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3715ThetechnicalprotocolofproductionandpreservationforfreshsemenofdezhouI本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分:標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定術(shù)推廣服務(wù)中心、聊城市東昌府區(qū)畜牧獸醫(yī)事業(yè)傳良、于杰、李玉華、王守山、劉文強、王濤、1德州驢鮮精生產(chǎn)與保存技術(shù)規(guī)程精液離心液semencentrifugat24基本要求4.1供精公驢4.3采精頻率4.4采精時間4.5采精場所4.6處理室設(shè)置有精液質(zhì)檢區(qū)、平衡稀釋區(qū)、分裝區(qū)、鮮精保存區(qū),室內(nèi)溫度22℃~25℃,避免光線直4.7器材設(shè)備4.8工作人員37.4采精員右手持假陰道,假陰道外口端斜朝向地面,站在公驢右前側(cè)。待公驢爬跨時,左手輕扳陰4),離心10min~15min。去除上清液,將各離心管中的粥狀精液用保存液進行最后稀釋。精液稀釋按兩步 X··························V0——采精量mL;C——精子密度,單位為108個每毫升m——精子快速前進活力%;0.7——精液離心后精子的回收系數(shù);V1——每頭份的體積,單位為毫升(mL)9精液分裝9.2裝精液用的瓶或管選用對精子無毒9.4標明公驢號、生產(chǎn)日期、生產(chǎn)單位和有效保存時間。5A.1精液離心液A液配方成份A.2精液離心液配制方法A.2.1A液:用校準的電子天平依次稱取所需藥品,用滅菌超純水定容至100mL,配置完成后經(jīng)0.22A.3精液保存液配方及配制方法A.3.1選取新鮮無疫病雞蛋,用75%酒精進行表面消毒,待酒精揮發(fā)完畢后抽取內(nèi)部卵黃;A.3.2卵黃與離心液1:4混合,2800rpm/min離心A.3.3C液:離心液=1:3~1:7混合,得精液保存液,4℃保存,保存時間不超過14d。67取稀釋后精液一小滴,滴于潔凈載玻片(B)一端,用另一邊緣光滑的蓋玻片(A)與有樣品的載玻片呈35°夾角,將樣品均勻地涂布于載玻片上,自然風干,每樣品制作二個抹片。C.2固定在已風干的抹片上滴上1.0mL~2.0mL中性福爾馬林(濃度3.2%)固定液(也可將風干后的抹片反扣在帶有平槽的有機玻璃面上,把固定液滴于槽和抹片之間,讓其充滿平槽并使抹片接觸固定液),C.3染色槽并使抹片接觸染液,染色1.5h后用清水緩緩沖去染液,晾干待檢。C.4鏡檢將制備好的抹片在顯微鏡(400X~600X)下觀察,每個抹片觀察200個以上的精子(分左、右二個區(qū)),取二片的平均值,二片的變異系數(shù)不得大于20%,

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