免疫標記技術(shù)課件

免疫標記技術(shù)Immunolabelingtechnique3.免疫標記技術(shù)免疫標記技術(shù)=抗原抗體反應(yīng)示蹤物標記靈敏性特異性免疫標記技術(shù)的主要特點：高特異性、高靈敏性免疫技術(shù)+標記技術(shù)酶熒光素同位素3.免疫標記技術(shù)3.免疫標記技術(shù)1.ELISA檢測HBsAg(小組做)實驗內(nèi)容3.免疫標記技術(shù)(錄像)2.尿液HCG檢測(膠體金法)(小組做)3.免疫標記技術(shù)實驗?zāi)康?.掌握酶聯(lián)免疫吸附實驗的基本原理；2.了解利用雙抗體夾心法測定HBsAg的方法。3.了解膠體金法檢測HCG的原理、方法。3.免疫標記技術(shù)基本原理

利用酶催化底物反應(yīng)的生物放大作用,提高特異性抗原-抗體免疫學(xué)反應(yīng)的檢測敏感性的一種標記免疫技術(shù)。Ag+AbEAgAbE+

底物呈色反應(yīng)一、酶免疫技術(shù)3.免疫標記技術(shù)EIA固相聚苯乙烯Ag或Ab吸附到固相上的過程,稱為包被

(酶免疫測定法)3.免疫標記技術(shù)基本特點：①標記后保留酶和抗原(抗體)的活性；②酶促反應(yīng)專一性，保證特異性；③底物反應(yīng)放大作用，提高敏感性；④酶標試劑保存穩(wěn)定；⑤操作簡便，安全易行。3.免疫標記技術(shù)常用酶及其底物常用底物：鄰苯二胺(OPD)：反應(yīng)顯橙黃色，應(yīng)避光，致癌性。四甲基聯(lián)苯胺(TMB)：反應(yīng)后呈藍色，無需避光，無致癌性,但水溶性差。常用底物：對硝基苯磷酸酯(p-NPP)：產(chǎn)物為黃色。AP靈敏性高于HRP，但不易獲得純品，且穩(wěn)定性低于HRP、價高，故應(yīng)用不如HRP普及。1.辣根過氧化物酶(HRP)2.堿性磷酸酶(AP)3.免疫標記技術(shù)3.免疫標記技術(shù)

酶聯(lián)免疫吸附實驗enzymelinkedimmunosorbentassay

（ELISA）3.免疫標記技術(shù)ELISA基本的實驗過程3.免疫標記技術(shù)雙抗體夾心法檢測HBsAg

3.免疫標記技術(shù)HBV感染后的血清學(xué)指標:HBsAg,HBsAbHBeAg,HBeAbHBcAb(IgG,IgM)乙肝表面抗原,存在于HBV感染的急性期及慢性期的血清中,為感染指標。3.免疫標記技術(shù)實驗材料1.HBV診斷試劑盒；2.HBsAg陽性對照品，陰性對照品，待檢品。3.免疫標記技術(shù)實驗步驟2.在各孔內(nèi)加入酶標抗體1滴,37℃溫育30分鐘。3.各孔分別加入洗滌液(加滿)---甩掉，反復(fù)3次，然后在吸水紙上吸干(倒扣在吸水紙上)。4.各孔內(nèi)加入底物液A、B各1滴，輕輕搖動混勻，室溫避光反應(yīng)15分鐘。5.各孔內(nèi)加入終止液1滴，觀察結(jié)果。1.將已包被的孔編號，分別加入陽性對照血清、陰性對照血清及待測血清各1滴。3.免疫標記技術(shù)結(jié)果判定2.若待檢孔顯色深于或等于陽性對照孔則判定為陽性；3.若待檢孔顯色介于陰性對照孔和陽性對照孔之間則判定為弱陽性。1.若待檢孔顯色淺于陰性對照則判定為陰性；3.免疫標記技術(shù)注意事項2.洗滌必須徹底，防止產(chǎn)生假陽性。1.加樣應(yīng)加在板孔的底部，避免產(chǎn)生氣泡并迅速完成。3.免疫標記技術(shù)二、膠體金法檢測尿液HCG人絨毛膜促性腺激素

(humanchorionicgonadotropin,HCG)

受精卵子移行到子宮內(nèi)著床后，形成胚胎，在胚胎的發(fā)育過程中，胎盤合體滋養(yǎng)層細胞產(chǎn)生大量的HCG，是一種具有促性腺發(fā)育的糖蛋白類激素,可通過孕婦血液循環(huán)而排泄到尿中。臨床上常用抗HCG檢測尿液中的HCG以輔助早孕診斷和其他臨床相關(guān)疾病。3.免疫標記技術(shù)膠體金標記免疫技術(shù)(金標法)

膠體金是由氯化金與還原劑反應(yīng)形成的一種膠體顆粒，具有吸附蛋白質(zhì)的特性(可以標記Ag或Ab)；膠體金顆粒具有呈色性，中等大小的膠體金顆粒呈現(xiàn)酒紅色。膠體金標記免疫技術(shù)是將金顆粒光學(xué)檢測的靈敏性和抗原抗體反應(yīng)的特異性相結(jié)合。3.免疫標記技術(shù)AGTB層析流方向HCG金標試紙A：加待檢尿液G：金標鼠抗人HCG單抗T：鼠抗人HCG單抗C：羊抗鼠IgG抗體B：吸水紙滴加標本C3.免疫標記技術(shù)AGTB層析流方向HCG金標試紙滴加標本C復(fù)溶固定反應(yīng)條帶質(zhì)控條帶雙抗體夾心法A：加待檢尿液G：金標鼠抗人HCG單抗T：鼠抗人HCG單抗C：羊抗鼠IgG抗體B：吸水紙3.免疫標記技術(shù)3.免疫標記技術(shù)3.免疫標記技術(shù)膠體金免疫法與RIA、ELISA等方法相比,有許多優(yōu)點：1.它不需ELISA法中所要求的作用的底物和顯色