全自動(dòng)生化性能與應(yīng)用

全自動(dòng)生化性能與應(yīng)用1*第一節(jié)臨床生化自動(dòng)分析儀的類型

一、概述

儀器的發(fā)展史、第一臺(tái)1957年由美國Technicon公司生產(chǎn)(AutoAnalyzer)，單通道連續(xù)流動(dòng)式，只是模仿手工。60年代后隨電子計(jì)算機(jī)技術(shù)迅速發(fā)展。從設(shè)計(jì)構(gòu)造及速度、功能方面有很大的發(fā)展。

2*①試劑自動(dòng)檢測(cè)：借助條碼技術(shù)識(shí)別種類及效期等。

②樣本自動(dòng)識(shí)別：量多少，有無溶血、脂血、黃疸、血球、凝塊等。

③自動(dòng)加樣：試劑、樣本、稀釋液等。

④自動(dòng)檢測(cè)：樣本杯、試劑架、反應(yīng)杯。

⑤數(shù)據(jù)處理：

⑥打印報(bào)告：

⑦自動(dòng)報(bào)警：

3*分類

☆按反應(yīng)裝置結(jié)構(gòu)：連續(xù)流動(dòng)式、分立式和離心式。

☆按同時(shí)檢測(cè)項(xiàng)目與否：單通道、多通道。

☆按儀器的自動(dòng)化程度：全自動(dòng)、半自動(dòng)。

☆按儀器復(fù)雜程度：小型、中型和大型。

4*（一）管道式分析儀（P442）

①原理：吸樣＋吸試劑→混勻＋（第二試劑）→混勻→孵育→比色→計(jì)算→打印結(jié)果。②特點(diǎn)：所有反應(yīng)在同一管道中進(jìn)行，一個(gè)接一個(gè)進(jìn)行，可通過透析器將干擾物除去、速度慢；也有將多個(gè)通道并列起來。5*（二）、分立式分析儀

（P443）（1）原理：同一時(shí)期的測(cè)定在不同反應(yīng)杯中進(jìn)行，試劑及樣本由不同的加樣器自動(dòng)加樣，在一定溫度下反應(yīng)一定時(shí)間后反應(yīng)液依次自動(dòng)吸入比色杯比色或反應(yīng)杯依次通過光路進(jìn)行檢測(cè)；可有多個(gè)加樣臂，所以其體積大且速度快。6*（2）儀器各部分簡介：①標(biāo)本架：條形:適合于現(xiàn)在自動(dòng)加樣圓形:有整圓形,節(jié)段組成的7*但結(jié)果準(zhǔn)確性差及可靠性差光源燈(鹵素?zé)?、鎢絲燈、石英燈、氙閃光燈)②儀器部分：比色、讀數(shù)、計(jì)算、打印結(jié)果。從設(shè)計(jì)構(gòu)造及速度、功能方面有很大的發(fā)展。半導(dǎo)體恒溫：硅半導(dǎo)體介導(dǎo)恒溫，介于兩者之間。④試劑：單試劑、雙試劑、三試劑等排除試劑或樣本空白等。質(zhì)地：玻璃、塑料或石英；(三)離心式生化分析儀（P444）但可以根據(jù)不同儀器的情況自行設(shè)計(jì)，但同時(shí)改變線性及靈敏度。二、主要實(shí)驗(yàn)參數(shù)的選擇（設(shè)置）1、方法學(xué)：單試劑、雙試劑、與試劑盒。采用光柵或單色光濾光器，光路采用后分光技術(shù)，波長更準(zhǔn)確。①項(xiàng)目：可測(cè)生化項(xiàng)目、還有藥物監(jiān)測(cè)、各種特殊蛋白、微量元素等。②特點(diǎn)：所有反應(yīng)在同一管道中進(jìn)行，一個(gè)接一個(gè)進(jìn)行，可通過透析器將干擾物除去、速度慢；（一）平衡法（終點(diǎn)法）水及熱空氣等廢水等樣品盤試劑盤試劑針樣品針清洗針反應(yīng)池反應(yīng)杯分離式全自動(dòng)生化分析儀府視圖試劑盤8*9*⑤數(shù)據(jù)處理：

