DB2102T 0005-2020 海帶配子體采苗及育苗技術(shù)規(guī)程　

DB2102DB2102/T0005—2020海帶配子體采苗及育苗技術(shù)規(guī)程TechnicalSpecificationforGametophyteclonalbreedingofSaccharinajaponica2020-10-29發(fā)布2020-11-29實施大連市市場監(jiān)督管理局發(fā)布I本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1—2020給出規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由大連市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草單位：大連海寶漁業(yè)有限公司。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：冷曉飛、張喜昌、劉劍波、孫穎、許淑芬。本標(biāo)準(zhǔn)發(fā)布實施后，任何單位和個人如有問題和意見建議，均可以通過來電和來函等方式進(jìn)行反饋，我們將及時答復(fù)并認(rèn)真處理，根據(jù)實際情況依法進(jìn)行評估及復(fù)審。歸口管理部門：大連市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局通訊地址：大連市西崗區(qū)新開路87號聯(lián)系電話準(zhǔn)起草單位：大連海寶漁業(yè)有限公司通訊地址：遼寧省大連市旅順口區(qū)鐵山街道柏嵐子村1號聯(lián)系人：劉劍波聯(lián)系電話：187411667751海帶配子體采苗及育苗技術(shù)規(guī)程本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了海帶配子體采苗及育苗的環(huán)境與水質(zhì)、設(shè)施、配子體擴(kuò)增培養(yǎng)、配子體育苗和苗簾出庫、運(yùn)輸。本標(biāo)準(zhǔn)適用于大連地區(qū)室內(nèi)海帶配子體采苗及育苗。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，標(biāo)注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。NY5052無公害食品海水養(yǎng)殖用水水質(zhì)NY5362無公害食品海水養(yǎng)殖產(chǎn)地環(huán)境條件SC/T2024種海帶3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。形成配子進(jìn)行有性生殖世代的藻體(核相n)。4環(huán)境與水質(zhì)育苗場址應(yīng)選擇遠(yuǎn)離城市污水和工業(yè)污水排放口，附近沒有大型河流入海，巖石或砂質(zhì)底質(zhì)的沿海區(qū)域，其它環(huán)境條件應(yīng)符合NY5362的規(guī)定，水質(zhì)應(yīng)符合NY5052的規(guī)定。5.1擴(kuò)增培養(yǎng)室用于配子體的擴(kuò)增培養(yǎng)，應(yīng)為配有制冷設(shè)施的保溫室，內(nèi)設(shè)培養(yǎng)臺架和充氣設(shè)備，臺架層高50cm,5.2育苗室2育苗室設(shè)置應(yīng)為溫室結(jié)構(gòu)，以東西走向為宜。屋頂下設(shè)置可拉伸的黑色和白色布簾各一層，窗口設(shè)深色布簾。育苗池呈平面并聯(lián)式，單池規(guī)格10m×1.4m×0.5m。池內(nèi)設(shè)攪拌機(jī)保持循環(huán)水流。5.3供排水系統(tǒng)包括泵房、沉淀池、砂濾罐(塔)、儲水池、回水池等。5.4制冷系統(tǒng)包括集成式制冷機(jī)、制冷槽、砂濾罐、回水槽等。6配子體擴(kuò)增培養(yǎng)6.1配子體準(zhǔn)備6.1.1游孢子采集與配子體培育在海帶成熟季節(jié)，參照SC/T2024的規(guī)定選擇種海帶。用消毒剪刀剪下3cm×3cm含有孢子囊的藻體，以滅菌紗布蘸消毒海水清洗藻體表面浮泥雜藻，陰干1h~3h后，轉(zhuǎn)移到盛有消毒海水的燒杯中放散游孢子。5min后鏡檢，視野(×100)中游孢子數(shù)量達(dá)到10個～20個以上時，取中上層孢子液，接種到多個加有培養(yǎng)液的消毒培養(yǎng)皿中培養(yǎng)20d,獲得配子體。培養(yǎng)條件為溫度15℃~20℃,光照5001x~10001x,光周期L:D=12h:12h。培養(yǎng)液為滅菌海水中添加NaNO?-N10mg/L,KH?PO?-P2mg/L,F/2培養(yǎng)基16.1.2配子體雌雄分離與保種用微細(xì)管分離法分離雌雄配子體，分別移到數(shù)個直徑18cm盛有培養(yǎng)液的培養(yǎng)皿內(nèi)培養(yǎng)。培養(yǎng)條件為：溫度15℃~20℃,光照5001x~10001x。