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DB32DetectiontechnicalregulationforPorcineSap江蘇省市場監(jiān)督管理局發(fā)布I本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人:李彬、范寶超、孫杰、何孔旺、郭容利、周金柱、1豬薩佩羅病毒檢測技術(shù)本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的RT-PCR法適用于本病毒的抗原確診,間接ELISA試驗(yàn)適用于血清凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修訂單)GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格NY/T541動(dòng)物疫病實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)采樣方法AATACAGGATGACACAGGAAGGG-3`(見附錄B)。PCR相關(guān)試劑。豬薩佩羅病毒陽性病料R取物反轉(zhuǎn)錄為cDNA作為陽性對照,水作為陰性對照。高速離心機(jī)(10000r/min)、PCR儀、電泳儀、4.2.1DNA模板制備),),4.2.2PCR2別采用55℃進(jìn)行擴(kuò)增30s,72℃30s,35個(gè)循環(huán)72℃延緩沖液混合后,加樣到電泳孔中,9V/cm恒壓下電泳15min~30mi在試驗(yàn)結(jié)果成立的前提下,如果樣品擴(kuò)增到689檢測過程中的廢棄物,應(yīng)做好無害化處理,檢測過程中防止交叉污染的措施見附豬薩佩羅病毒重組3C表達(dá)抗原,酶標(biāo)抗體,標(biāo)準(zhǔn)陰性血清、標(biāo)準(zhǔn)陽性血清,酶標(biāo)板及其他必要的試驗(yàn)溶液和酶標(biāo)儀、移液器等儀器。待檢血清樣品采集于疑似患病5.2.2洗滌:甩掉酶標(biāo)板孔內(nèi)的液體,加入洗滌液200加入洗滌液,連續(xù)洗3次,最后一次甩掉洗滌液后,拍5.2.4加入待檢血清和陰、陽性血清對照:待檢血清用稀釋液1:320稀釋,每5.2.6加入底物,每孔加100μL,室溫避光顯色8min。5.2.7終止反應(yīng),每孔加入50μL終5.2.8測定光吸收值(OD),在酶聯(lián)免疫檢測儀上于450nm波長處測定光吸用酶標(biāo)儀檢測OD值,計(jì)算S/P值,S/P值=(樣品血清OD450nm值-陰性血清OD450nm值)/(陽性血清OD450nm值-陰性

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