地標-標準文本-混合型飼料添加劑中解熱鎮(zhèn)痛類藥物測定技術規(guī)范

ICS65.120CCSB46DBDeterminationofFourAntipyreticandAnalgesicDrugsinmixedfeedadditives:paracetamol,dipyrone,aminopyrineandantipyrine20××-××-××發(fā)布20××-××-××實施上海市市場監(jiān)督管理局發(fā)布DB/T××××—20XX本文件按照GB/T1.1-2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規(guī)則》的規(guī)定起請注意本文件的某些內容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構不承擔識別這些專利的責任。本文件由上海市農業(yè)農村委員會提出，上海市畜牧業(yè)標準化技術委員會提出并歸口。本文件起草單位：上海市動物疫病預防控制中心。本文件主要起草人：1DB/T××××—20XX混合型飼料添加劑中解熱鎮(zhèn)痛類藥物測定技術規(guī)范本標準規(guī)定了混合型飼料添加劑中對乙酰氨基酚、安乃近、氨基比林、安替比林四種解熱鎮(zhèn)痛類藥物的檢測試驗的基本要求（包括樣品前處理要求、儀器要求、結果判定等）。本標準適用于指導混合型飼料添加劑中對乙酰氨基酚、安乃近、氨基比林、安替比林四種解熱鎮(zhèn)痛類藥物的高效液相色譜法和液相色譜-串聯(lián)質譜法分析試驗。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內容通過文中的規(guī)范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T20001.5標準編寫規(guī)則第5部分：規(guī)范標準GB/T23182飼料中獸藥及其他化學物檢測試驗規(guī)程GB/T27417合格評定化學分析方法確認和驗證指南GB/T20195動物飼料試樣的制備3術語和定義GB/T27417-2017、GB/T32467-2015中界定的術語和定義適用于本標準。4采樣和樣品制備按GB/T14699規(guī)定的方法和程序進行采樣。采樣對象只限于混合型飼料添加劑。按GB/T20195制備樣品，至少200g，粉碎使其全部通過0.425mm孔徑的試驗篩，充分混勻，裝入密閉容器中，備用。5樣品前處理要求5.1對照品溶液的制備精密稱取目標對照品適量，用甲醇或者其他適宜溶劑配制成濃度合適的溶液，作為液相色譜法及液相色譜-串聯(lián)質譜法的對照品溶液。5.2供試品溶液的制備一般包含提取、凈化、富集/稀釋等操作。首先稱取樣品細粉適量，用甲醇或者其他適宜溶劑（超聲）定量溶解，凈化，濾過，精密量取續(xù)濾液定量稀釋（稀釋倍數(shù)要確保不造成儀器污染或光譜圖失真即得；液體制劑量直接精密量取或稱取適量，稀釋，即得。對于含有高濃度的有機鹽和乳化劑等存在強烈的基質效應輔料的產品，應適當增加前處理步驟。提取效率可用以下方法進行試驗：a)用陽性的標準物質或水平測試的陽性樣品進行試驗；b)陽性樣品用同一溶劑反復提取，觀察被分析物的濃度變化；c)用不同提取技術或不同提取溶劑進行比較。6儀器要求2DB/T××××—20XX6.1液相色譜—二極管陣列法高效液相色譜法本標準色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗根據(jù)可疑添加物性質，參照藥品國家標準、獸藥國家標準或者獸藥殘留檢測方法標準的條件自建。6.2液相色譜—串聯(lián)質譜法液質聯(lián)用條件根據(jù)可疑添加物性質自建，采用離子掃描（SRM）或多反應監(jiān)測（MRM）。定性離子對選用獸藥殘留檢測方法標準中的定性離子對或者符合至少4個識別點數(shù)的要求。6.3液相色譜—高分辨質譜法本標準中所使用的高分辨質譜儀在執(zhí)行目標物篩查確認程序時應符合實際分辨率不小于20000[質荷比(m/z)等于200,按半峰寬(FWHM)計］，質量準確性相對偏差不大于5ppm(m/z等于200)的基本要求；在同時執(zhí)行非目標物分析程序時應符合實際分辨率不小于70000(m/z等于200,按FWHM計質量準確性相對偏差不大于3ppm(m/z等于200)的基本要求。儀器應定期進行校準調諧，確保篩查過程中處于正常工作狀態(tài)，達到以上要求。