⑥打印報(bào)告：

⑦自動(dòng)報(bào)警：自動(dòng)清洗:反應(yīng)杯可反復(fù)使用（1）、終點(diǎn)法：一般選開始時(shí)間（即試劑與樣本混勻舜間，這樣反應(yīng)還未開始但又能去除試劑與樣本的空白），結(jié)束時(shí)間一般以反應(yīng)達(dá)終點(diǎn)時(shí)的時(shí)間，計(jì)算⊿A=A末－A始速度一般，現(xiàn)很少生產(chǎn)此類產(chǎn)品；(三)離心式生化分析儀（P444）②儀器部分：比色、讀數(shù)、計(jì)算、打印結(jié)果。（1）原理：同一時(shí)期的測(cè)定在不同反應(yīng)杯中進(jìn)行，試劑及樣本由不同的加樣器自動(dòng)加樣，在一定溫度下反應(yīng)一定時(shí)間后反應(yīng)液依次自動(dòng)吸入比色杯比色或反應(yīng)杯依次通過光路進(jìn)行檢測(cè)；采用光柵或單色光濾光器，光路采用后分光技術(shù)，波長更準(zhǔn)確。（三）、樣品量及試劑量：一般按手工法按比例縮減；（二）溫度：現(xiàn)一般采用37℃。人工更換:一次性反應(yīng)比色杯②儀器部分：比色、讀數(shù)、計(jì)算、打印結(jié)果。空白反應(yīng)吸光度：看試劑在反應(yīng)溫度下的穩(wěn)定性。⑨分析系統(tǒng)：結(jié)果、原始數(shù)據(jù)、是否超出反應(yīng)線性、酶反應(yīng)時(shí)線性是否合理等多點(diǎn)法、回歸法及積分法為使用生化分析儀的首選儀器。②比色杯質(zhì)地：玻璃、塑料或石英；人工更換:一次性反應(yīng)比色杯儀器自動(dòng)更換：一次性反應(yīng)比色杯自動(dòng)清洗:反應(yīng)杯可反復(fù)使用10*1、方法學(xué)：單試劑、雙試劑、與試劑盒。概念：從加樣本至出結(jié)果的全過程由儀器來完成，受主觀因素影響少。轉(zhuǎn)速一般在500~1000r/min；指分析的速度，根據(jù)儀器每小時(shí)測(cè)定樣本數(shù)量及每個(gè)樣本可測(cè)項(xiàng)目的多少；（一）管道式分析儀（P442）一點(diǎn)與二點(diǎn)不需特殊的儀器；體積小，結(jié)構(gòu)簡單，靈活，價(jià)廉，適合標(biāo)本量不大的小型醫(yī)院。1、方法學(xué)：單試劑、雙試劑、與試劑盒。②樣本自動(dòng)識(shí)別：量多少，有無溶血、脂血、黃疸、血球、凝塊等。1、方法學(xué)：單試劑、雙試劑、與試劑盒。②特點(diǎn)：所有反應(yīng)在同一管道中進(jìn)行，一個(gè)接一個(gè)進(jìn)行，可通過透析器將干擾物除去、速度慢；☆按儀器復(fù)雜程度：小型、中型和大型。人工更換:一次性反應(yīng)比色杯（三）、樣品量及試劑量：一般按手工法按比例縮減；②樣本自動(dòng)識(shí)別：量多少，有無溶血、脂血、黃疸、血球、凝塊等。③加樣與采樣器：一般采用機(jī)械傳動(dòng)帶動(dòng)注射器活塞，閥門有電磁控閥門，玻璃活塞等。④控溫裝置：一般溫度有25℃、30℃、37℃，也有連續(xù)式溫度如20℃~50℃等可任選；11*恒溫水（油）浴箱：溫度比較穩(wěn)定，但水需要經(jīng)常更換和處理，以防影響比色杯表面光度；電熱恒溫器：采用空氣恒溫時(shí)送熱風(fēng)，溫度波動(dòng)較大，受外界影響大；半導(dǎo)體恒溫：硅半導(dǎo)體介導(dǎo)恒溫，介于兩者之間。⑤反應(yīng)時(shí)間控制：隨意設(shè)定12*⑥檢測(cè)器：試劑樣品及杯子吸光度等⑦清洗系統(tǒng)：⑧干燥系統(tǒng)：與清洗系統(tǒng)共用⑨分析系統(tǒng)：結(jié)果、原始數(shù)據(jù)、是否超出反應(yīng)線性、酶反應(yīng)時(shí)線性是否合理等⑩打印機(jī)：

13*(三)離心式生化分析儀（P444）①原理：圓盤內(nèi)的樣品和試劑受到離心力的作用而相互混合發(fā)生反應(yīng)，在高速旋轉(zhuǎn)過程中進(jìn)行比色測(cè)定。

