病理檢驗技術(shù)（第3版）課件 第13章 電子顯微鏡技術(shù)

電子顯微鏡技術(shù)第十三章學(xué)習目標1.了解電鏡的類型、基本結(jié)構(gòu)以及成像原理。2.熟練透射電鏡和掃描電鏡生物樣品制備技術(shù)、電鏡低溫制樣技術(shù)、電鏡細胞化學(xué)的基本方法以及免疫電鏡膠體金標記技術(shù)。思維導(dǎo)圖第一節(jié)概述

電子顯微鏡，簡稱電鏡，利用電子射線來代替可見光制成的顯微鏡。與光學(xué)顯微鏡比較光學(xué)顯微鏡以可見光為介質(zhì)，電子顯微鏡以電子束為介質(zhì)。電子顯微鏡的分辨率（約0.2納米）遠高于光學(xué)顯微鏡的分辨率（約200納米）。光學(xué)顯微鏡的最大放大倍數(shù)約為2000倍，而現(xiàn)代電子顯微鏡最大放大倍數(shù)可達到百萬倍。電子顯微鏡購買和維護的價格都比較高。第一節(jié)概述一電鏡的類型第一節(jié)概述二電鏡的基本結(jié)構(gòu)第一節(jié)概述三電鏡的成像原理掃描電鏡是用極細的電子束在樣品表面掃描，將產(chǎn)生的二次電子用特制的探測器收集，形成電信號運送到顯像管，在熒光屏上顯示物體。透射電鏡是以電子束透過樣品經(jīng)過聚焦與放大后所產(chǎn)生的物像，投射到熒光屏上或照相底片上進行觀察。

第二節(jié)透射電鏡與超薄切片技術(shù)一超薄切片術(shù)透射電鏡，即透射電子顯微鏡（TransmissionElectronMicroscope，簡稱TEM），是使用最為廣泛的一類電鏡。由于電子易散射或被物體吸收，故穿透力低，必須制備更薄的超薄切片（通常為50～100nm）。

其制備過程與石蠟切片相似，但要求極嚴格。取材固定漂洗后固定脫水浸透聚合切片撈片和染色超薄切片機第一節(jié)透射電鏡與超薄切片技術(shù)二超薄切片染色技術(shù)常用的染色劑:醋酸鈾和檸檬酸鉛。染色方法：(1)組織塊染色在脫水至70%乙醇時，將組織塊放在用70%乙醇配制的飽和醋酸鈾溶液中，染色時間2小時以上，或在冰箱中過夜。

(2)超薄切片染色第三節(jié)掃描電鏡技術(shù)一掃描電鏡的工作原理掃描電鏡一種新型的電子光學(xué)儀器。它具有制樣簡單、放大倍數(shù)可調(diào)范圍寬、圖像層次豐富、景深好等特點。紅細胞掃描電鏡圖第三節(jié)掃描電鏡技術(shù)

二掃描電鏡的標本制備樣品的初步處理取材→清洗→固定→脫水→置換樣品的干燥掃描電鏡觀察樣品要求在高真空中進行。無論是水或脫水溶液，在高真空中都會產(chǎn)生劇烈地汽化，不僅影響真空度、污染樣品，還會破壞樣品的微細結(jié)構(gòu)。因此，樣品在用電鏡觀察之前必須進行干燥。樣品的導(dǎo)電處理

金屬鍍膜法第四節(jié)電鏡低溫制樣技術(shù)400目銅網(wǎng)第五節(jié)電鏡細胞化學(xué)技術(shù)基本原理基本要求基本步驟第六節(jié)免疫電鏡技術(shù)免疫電鏡技術(shù)是將電鏡的高分辨能力與抗原抗體反應(yīng)的特異性相結(jié)合，在亞細胞水平上對抗原物質(zhì)進行定位分析的一種高度精密而靈敏的方法。免疫鐵蛋白技術(shù)，免疫膠體金技術(shù)思考題1.