乙型肝炎病毒微生物學(xué)及檢驗(yàn)

乙型肝炎病毒微生物學(xué)及檢驗(yàn)乙型肝炎全球分布過(guò)乙肝血漿肝素抗凝X（完整的病毒，具有傳染性）常規(guī)檢測(cè)：24小時(shí)分離HBVDNA定量檢測(cè)HBeAg是HBcAg的降解產(chǎn)物HBVDNA：是HBV感染最直接，最靈敏和最特異的檢測(cè)指標(biāo)，且血清中HBVDNA的水平可作為治療方案與療效觀察的指標(biāo)。一生物學(xué)特性(1)(2)(3)(4)(5)少見(jiàn)模式及其意義－＋－－＋急性HBV感染康復(fù)期或有既往感染史，有不含DNA及DNA聚合酶直徑22nm長(zhǎng)100—500nm三臨床意義內(nèi)衣殼抗原核心抗原HBcAg是Dane顆粒中核心組成部分乙肝現(xiàn)狀乙肝病毒攜帶者占人口10%.全世界20億曾感染過(guò)、有億乙肝攜帶者、我國(guó)乙肝攜帶者總數(shù)高達(dá)億.10%轉(zhuǎn)化為各種慢性肝病，包括有慢性肝炎、肝硬化和肝癌我國(guó)慢性肝病人數(shù)3000萬(wàn)，肝病死亡人數(shù)每年30萬(wàn)全球HBV感染流行情況20億人曾感染HBV,占全球人口1/3慢性HBV感染者約3.5~4億，其中亞洲占2/3,中國(guó)占1/3全球60億人口15%~25%最終將死于與HBV有關(guān)肝病每年全球死亡75~100萬(wàn)例，占死因第7位LavanchyD.JViralHepatitis.2004;11:97-107

一生物學(xué)特性形態(tài)與基因結(jié)構(gòu)

嗜肝DNA病毒科正肝DNA病毒屬電鏡：3種形態(tài)

大球形顆粒小球形顆粒管型顆粒完整的HBV顆粒為大球形顆粒，又稱Dane顆粒，直徑42nm，分為包膜與核心兩部分，包膜HBsAg，核心部分含有環(huán)狀雙股DNA、DNA聚合酶、HBcAg和HBeAg等，是病毒復(fù)制的主體1大球形顆粒（Dane）：直徑42nmDane顆粒雙層外殼核心DNADNA聚合酶外衣殼：相當(dāng)于一般病毒包膜內(nèi)衣殼：相當(dāng)于一般病毒核衣殼病毒衣殼成分：蛋白質(zhì)由殼粒組成。殼粒是衣殼的形態(tài)學(xué)亞單位，多肽分子是衣殼的化學(xué)亞單位功能保護(hù)病毒核酸參與感染過(guò)程具有抗原性2小球形顆粒

是HBV感染肝細(xì)胞時(shí)過(guò)剩的病毒衣殼組成

直徑22nm

成分HBsAg少量PreS2+HBsAg

不含DNA及DNA聚合酶

無(wú)法復(fù)制3管形顆粒

成分與小球形顆粒相同，是由多個(gè)小球形顆粒串聯(lián)而成直徑22nm長(zhǎng)100—500nm

無(wú)法復(fù)制

三種形態(tài)之間的關(guān)系基因組基因組長(zhǎng)約3.2kb，為部分雙鏈環(huán)狀DNApre-S1pre-S1蛋白pre-S2pre-S2蛋白SHBsAgpre-CHBeAgCHBcAgPDNAPXHBxAgDNARNADNA轉(zhuǎn)錄逆轉(zhuǎn)錄HBV的復(fù)制方式很特殊,在復(fù)制過(guò)程中有逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程,與逆轉(zhuǎn)錄病毒相似,逆轉(zhuǎn)錄后的DNA可整合至靶細(xì)胞的染色體HBV的復(fù)制3、HBV的抗原組成表面抗原HBsAg外衣殼抗原前S1抗原前S2抗原內(nèi)衣殼抗原核心抗原HBcAge抗原HBeAg大球形顆粒形態(tài)（完整的病毒，具有傳染性）HBsAgHBcAgHBVDNADNAP<聚合酶》（外膜蛋白）（核衣殼蛋白）機(jī)體感染HBV后產(chǎn)生相應(yīng)的免疫反應(yīng)，形成多種不同的抗原抗體系統(tǒng)表面抗原抗體系統(tǒng)(HBsAg，抗HBs)核心抗原抗體系統(tǒng)(HBcAg，抗HBc)e抗原抗體系統(tǒng)(HBeAg，抗HBe)

