《甘薯及加工薯渣中多糖分離提取技術(shù)規(guī)程》

Q/LB.□XXXXX-XXXX甘薯及加工薯渣中多糖分離提取技術(shù)規(guī)程范圍本文件規(guī)定了原理、材料與試劑、儀器、試樣制備、工藝流程、操作步驟、甘薯多糖含量測定、精密度、測試報(bào)告等內(nèi)容。本文件適用于甘薯及加工薯渣中多糖的分離提取。規(guī)范性引用文件本文件沒有規(guī)范性引用文件。術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。原理試樣經(jīng)浸提、過濾、濃縮、醇沉、離心、復(fù)溶、脫蛋白、凍干后得到甘薯多糖。材料與試劑甘薯。無水乙醇、90%乙醇、丙酮、無水乙醚、葡萄糖、濃硫酸、三氯甲烷、正丁醇、苯酚，均為分析純。木聚糖酶。儀器超微粉碎機(jī)、電子天平、超聲波清洗器、離心機(jī)、真空干燥箱、凍干機(jī)、紫外-可見分光光度計(jì)、高效液相色譜儀。試樣制備甘薯粉末將新鮮甘薯洗凈，削皮切細(xì)絲，放到60℃的干燥箱內(nèi)連續(xù)烘干4h，完全干燥后，使用超微粉碎機(jī)將其完全粉碎，過80目篩，裝袋備用。甘薯渣粉末將甘薯渣洗去淀粉，放到60℃的干燥箱內(nèi)連續(xù)烘干4h，完全干燥后，使用超微粉碎機(jī)將其完全粉碎，過80目篩，裝袋備用。工藝流程甘薯及加工薯渣→干燥、粉碎→超聲浸提→過濾→濾液濃縮→醇沉、離心→沉淀復(fù)溶→脫蛋白→水層醇沉→離心、洗滌沉淀→干燥→粗多糖。操作步驟熱水浸提法取干燥粉碎好的甘薯粉XXg，先用80℃去離子水浸泡4h，料液比為1:15，此過程重復(fù)兩次。浸提完成后收集濾液。濾液濃縮后用90%乙醇醇沉，將離心（5000r/min，10min）得到的沉淀用去離子水復(fù)溶，Sevag法除去蛋白后，收集溶液并凍干，即為甘薯粗多糖。超聲波輔助法取干燥粉碎好的甘薯粉XXg，以料液比1:15，浸提溫度40℃，浸提時(shí)間60min，超聲功率350W進(jìn)行超聲浸提多糖，此過程重復(fù)兩次。浸提完成后收集濾液。濾液濃縮后用90%乙醇醇沉，將離心（5000r/min，10min）得到的沉淀用去離子水復(fù)溶，Sevag法除去蛋白后，收集溶液并凍干，即為甘薯粗多糖。酶提取法取干燥粉碎好的甘薯粉XXg，以料液比1:15，浸提溫度40℃，浸提時(shí)間60min，木聚糖酶添加量為0.25%進(jìn)行甘薯多糖的提取。浸提完成后收集濾液。濾液濃縮后用90%乙醇醇沉，將離心（5000r/min，10min）得到的沉淀用去離子水復(fù)溶，Sevag法除去蛋白后，收集溶液并凍干，即為甘薯粗多糖。甘薯多糖含量測定標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制準(zhǔn)確稱取干燥至恒重的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品1g,溶解稀釋后定容于100mL容量瓶中,配成10g/L的標(biāo)準(zhǔn)貯備液,再精密量取貯備液1mL定容至100mL的容量瓶中,配成0.1g/L的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液。精密移取0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4mL的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液于25mL的具塞刻度試管中，加蒸餾水補(bǔ)至2.0mL,然后加入6%的苯酚溶液1.0mL，搖勻,并迅速加入濃硫酸溶液5.0mL,充分振蕩，立即將試管放入沸水浴中，加熱15min,取出后冷卻至室溫,于490nm波長下測其OD值，以多糖含量為橫坐標(biāo),光密度值為縱坐標(biāo),得出標(biāo)準(zhǔn)曲線方程。樣品測定吸取2.0mL適當(dāng)濃度的甘薯多糖提取液,并以其中的一支試管加入2.0mL的蒸餾水作為空白對照，接著向各個(gè)試管中加入1.0mL6%的苯酚溶液混勻后并立即加入5mL濃硫酸,充分振蕩后迅速浸入沸水浴中準(zhǔn)確煮沸保溫15min后取出，并冷卻至室溫后于490nm波長下測定吸光度值，平均測定3次，取平均值。 ω=m1m2×100% (式中：ω——甘薯粗多糖提取率；m1——多糖的質(zhì)量，單位為mg；m2——樣品的質(zhì)量，單位為mg。測定次數(shù)同-試樣需進(jìn)行兩次測定。空白試驗(yàn)用相同步驟及相同量的所有試劑,但不加試樣進(jìn)行空白試驗(yàn)。精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩側(cè)獨(dú)立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的10%。測試報(bào)告測試報(bào)告需說明：測試樣品所需的所有有關(guān)信息；若已知采