當(dāng)配子體生長至布滿培養(yǎng)皿底面時，將雌雄配子體用消毒毛刷刷下，轉(zhuǎn)移到50ml透明試管中，在溫度4℃~8℃,光照低于501x條件下儲藏保種。每月更換一次培養(yǎng)液。培養(yǎng)液為在滅菌海水中添加NaNO?-N10mg/L,KH?PO?-P2mg/L。6.2配子體擴(kuò)增配子體擴(kuò)增應(yīng)在采苗前6個月進(jìn)行，在適宜的培養(yǎng)條件下，擴(kuò)增后的配子體生物量每月可翻一倍。采苗時，一個苗簾需求雌雄配子體各0.5g,因此，可根據(jù)苗簾數(shù)確定配子體需求量和擴(kuò)增時間。6.3配子體擴(kuò)增操作將低溫儲藏的雌、雄配子體分別移入組織搗碎機(jī)中，加滅菌冰海水至1000ml,16000r/min切碎30s后，按1g/L~1.5g/L的密度，分別接種于5L三角燒瓶中培養(yǎng)。6.4擴(kuò)增培養(yǎng)條件應(yīng)符合以下要求：——擴(kuò)增培養(yǎng)用海水應(yīng)為煮沸消毒的砂濾海水；——培養(yǎng)液溫度應(yīng)控制在15℃~20℃;——光照應(yīng)控制在10001x~15001x,光周期L:D=12h:12h;——培養(yǎng)瓶應(yīng)24小時連續(xù)充氣；——新培養(yǎng)液中營養(yǎng)鹽濃度應(yīng)為NaNO?-N10mg/L,KH?PO?-P2mg/L;——更換培養(yǎng)液或接種前，操作人員雙手和器具應(yīng)消毒。36.5擴(kuò)增培養(yǎng)管理6.5.1更換培養(yǎng)液培養(yǎng)液2周更換一次，更換前應(yīng)停止充氣，使配子體自然沉降于燒瓶底部，將燒瓶中上層的舊培養(yǎng)液倒出。配子體量較多時，用300目篩絹收集倒出的配子體。6.5.2分瓶擴(kuò)增培養(yǎng)配子體生長至15g/L～20g/L時應(yīng)分瓶培養(yǎng)。若配子體呈絮狀，直接分瓶培養(yǎng)。若配子體呈簇團(tuán)狀，用300目篩絹濾出配子體，轉(zhuǎn)入組織搗碎機(jī)，加滅菌冰海水至1000ml,16000r/min切碎30s后，分瓶擴(kuò)增培養(yǎng)。7配子體育苗7.1采苗前準(zhǔn)備7.1.1苗簾的組裝應(yīng)按以下要求進(jìn)行：——使用聚乙烯材質(zhì)規(guī)格為68cm×34cm長方形框架，上纏直徑3.0mm~4.0mm,混紡1根～3根聚乙烯絲的白色維尼綸繩，繩不宜纏得過緊，每簾用繩37m;——苗簾使用前需用噴燈將苗繩上的細(xì)毛烤掉，且使用三道聚乙烯繩均勻的固定好苗簾繩；——苗簾4簾一組，水平并列綁縛到兩根長1.4m的PVC圓管上。7.1.2育苗池處理每個育苗池2個長池壁內(nèi)側(cè)距池底20cm處，設(shè)置托架，用于托放成組的苗種簾。7.2.1采苗時間可根據(jù)海區(qū)養(yǎng)殖季節(jié)來確定，多在8月中旬。7.2.2配子體切碎用滅菌的300目篩絹網(wǎng)收集擴(kuò)增培育養(yǎng)的配子體。每次取50g配子體，轉(zhuǎn)移到組織搗碎機(jī)，加滅菌冰海水至1000ml,16000r/min切碎120s,經(jīng)400目篩絹過濾，未濾出的配子體細(xì)胞段繼續(xù)切碎過濾。重復(fù)切碎4次后，將搗碎機(jī)中的配子體細(xì)胞段混合到前三次的濾液中備用。把備好的海帶苗種簾逐組擺放到育苗池壁托架上，9℃~11℃低溫海水浸泡預(yù)冷，池水沒過苗種簾6cm~8cm。將雌、雄配子體細(xì)胞段按照破碎前濕重的1:1混合，用5℃~6℃低溫海水稀釋，按照1g/簾的配子體用量，均勻潑灑在苗種簾上方的水面，使配子體細(xì)胞段沉降到苗種簾上，靜水附著72h,水溫9℃~13℃。7.3幼苗培育管理7.3.1水流、水溫及換水量4附苗72h后正常流水，流速5cm/s~10cm/s,水溫9℃~11℃。每日補(bǔ)新水。幼孢子體規(guī)格在0.3mm之前，日補(bǔ)水量30%,規(guī)格在0.3mm~10mm時，日補(bǔ)水量60%,規(guī)格在10mm以上，日補(bǔ)水量100%。7.3.2光照及營養(yǎng)鹽配子體期，光照不高于20001x,營養(yǎng)鹽NaNO?-N3mg/L,KH?PO?-P0.6mg/L,F/2培養(yǎng)基0.3mg/L;幼孢子體前期，規(guī)格在0.5mm之前，光照不高于35001x,營養(yǎng)鹽NaNO?-N3mg/L,KH?PO?-P0.3mg/L,FeCH?Oz-Fe·5H?O0.02mg/L;幼孢子體后期，規(guī)格在0.5mm之后，光照不高于70001x,營養(yǎng)鹽NaNO?-N附苗20d內(nèi)不洗涮苗簾；附苗20d后，每3d洗刷苗簾1次。7.3.4病害及防治應(yīng)符合表1的要求。表1育苗期間主要病害及防治方法病因防治方法長脖子病嚴(yán)重，葉片失去光澤。多為幼苗密度大，光照不足。(1)增加洗刷苗簾的次數(shù)；(2)適當(dāng)提高光照強(qiáng)度；(3)降低水溫。綠爛病葉片從尖端開始變綠、變軟，逐漸腐爛脫落。多為光照不足。(1)適當(dāng)提高光照強(qiáng)度；(2)增加補(bǔ)水量，加大流速；(3)降低水溫；(4)白尖病細(xì)胞脫落掉。多為突然受強(qiáng)光刺