（1）表面抗原曾用名“澳抗”出現(xiàn)時(shí)間：HBV感染后2—6個(gè)月由S基因碼產(chǎn)生的蛋白4個(gè)亞型adradwaywayr抗-HBs●出現(xiàn)時(shí)間：急性感染后期或HBsAg消失后（空白期或窗口期）●抗-HBs為保護(hù)性抗體（中和抗體）其出現(xiàn)標(biāo)志著HBV感染進(jìn)入恢復(fù)期●抗-HBs對(duì)相同HBsAg亞型的HBV再感染有免疫力，但對(duì)不同亞型的HBV保護(hù)力不完全。（2）核心抗原是Dane顆粒中核心組成部分被HBsAg覆蓋，血中不易檢出抗HBc-IgM：是HBV近期感染或慢性感染者病毒活動(dòng)的標(biāo)志抗HBc-IgG：凡“有過(guò)”HBV感染者均可陽(yáng)性HBcAg的免疫原性最強(qiáng)抗HBc-IgG可終身陽(yáng)性（3）e抗原為可溶性蛋白血清HBeAg陽(yáng)性者中，HBVDNA陽(yáng)性率為92%左右，是HBV復(fù)制和傳染的感染性標(biāo)志其抗體有利于抑制病毒復(fù)制，抗-HBe的出現(xiàn)標(biāo)志著病毒復(fù)制減少、傳染性降低乙肝（3）HBeAgHBeAg是HBcAg的降解產(chǎn)物HBVC基因前C區(qū)C區(qū)前C/C蛋白HBeAgHBcAg表達(dá)切割、加工分泌到細(xì)胞外HBeAg只存在于血清中內(nèi)衣殼抗原核心抗原HBcAgPDNAP直徑22nm長(zhǎng)100—500nm1表面抗原HBsAg2表面抗體抗-HBs＋－－＋＋急性乙肝趨向恢復(fù)或慢性乙肝，弱傳染性殼粒是衣殼的形態(tài)學(xué)亞單位，多肽分子是衣殼的化學(xué)亞單位全球HBV感染流行情況HBV傳染性與抗原性不一致DNA聚合酶3e抗原HBeAg4e抗體抗-HBe每年全球死亡75~100萬(wàn)例，占死因第7位成年期感染3~5%4個(gè)亞型adradwaywayrELLSACHBcAg

4培養(yǎng)特性黑猩猩最敏感疫苗效價(jià)安全評(píng)價(jià)不能在細(xì)胞培養(yǎng)中分離培養(yǎng)

5抵抗力抵抗力強(qiáng)70%乙醇無(wú)法滅活HBV傳染性與抗原性不一致

二微生物學(xué)檢驗(yàn)標(biāo)本處理：

1.常規(guī)檢測(cè)：24小時(shí)分離

5天內(nèi)2—8℃5天后—20℃/—70℃2.核酸檢測(cè)：血清（常用）血漿肝素抗凝X

6小時(shí)處理24小時(shí)按成保存—70℃乙型肝炎的快速診斷光鏡-----包涵體電鏡免疫熒光ELISA分子生物學(xué)技術(shù)雜交SouthernblotPCRNorthernblot直接病毒診斷HBVDNA：是HBV感染最直接，最靈敏和最特異的檢測(cè)指標(biāo)，且血清中HBVDNA的水平可作為治療方案與療效觀察的指標(biāo)。HBVDNA定量檢測(cè)pre-CHBeAg疫力，但對(duì)不同亞型的HBV保護(hù)力不完全。10%轉(zhuǎn)化為各種慢性肝病，包括有慢性肝炎、肝硬化和肝癌HBVDNA：是HBV感染最直接，最靈敏和最特異的檢測(cè)指標(biāo)，且血清中HBVDNA的水平可作為治療方案與療效觀察的指標(biāo)。不含DNA及DNA聚合酶直徑22nm長(zhǎng)100—500nm內(nèi)衣殼：相當(dāng)于一般病毒核衣殼4個(gè)亞型adradwaywayr1大球形顆粒（Dane）：直徑42nm殼粒是衣殼的形態(tài)學(xué)亞單位，多肽分子是衣殼的化學(xué)亞單位－－－＋＋乙肝恢復(fù)期，弱傳染性●抗-HBs對(duì)相同HBsAg亞型的HBV再感染有免CHBcAgHBeAg是HBcAg的降解產(chǎn)物5抵抗力