14*②特點(diǎn)：又稱為成批測(cè)定或同步測(cè)定，即分析過程中，樣品與試劑的混合、反應(yīng)和檢測(cè)等每一步幾乎同時(shí)完成。試劑和樣本量:（樣品1~50ul,試劑50~350ul），視離心杯的底部面積大??；速度一般，現(xiàn)很少生產(chǎn)此類產(chǎn)品；15*反應(yīng)轉(zhuǎn)盤：可用手工換，也可通過自動(dòng)換盤。無法自動(dòng)清洗。轉(zhuǎn)速一般在500~1000r/min；儀器：美國Baker公司的EncoreⅠ、Ⅱ型、IL的Monarch系列、Roche公司的CobasFara-Ⅱ型等

16*條形:適合于現(xiàn)在自動(dòng)加樣三、全自動(dòng)生化分析儀④試劑：單試劑、雙試劑、三試劑等排除試劑或樣本空白等。分離式全自動(dòng)生化分析儀府視圖1、方法學(xué)：單試劑、雙試劑、與試劑盒。(三)離心式生化分析儀（P444）1、方法學(xué)：單試劑、雙試劑、與試劑盒。②儀器部分：比色、讀數(shù)、計(jì)算、打印結(jié)果。反應(yīng)轉(zhuǎn)盤：可用手工換，也可通過自動(dòng)換盤。(三)離心式生化分析儀（P444）但同時(shí)應(yīng)考慮儀器的使用效率，一個(gè)大型生化分析儀如樣本較少，則儀器的使用效率不高。②特點(diǎn)：所有反應(yīng)在同一管道中進(jìn)行，一個(gè)接一個(gè)進(jìn)行，可通過透析器將干擾物除去、速度慢；①原理：吸樣＋吸試劑→混勻＋（第二試劑）→混勻→孵育→比色→計(jì)算→打印結(jié)果。一點(diǎn)與二點(diǎn)不需特殊的儀器；⑥檢測(cè)器：試劑樣品及杯子吸光度等（四）干片式分析儀

（P444）

①原理：在干化學(xué)紙片上加上血清后，背面產(chǎn)生顏色，用反射光度計(jì)檢測(cè)即可定量；②特點(diǎn)：是80年代問世的產(chǎn)品，是將含底物的試劑浸入紙片后，經(jīng)干燥制得，干片由試劑和電極構(gòu)成，一次使用，成本高。但方便快捷。③缺點(diǎn)：結(jié)果波動(dòng)性大。

17*二、半自動(dòng)生化分析儀

（1）操作分兩部分：①手工部分：加樣、保溫、吸入樣本②儀器部分：比色、讀數(shù)、計(jì)算、打印結(jié)果。

18*（2）特點(diǎn)：體積小，結(jié)構(gòu)簡單，靈活，價(jià)廉，適合標(biāo)本量不大的小型醫(yī)院。比色快，速率法慢，不受試劑、方法的限制，常規(guī)、急診使用方便。

19*（3）注意事項(xiàng)：①使用同一比色池，重復(fù)性好，但結(jié)果受加樣和取樣的影響。②作酶動(dòng)學(xué)時(shí)，應(yīng)注意計(jì)時(shí)準(zhǔn)確性，還應(yīng)注意溫度的波動(dòng)。

20*三、全自動(dòng)生化分析儀

概念：從加樣本至出結(jié)果的全過程由儀器來完成，受主觀因素影響少。功能全，靈活性大，易于操作，有吸光度法、熒光法、光散射法、濁度法、ISE法等。

21*常規(guī)生化、特殊蛋白、藥物監(jiān)測(cè)等。隨機(jī)安排程序，呆單項(xiàng)測(cè)定，也可成批測(cè)定，可對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。模塊式生化分析儀：采用多個(gè)相同的或不同的生化分析儀通過傳送帶等形式相互連接起來。

22*第二節(jié)

臨床生化自動(dòng)分析儀的性能評(píng)價(jià)及與合理選用（P446）正確評(píng)價(jià)十分重要一、自動(dòng)化程度儀器自動(dòng)化程度越高，功能越強(qiáng)大，適合樣本多、人員少、大型醫(yī)院；樣本少的、檢驗(yàn)數(shù)量少的小醫(yī)院等選用半自動(dòng)或小型全自動(dòng)生化分析儀。

23*二、分析效率

指分析的速度，根據(jù)儀器每小時(shí)測(cè)定樣本數(shù)量及每個(gè)樣本可測(cè)項(xiàng)目的多少；離心式應(yīng)進(jìn)行成批測(cè)定，如一個(gè)一個(gè)測(cè)定，則其效率較低；但同時(shí)應(yīng)考慮儀器的使用效率，一個(gè)大型生化分析儀如樣本較少，則儀器的使用效率不高。

