duì)于含有高濃度的有機(jī)鹽和乳化劑等存在強(qiáng)烈的基質(zhì)效應(yīng)輔料的產(chǎn)品，應(yīng)適當(dāng)增加前處理步驟。提取效率可用以下方法進(jìn)行試驗(yàn)：a)用陽(yáng)性的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)或水平測(cè)試的陽(yáng)性樣品進(jìn)行試驗(yàn)；b)陽(yáng)性樣品用同一溶劑反復(fù)提取，觀察被分析物的濃度變化；c)用不同提取技術(shù)或不同提取溶劑進(jìn)行比較。6儀器要求2DB/T××××—20XX6.1液相色譜—二極管陣列法高效液相色譜法本標(biāo)準(zhǔn)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)根據(jù)可疑添加物性質(zhì)，參照藥品國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)、獸藥國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)或者獸藥殘留檢測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)的條件自建。6.2液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法液質(zhì)聯(lián)用條件根據(jù)可疑添加物性質(zhì)自建，采用離子掃描（SRM）或多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）。定性離子對(duì)選用獸藥殘留檢測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)中的定性離子對(duì)或者符合至少4個(gè)識(shí)別點(diǎn)數(shù)的要求。6.3液相色譜—高分辨質(zhì)譜法本標(biāo)準(zhǔn)中所使用的高分辨質(zhì)譜儀在執(zhí)行目標(biāo)物篩查確認(rèn)程序時(shí)應(yīng)符合實(shí)際分辨率不小于20000[質(zhì)荷比(m/z)等于200,按半峰寬(FWHM)計(jì)］，質(zhì)量準(zhǔn)確性相對(duì)偏差不大于5ppm(m/z等于200)的基本要求；在同時(shí)執(zhí)行非目標(biāo)物分析程序時(shí)應(yīng)符合實(shí)際分辨率不小于70000(m/z等于200,按FWHM計(jì)質(zhì)量準(zhǔn)確性相對(duì)偏差不大于3ppm(m/z等于200)的基本要求。儀器應(yīng)定期進(jìn)行校準(zhǔn)調(diào)諧，確保篩查過(guò)程中處于正常工作狀態(tài)，達(dá)到以上要求。參考條件見(jiàn)附錄A。7結(jié)果判定7.1定性7.1.1液相色譜法：分別記錄對(duì)照品和供試品溶液的色譜圖與光譜圖；通過(guò)與對(duì)照品液相色譜圖保留時(shí)間、光譜圖的比對(duì)，確定供試品溶液中是否含有疑似目標(biāo)添加物。在供試品和對(duì)照品濃度接近的情況下，供試品色譜圖中如出現(xiàn)與對(duì)照品峰保留時(shí)間一致的色譜峰（差異不大于±2.5%）；在一定的波長(zhǎng)范圍內(nèi)，兩者光譜圖無(wú)明顯差異；最大吸收波長(zhǎng)一致（差異不大于±2nm），判為檢出。7.1.2液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法：分別記錄對(duì)照品和供試品溶液中的特征離子質(zhì)量色譜圖；通過(guò)與對(duì)照品溶液色譜圖保留時(shí)間、離子豐度比的對(duì)比，確定供試品溶液中是否含有可疑添加物。供試品色譜圖中如出現(xiàn)與對(duì)照品峰保留時(shí)間一致的色譜峰（差異不大于±2.5%）；供試品離子豐度比應(yīng)與對(duì)照品的一致，判為檢出。7.1.3液相色譜高分辨質(zhì)譜法：分別記錄對(duì)照品和供試品溶液中的液相色譜圖及一級(jí)質(zhì)譜圖與二級(jí)質(zhì)譜圖；通過(guò)與對(duì)照品溶液色譜圖保留時(shí)間、質(zhì)譜圖的對(duì)比，確定供試品溶液中是否含有可疑添加物。結(jié)果判定：供試品色譜圖中如出現(xiàn)與對(duì)照品峰保留時(shí)間一致的色譜峰（保留時(shí)間相對(duì)偏差不大于2.5%供試品質(zhì)譜圖與對(duì)照品的應(yīng)一致（包括分子離子和至少一個(gè)碎片離子，質(zhì)量數(shù)差異小于等于5ppm），判為檢出非法添加物。