酶聯(lián)免疫法

ELLSAE固相抗體標(biāo)本（含抗原）酶標(biāo)抗體EE底物雙抗體夾心法檢測(cè)抗原（+）1、已知抗體包被載體3、加酶標(biāo)抗體4、加酶作用的底物顯色2、加待檢抗原4、加酶作用的底物不顯色洗滌洗滌洗滌洗滌1、已知抗體包被載體2、加待檢物（無(wú)抗原）3、加酶標(biāo)抗體（-）YYYYYYEYEYEYYYYYYYYYYEYEYEYYYYYYYEYEYEYYYY洗滌洗滌雙抗體夾心法測(cè)抗原EEE底物固相抗體標(biāo)本（含抗原）酶標(biāo)抗體雙位點(diǎn)一步法檢測(cè)抗原固相抗體標(biāo)本（含抗體）抗原酶標(biāo)抗體底物EEE競(jìng)爭(zhēng)法檢測(cè)HBeAb乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物的綜合評(píng)價(jià)

(1)(2)(3)(4)(5)常見(jiàn)模式及其意義

＋－＋－＋急性或慢性乙型肝炎，高傳染性＋－－－＋急性、慢性乙型肝炎或慢性HBsAg攜帶者＋－－＋＋急性乙肝趨向恢復(fù)或慢性乙肝，弱傳染性－＋－－＋急性HBV感染康復(fù)期或有既往感染史，有免疫力－－－＋＋乙肝恢復(fù)期，弱傳染性－－－－＋急性HBV感染“窗口期”，或既往曾感染過(guò)乙肝－＋－－－接種HBV疫苗或HBV感染后康復(fù)－＋－＋＋急性乙肝康復(fù)期，開(kāi)始產(chǎn)生免疫力－－－－－無(wú)HBV感染＋－－－－無(wú)癥狀攜帶者乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物的綜合評(píng)價(jià)

(1)(2)(3)(4)(5)少見(jiàn)模式及其意義＋＋＋－＋不HBsAg亞型病毒的雙重感染

＋＋－－＋HBsAg亞型病毒的雙重感染

＋－＋＋＋乙肝趨向恢復(fù)

1表面抗原HBsAg2表面抗體抗-HBs3e抗原HBeAg4e抗體抗-HBe5核心抗體抗-HBc

三臨床意義HBsAg無(wú)癥狀攜帶者主要傳染源潛伏期30—160天傳播方式1、輸血傳播2、性接觸傳播(同性戀)3、垂直傳播4、口-口傳播（唾液檢測(cè)HBV-DNA）5、靜脈藥癮，血液透析CHBcAg直徑22nm保存—70℃垂直傳播是我國(guó)HBV感染的主要模式不含DNA及DNA聚合酶5年發(fā)生率12~25%－－－＋＋乙肝恢復(fù)期，弱傳染性前S2抗原其抗體有利于抑制病毒復(fù)制，抗-HBe的出現(xiàn)標(biāo)志著病毒復(fù)制減少、傳染性降低4培養(yǎng)特性不含DNA及DNA聚合酶2、性接觸傳播(同性戀)DNARNADNA外衣殼：相當(dāng)于一般病毒包膜保存—70℃醫(yī)源性傳播輸血或注射器、血透機(jī)、內(nèi)窺鏡等消毒不嚴(yán)格乙肝垂直傳播主要途徑：圍產(chǎn)期（新生兒皮膚、粘膜