參考條件見附錄A。7結果判定7.1定性7.1.1液相色譜法：分別記錄對照品和供試品溶液的色譜圖與光譜圖；通過與對照品液相色譜圖保留時間、光譜圖的比對，確定供試品溶液中是否含有疑似目標添加物。在供試品和對照品濃度接近的情況下，供試品色譜圖中如出現(xiàn)與對照品峰保留時間一致的色譜峰（差異不大于±2.5%）；在一定的波長范圍內，兩者光譜圖無明顯差異；最大吸收波長一致（差異不大于±2nm），判為檢出。7.1.2液相色譜串聯(lián)質譜法：分別記錄對照品和供試品溶液中的特征離子質量色譜圖；通過與對照品溶液色譜圖保留時間、離子豐度比的對比，確定供試品溶液中是否含有可疑添加物。供試品色譜圖中如出現(xiàn)與對照品峰保留時間一致的色譜峰（差異不大于±2.5%）；供試品離子豐度比應與對照品的一致，判為檢出。7.1.3液相色譜高分辨質譜法：分別記錄對照品和供試品溶液中的液相色譜圖及一級質譜圖與二級質譜圖；通過與對照品溶液色譜圖保留時間、質譜圖的對比，確定供試品溶液中是否含有可疑添加物。結果判定：供試品色譜圖中如出現(xiàn)與對照品峰保留時間一致的色譜峰（保留時間相對偏差不大于2.5%供試品質譜圖與對照品的應一致（包括分子離子和至少一個碎片離子，質量數(shù)差異小于等于5ppm），判為檢出非法添加物。供試品與對照品分子離子峰的質量數(shù)偏差不大于5ppm，且二級質譜圖與對照品的二級質譜圖一致，判為檢出。具體要求應符合表1判定條件。表1目標物確認判定條件判別項判定條件保留時間化合物的保留時間應至少大于死時間的2倍。目標物與參考標準品以相同條件測定所獲保留時間的絕對偏差應不大于0.2min。質量準確性一級母離子的mlz相對偏差亥5ppm;二級子離子的mlz相對偏差10ppm;當mlz<200時，其絕對偏差應<1mDa。DB/T××××—20XX同位素峰應將確認樣品調整至適當?shù)倪M樣濃度確保主要同位素峰可測，同位素峰的mlz應符合目標物確認的質量準確性要求。碎片相對離子豐度比比較二級碎片質譜圖，其主要碎片離子有2個或2個以上符合表中質扯準確性要求，且其相對離子豐度比符合表3的最大允許偏差要求。7.2定量通過定性判別確認為目標物后，用標準曲線或者單點校準方式計算目標物含量。按照試劑空白、樣品空白、標準曲線、試樣的順序進樣測定。標準曲線至少6個點（包括零點）均勻分布于線性范圍內，其最低點應低于或等于方法定量限對應的濃度；定量方法的線性回歸方程相關系數(shù)不低于0.99。(資料性)參考條件4DB/T××××—20XX1.1前處理參考條件平行做兩份試驗。稱取試樣2g（精確至0.01g于50mL離心管中，準確加入25mL甲醇，渦旋1min，振蕩提取20min，9000r/min離心5min，準確移取上清液5mL于10mL棕色容量瓶中，用甲醇定容，混勻，微孔濾膜過濾，待測。1.2液相色譜參考條件液相色譜參考條件如下：a)色譜柱：C18柱，柱長250mm，內徑4.6mm，粒徑5.0μm，或性能相當者；b)柱溫：40℃;c)檢測波長：245nm；d)流速：1.0mL/min；e)進樣量：20μL。f)流動相：A相為磷酸鹽緩沖液（取磷酸氫二鈉3.0g，加水1000mL，用磷酸調pH值至7.0B相為乙腈，梯度洗脫程序見表1.1。表1.1梯度洗脫程序%%2.1前處理參考條件提取：平行做兩份試驗。稱取試樣2g（精確至0.01g），于50mL離心管中，準確加入20mL甲醇，渦旋1min，振蕩提取20min，于9000r/min離心5min，準確移取0.5mL上清液于10mL離心管中，加入2.5mL0.1%甲酸溶液，渦旋混勻。備用。凈化：依次用3mL甲醇（5.2.2）和3mL水活化固相萃取小柱（5.2.10），取備用液（5.5.1）全部過柱，用3mL水淋洗，抽干小柱，用3mL5%氨水甲醇溶液（5.2.5）洗脫，收集洗脫液于50℃下用氮氣吹干，準確加入2.5mL甲醇（5.2.2），渦旋溶解，過膜（5.2.11），待測。凈化過程需全程避光操作。2.2液相色譜參考條件液相色譜參考條件如下：a）色譜柱：C18柱，柱長100mm，內徑2.1mm，粒徑1.7μm，或性能相當者；b）流動相：A相為0.1%甲酸溶液（5.2.6）,B相為乙腈（5.2.3）,梯度洗脫程序見表2；c）柱溫：35℃;d）流速：0.3mL/min；e）進樣量：2μL。DB/T××××—20XX表1.2梯度洗脫程序%%2.3質譜參考條件注意：安乃近在提取凈化過程中全部轉化為4-甲氨基安替比林，故使用4-甲氨基安替比林作為安乃近的標記物定量。質譜參考條件如下：a)