24*三、應(yīng)用范圍：

①項(xiàng)目：可測(cè)生化項(xiàng)目、還有藥物監(jiān)測(cè)、各種特殊蛋白、微量元素等。②方法：分光光度法、濁度比色法、離子選擇性電極法、熒光法等。③波長：雙波長法(三波長法)，消除背景噪音，排除溶血、脂血、膽紅素等干擾。④試劑：單試劑、雙試劑、三試劑等排除試劑或樣本空白等。

25*四、分析準(zhǔn)確度

準(zhǔn)確度愈高愈好，取決于加液、溫控、波長、記時(shí)等的加工精確度及狀態(tài)，加樣量準(zhǔn)確性、微量、系統(tǒng)穩(wěn)定性、機(jī)械結(jié)構(gòu)精密度、加樣中針的攜帶污染等。

26*五、試劑使用靈活性

通常儀器所用試劑的范圍也是相當(dāng)重要，試劑的開放程度越高，使用的靈活性就大，有些儀器與試劑采用捆綁方式，成本高，不利于開展新工作。

27*第三節(jié)臨床生化自動(dòng)分析儀的方法

要合理使用儀器，就必須首先了解儀器的各項(xiàng)功能

一、分析方法：

28*（一）平衡法（終點(diǎn)法）

（1）一步法：試劑酶的底物（S）就是所測(cè)的物質(zhì)（P448）（2）酶偶聯(lián)反應(yīng)；S1＋S2

Ea→P1＋P2Ei→P3＋P4Ea為輔酶，Ei為指示酶29*（二）動(dòng)態(tài)法分為可變信號(hào)與固定信號(hào)

30*一點(diǎn)與二點(diǎn)不需特殊的儀器；但結(jié)果準(zhǔn)確性差及可靠性差多點(diǎn)法、回歸法及積分法為使用生化分析儀的首選儀器。（三）固定時(shí)間法（二點(diǎn)法）不需對(duì)反應(yīng)過程進(jìn)行觀察，或只需觀察前后兩點(diǎn)即可。

31*（四）空白對(duì)照方法樣本＋空白試劑；試劑；樣本＋完全試劑(終止反應(yīng)后)32*二、主要實(shí)驗(yàn)參數(shù)的選擇（設(shè)置）（一）波長：吸收曲線的低谷為空白波長，吸光度大而平的波長為分析波長；采用光柵或單色光濾光器，光路采用后分光技術(shù)，波長更準(zhǔn)確。（二）溫度：現(xiàn)一般采用37℃。

33*（三）、樣品量及試劑量：一般按手工法按比例縮減；但可以根據(jù)不同儀器的情況自行設(shè)計(jì)，但同時(shí)改變線性及靈敏度。試劑樣本用量的多少是衡量生化分析儀品質(zhì)的一個(gè)重要指標(biāo)。34*（四）分析時(shí)間確定：

（1）、終點(diǎn)法：一般選開始時(shí)間（即試劑與樣本混勻舜間，這樣反應(yīng)還未開始但又能去除試劑與樣本的空白），結(jié)束時(shí)間一般以反應(yīng)達(dá)終點(diǎn)時(shí)的時(shí)間，計(jì)算⊿A=A末－A始

35*（2）動(dòng)態(tài)法時(shí)間：選定讀數(shù)的起始點(diǎn)，即遲滯期后開始，結(jié)束時(shí)間一定要在線性反應(yīng)期內(nèi)，計(jì)算按：⊿A/min＝(A末－A始)/（TA末－TA始）。

36*（五）線性判斷標(biāo)準(zhǔn)(線性限度L)：作為反應(yīng)達(dá)終點(diǎn)時(shí)吸光度反應(yīng)的界限，這只是對(duì)于終點(diǎn)法實(shí)驗(yàn)來說，若為酶促反應(yīng)的話，很難觀察到終點(diǎn)的時(shí)間.空白試劑吸光度：配好試劑是否已變質(zhì)。空白反應(yīng)吸光度：看試劑在反應(yīng)溫度下的穩(wěn)定性。

37*(六)異常吸收率限度:見下面的示意圖。

38*三、儀器室條件及儀器操作

（一）、儀器室條件（1）、電源、電壓、UPS、溫度（15－30℃）、濕度、防塵等。（2）、操作常規(guī)