乙型肝炎實驗室檢測技術(shù)學(xué)習(xí)

乙型肝炎實驗室檢測技術(shù)學(xué)習(xí)

病毒形態(tài)與基因結(jié)構(gòu)嗜肝DNA病毒科(Hepadnaviridae)正肝DNA病毒屬電鏡：3種形態(tài)HBV基因組和基因表達(dá)產(chǎn)物3200bp4openreadingframes7proteins

大蛋白(preS1-preS2-S)

中蛋白(preS2-S)

小蛋白(HBsAg)

核衣殼(HBcAg)HBeAg

聚合酶X蛋白要注意避免出現(xiàn)嚴(yán)重溶血注射乙肝疫苗或乙肝高效價免疫球蛋白(HBIG)后，產(chǎn)生的主動或被動免疫HBsAgdistributionintheyearof2006要注意避免出現(xiàn)嚴(yán)重溶血蒸餾水或去離子水應(yīng)保證質(zhì)量抗-HBs特異性中和抗體、保護(hù)性抗體adr,ayr,adw2慢性乙肝北歐、西歐、非洲、美洲乙型肝炎實驗室檢測技術(shù)學(xué)習(xí)抗-HbeHBeAg消失后出現(xiàn)無癥狀HBV攜帶者及非活動期慢性肝炎患者表示HBV在體內(nèi)復(fù)制減少或終止，傳染性減弱或消失東亞、中國、日本、波利尼西亞等判斷預(yù)后的指標(biāo)：HBeAg轉(zhuǎn)陰，表示HBV復(fù)制減少或終止，預(yù)后好；一、臨床標(biāo)本的收集和保存HBsAg陰性的急性感染HBVcarrierdistributioninChinain19924-8%8-12%4-8%海南黑龍江吉林遼寧山東福建江西安徽湖北湖南廣東廣西上海河南山西內(nèi)蒙古陜西寧夏甘肅青海四川貴州云南西藏新疆江蘇浙江北京臺灣over7%3~7%Lowerthen3%HBsAgdistributionintheyearof2006NodataComparingofHBsAgprevalencebetween1992and2006age

世界高流行區(qū)≥8%

中流行區(qū)2～7%

低流行區(qū)＜2%

我國農(nóng)村>城市南方>北方中南和華東>華北

地區(qū)分布

年齡和性別高流行區(qū)青少年和30～40歲的成人中流行區(qū)仍以成人感染為主低流行區(qū)多20～29歲年齡組發(fā)病高峰

職業(yè)高危人群醫(yī)務(wù)人員托幼機構(gòu)兒童妓女靜脈內(nèi)濫用毒品者男性同性戀者

家庭聚集性明顯人群分布基因型血清型主要地區(qū)Aadw2,ayw1北歐、西歐、非洲、美洲Badw2,ayw1東南亞、中國、日本Cadr,ayr,adw2東亞、中國、日本、波利尼西亞等Dayw2,ayw3南歐、地中海、印度Eayw4西非Fadw4,adw2,ayw4美國土著人、波利尼西亞、中南美Gadw2美國、法國H?尼加拉瓜、墨西哥、美國HBV不同基因型和血清型的地區(qū)分布血清標(biāo)本如是以無菌操作分離，則可以在2～8℃下保存一周，如為有菌操作，則建議冰凍保存意義體內(nèi)HBV復(fù)制、傳染性強的標(biāo)志臨床ELISA檢驗影響因素HBeAg與HBsAg平行出現(xiàn)，較HBsAg消失早冰凍保存的血清標(biāo)本須注意避免因停電等造成的反復(fù)凍融中南和華東>華北一、臨床標(biāo)本的收集和保存HBV不同基因型和血清型的地區(qū)分布冰凍保存的血清標(biāo)本須注意避免因停電等造成的反復(fù)凍融Dane顆粒經(jīng)去垢劑處理HBcAg釋放檢測慢性乙肝，病毒長期攜帶樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細(xì)菌污染樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細(xì)菌污染HBVcarrierdistributioninChinain1992急性乙型肝炎的輔助診斷Source:NNDSS/VHSP經(jīng)血傳播醫(yī)源性傳播母嬰傳播性接觸傳播日常生活接觸傳播

傳播途徑

HBsAg

最早出現(xiàn)的血清學(xué)標(biāo)志之一是HBV感染的基本標(biāo)志

HBsAg陽性見于乙肝的潛伏期、急性期慢性乙肝病毒攜帶與HBV感染有關(guān)的肝硬化和原發(fā)性肝細(xì)胞癌抗原抗體系統(tǒng)抗-HBs特異性中和抗體、保護(hù)性抗體抗-HBs陽性可見于乙型肝炎恢復(fù)期，在HBsAg消失后間隔一定時間抗-HBs出現(xiàn)隱性感染的健康人，自身產(chǎn)生了免疫力注射乙肝疫苗或乙肝高效價免疫球蛋白(HBIG)后，產(chǎn)生的主動或被動免疫HBcAg

不能從血清中直接檢出

Dane顆粒經(jīng)去垢劑處理HBcAg釋放檢測抗-HBc

非中和抗體、分IgM和IgG

主要見于慢性感染和既往感染抗-HBcIgM

通常在出現(xiàn)癥狀時即可檢出，一般持續(xù)約6個月，提示HBV復(fù)制，是急性感染的重要指標(biāo)，也是慢性活動性肝炎的重要標(biāo)志抗-HBcIgG

