DB21T 3093-2018 犬冠狀病毒病診斷技術(shù)規(guī)范

DB21Thetechnicalspecificationsfordiagnosistechnologyofcaninecoronavirusdisease遼寧省市場監(jiān)督管理局發(fā)布I 1 1 1 1 1 1 1 1 2 2 2 2 3 4 4 4淼、張旭、章春燕、俞向前、張建平、馬強(qiáng)、高靜薦1犬冠狀病毒病診斷技術(shù)規(guī)范本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了犬冠狀病毒病診斷的技術(shù)方法、步驟和結(jié)果判件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改版本）適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和NY/T541獸醫(yī)診斷樣品采集、保存與運(yùn)輸技術(shù)規(guī)范3.1犬冠狀病毒Caninecoronavir屬于冠狀病毒科冠狀病毒屬，呈圓形或橢圓形，有囊膜，囊膜表面有纖突，病毒核酸為單股RNA病3.2犬冠狀病毒病Caninecoronavirusd3.4CRTCapillaryfil疫學(xué)（CCV膠體金檢測試紙）和分子生物學(xué)（RT-PCR病毒基4.1流行病學(xué)診斷24.1.1病犬和帶毒犬是主要傳染源，病犬和帶毒犬糞便中含有大量CC4.1.3本病一年四季均可發(fā)生，但冬季多發(fā)；該病的發(fā)生和嚴(yán)重程度常與斷乳、運(yùn)輸、氣溫驟變、飼4.2臨床癥狀診斷4.2.5腹瀉：嘔吐的同時(shí)，出現(xiàn)腹瀉，糞便由糊狀、半糊狀變至水樣，其顏色由暗綠色或灰綠色逐漸兩前肢觸地，低頭拱背而坐的姿勢，后期，肛門括約肌松弛，4.2.7血常規(guī)檢查：白細(xì)胞計(jì)數(shù)大多正?；蚱?，也有少數(shù)升高者，時(shí)有淋巴細(xì)胞增高或出現(xiàn)變異型4.2.8全身變化：發(fā)病后期，病犬眼球深陷，CRT時(shí)間延長，呼/create/edit/?eid=6034396&sid=6247400&secid=64.3病理學(xué)診斷4.3.2組織學(xué)變化：表現(xiàn)為小腸絨毛萎縮變短并融合，粘膜固有層細(xì)胞成份增多，隱窩加深，上皮細(xì)4.4應(yīng)用現(xiàn)代免疫學(xué)（CCV膠體金檢測試紙）診斷用棉簽取適量新鮮糞便；將棉簽浸入樣品3將未開封的試紙卡和檢測樣品恢復(fù)至室溫；將試紙卡水平放置，用滴管向試紙卡孔緩慢逐滴陽性：C線顯示紅色色帶，T線也4.5.1檢測試劑和儀器預(yù)冷）、DEPC水（1000mL雙蒸水中加入1mLDEPC，室溫下持續(xù)攪拌過夜，121℃高壓滅菌25min）、RNA酶抑制劑（40U/μL）、TaqDNA聚合酶（5U/μL）、dNTP(2.5mmol羥甲基氨基甲烷-乙酸電泳緩沖液、溴化乙錠、DL2000DNA本規(guī)范中使用的設(shè)備：PCR擴(kuò)增儀，高速冷凍離心機(jī)，核酸電泳儀和水平電泳槽，組織均漿機(jī)或研4.5.2病料采集與處理：按照NY/T541獸醫(yī)4上游引物：5’-TCCAGATATGTAATGTTCGG-3’下游引物：5’-TCTGTTGAGTAATCACCAGCT-3’被檢樣品電泳出現(xiàn)40