供試品與對(duì)照品分子離子峰的質(zhì)量數(shù)偏差不大于5ppm，且二級(jí)質(zhì)譜圖與對(duì)照品的二級(jí)質(zhì)譜圖一致，判為檢出。具體要求應(yīng)符合表1判定條件。表1目標(biāo)物確認(rèn)判定條件判別項(xiàng)判定條件保留時(shí)間化合物的保留時(shí)間應(yīng)至少大于死時(shí)間的2倍。目標(biāo)物與參考標(biāo)準(zhǔn)品以相同條件測(cè)定所獲保留時(shí)間的絕對(duì)偏差應(yīng)不大于0.2min。質(zhì)量準(zhǔn)確性一級(jí)母離子的mlz相對(duì)偏差亥5ppm;二級(jí)子離子的mlz相對(duì)偏差10ppm;當(dāng)mlz<200時(shí)，其絕對(duì)偏差應(yīng)<1mDa。DB/T××××—20XX同位素峰應(yīng)將確認(rèn)樣品調(diào)整至適當(dāng)?shù)倪M(jìn)樣濃度確保主要同位素峰可測(cè)，同位素峰的mlz應(yīng)符合目標(biāo)物確認(rèn)的質(zhì)量準(zhǔn)確性要求。碎片相對(duì)離子豐度比比較二級(jí)碎片質(zhì)譜圖，其主要碎片離子有2個(gè)或2個(gè)以上符合表中質(zhì)扯準(zhǔn)確性要求，且其相對(duì)離子豐度比符合表3的最大允許偏差要求。7.2定量通過(guò)定性判別確認(rèn)為目標(biāo)物后，用標(biāo)準(zhǔn)曲線或者單點(diǎn)校準(zhǔn)方式計(jì)算目標(biāo)物含量。按照試劑空白、樣品空白、標(biāo)準(zhǔn)曲線、試樣的順序進(jìn)樣測(cè)定。標(biāo)準(zhǔn)曲線至少6個(gè)點(diǎn)（包括零點(diǎn)）均勻分布于線性范圍內(nèi)，其最低點(diǎn)應(yīng)低于或等于方法定量限對(duì)應(yīng)的濃度；定量方法的線性回歸方程相關(guān)系數(shù)不低于0.99。(資料性)參考條件4DB/T××××—20XX1.1前處理參考條件平行做兩份試驗(yàn)。稱(chēng)取試樣2g（精確至0.01g于50mL離心管中，準(zhǔn)確加入25mL甲醇，渦旋1min，振蕩提取20min，9000r/min離心5min，準(zhǔn)確移取上清液5mL于10mL棕色容量瓶中，用甲醇定容，混勻，微孔濾膜過(guò)濾，待測(cè)。1.2液相色譜參考條件液相色譜參考條件如下：a)色譜柱：C18柱，柱長(zhǎng)250mm，內(nèi)徑4.6mm，粒徑5.0μm，或性能相當(dāng)者；b)柱溫：40℃;c)檢測(cè)波長(zhǎng)：245nm；d)流速：1.0mL/min；e)進(jìn)樣量：20μL。f)流動(dòng)相：A相為磷酸鹽緩沖液（取磷酸氫二鈉3.0g，加水1000mL，用磷酸調(diào)pH值至7.0B相為乙腈，梯度洗脫程序見(jiàn)表1.1。表1.1梯度洗脫程序%%2.1前處理參考條件提?。浩叫凶鰞煞菰囼?yàn)。稱(chēng)取試樣2g（精確至0.01g），于50mL離心管中，準(zhǔn)確加入20mL甲醇，渦旋1min，振蕩提取20min，于9000r/min離心5min，準(zhǔn)確移取0.5mL上清液于10mL離心管中，加入2.5mL0.1%甲酸溶液，渦旋混勻。備用。凈化：依次用3mL甲醇（5.2.2）和3mL水活化固相萃取小柱（5.2.10），取備用液（5.5.1）全部過(guò)柱，用3mL水淋洗，抽干小柱，用3mL5%氨水甲醇溶液（5.2.5）洗脫，收集洗脫液于50℃下用氮?dú)獯蹈?，?zhǔn)確加入2.5mL甲醇（5.2.2），渦旋溶解，過(guò)膜（5.2.11），待測(cè)。凈化過(guò)程需全程避光操作。2.2液相色譜參考條件液相色譜參考條件如下：a）色譜柱：C18柱，柱長(zhǎng)100mm，內(nèi)徑2.1mm，粒徑1.7μm，或性能相當(dāng)者；b）流動(dòng)相：A相為0.1%甲酸溶液（5.2.6）,B相為乙腈（5.2.3）,梯度洗脫程序見(jiàn)表2；c）柱溫：35℃;d）流速：0.3mL/min；e）進(jìn)樣量：2μL。DB/T××××—20XX表1.2梯度洗脫程序%%2.3質(zhì)譜參考條件注意：安乃近在提取凈化過(guò)程中全部轉(zhuǎn)化為4-甲氨基安替比林，故使用4-甲氨基安替比林作為安乃近的標(biāo)記物定量。質(zhì)譜參考條件如下：a)