在抗-HBcIgM下降及消失后出現(xiàn)，可伴隨感染者終生存在HBeAg

與HBsAg平行出現(xiàn)，較HBsAg消失早意義體內(nèi)HBV復(fù)制、傳染性強的標(biāo)志急性乙型肝炎的輔助診斷判斷預(yù)后的指標(biāo)：HBeAg轉(zhuǎn)陰，表示HBV復(fù)制減少或終止，預(yù)后好；若HBeAg持續(xù)陽性，則預(yù)后不良，易轉(zhuǎn)為慢性抗-HbeHBeAg消失后出現(xiàn)無癥狀HBV攜帶者及非活動期慢性肝炎患者表示HBV在體內(nèi)復(fù)制減少或終止，傳染性減弱或消失HBV感染血清學(xué)常見模式臨床及流行病學(xué)意義HBsAg抗-HBs

抗-HBcIgGIgMHBeAg抗-HBe潛伏期末期+﹣﹣﹣+/﹣﹣急性乙肝，病毒長期攜帶+﹣+++﹣HBsAg陰性的急性感染﹣﹣﹣+﹣﹣感染消除，抗-HBs尚未出現(xiàn)﹣﹣+﹣﹣﹣健康攜帶者+﹣++/-﹣+慢性乙肝，病毒長期攜帶+-++/-+-HBV近期感染，恢復(fù)期﹣+++/-﹣+HBV既往感染，已恢復(fù)﹣+/-+﹣﹣﹣﹣乙肝疫苗接種﹣+﹣﹣﹣﹣ELISA（最常用，定性）免疫層析法（膠體金或硒標(biāo)法）發(fā)光免疫分析（定量）反相間接血凝試驗（少用）HBV感染的血清學(xué)診斷方法利用抗原和抗體特異性結(jié)合方法間接法:測定抗-HBs夾心法：測定HBsAg和HBeAg競爭法：測定抗-HBc和抗-HBe酶聯(lián)免疫吸附試驗ELISA優(yōu)點快速簡便，成本低敏感血清標(biāo)本用量少缺點精密度差難以自動化容易出現(xiàn)交叉反應(yīng)酶標(biāo)技術(shù)臨床ELISA檢驗影響因素臨床ELISA測定現(xiàn)通常為采用手工操作的以微孔板條為固相的測定模式，測定操作非常簡單，一般涉及到標(biāo)本的收集保存、試劑準(zhǔn)備、加樣、溫育、洗板、顯色、比色、結(jié)果判斷和結(jié)果報告及解釋等方面，其中任一步驟的不當(dāng)都會影響測定結(jié)果，且尤以加樣、溫育和洗板等步驟為甚一、臨床標(biāo)本的收集和保存要注意避免出現(xiàn)嚴(yán)重溶血樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細(xì)菌污染血清標(biāo)本如是以無菌操作分離，則可以在2～8℃下保存一周，如為有菌操作，則建議冰凍保存冰凍保存的血清標(biāo)本須注意避免因停電等造成的反復(fù)凍融標(biāo)本在保存中如出現(xiàn)細(xì)菌污染所致的混濁或絮狀物時，應(yīng)離心沉淀后取上清檢測

二、試劑準(zhǔn)備實驗開始前，將試劑盒先從冰箱中拿出來，在室溫下放置20分鐘以上后，再進(jìn)行測定蒸餾水或去離子水應(yīng)保證質(zhì)量抗-HbeHBeAg消失后出現(xiàn)無癥狀HBV攜帶者及非活動期慢性肝炎患者表示HBV在體內(nèi)復(fù)制減少或終止，傳染性減弱或消失三、加血清樣本及反應(yīng)試劑病毒攜帶HBsAg陰性的急性感染抗-HbeHBeAg消失后出現(xiàn)無癥狀HBV攜帶者及非活動期慢性肝炎患者表示HBV在體內(nèi)復(fù)制減少或終止，傳染性減弱或消失臨床ELISA檢驗影響因素要注意避免出現(xiàn)嚴(yán)重溶血反相間接血凝試驗（少用）ComparingofHBsAgprevalencebetween1992and2006低流行區(qū)＜2%東亞、中國、日本、波利尼西亞等冰凍保存的血清標(biāo)本須注意避免因停電等造成的反復(fù)凍融高流行區(qū)青少年和30～40歲的成人血清標(biāo)本如是以無菌操作分離，則可以在2～8℃下保存一周，如為有菌操作，則建議冰凍保存樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細(xì)菌污染三、加血清樣本及反應(yīng)試劑加樣不可太快，要避免加在孔壁上部，不可濺出和產(chǎn)生氣泡四、溫育要保證在設(shè)定的溫度下有足夠的反應(yīng)時間溫育溫度的選擇“邊緣效應(yīng)”的排除大蛋白(preS1-preS2-S)反相間接血凝試驗（少用）酶聯(lián)免疫吸附試驗ELISA感染消除，抗-HBs尚未出現(xiàn)HBV近期感染，恢復(fù)期急性乙肝，病毒長期攜帶抗-HBc非中和抗體、分IgM和IgG乙肝的潛伏期、急性期HBeAg與HBsAg平行出現(xiàn)，較HBsAg消失早反相間接血凝試驗（少用）低流行區(qū)多20～29歲年齡組發(fā)病高峰抗-HBc非中和抗體、分IgM和IgG夾心法：測定HBsAg和HBeAgHBV近期感染，恢復(fù)期抗-HBs特異性中和抗體、保護(hù)性抗體

五、洗板固相免疫測定技術(shù)是一種非均相免疫測定技術(shù)，需以洗滌操作將特異結(jié)合于固相的抗原或抗體與反應(yīng)溫育過程中吸附的非特異成份分離開來，以保證ELISA測定的特異性六、顯色在加入底物開始顯色反應(yīng)前，最好是先檢查一下底