革蘭陰性球菌課件

革蘭陰性球菌

“伯杰鑒定細(xì)菌學(xué)手冊(cè)”第9版將奈瑟菌屬和布蘭漢菌屬歸于群4，將奈瑟菌屬、莫拉菌屬、金氏菌屬和不動(dòng)桿菌屬都?xì)w于奈瑟菌科革蘭陰性球菌概述奈瑟菌屬對(duì)人致病的有腦膜炎奈瑟菌(N.gonorrhoeae)和淋病奈瑟菌（N.

meningitidis），其余均為人類(lèi)呼吸道正常菌群莫拉菌屬中的卡他莫拉菌（M.catarrhalis）是致病菌目前對(duì)卡他莫拉菌的歸屬尚未定論革蘭陰性球菌一、分類(lèi)淋病奈瑟菌、腦膜炎奈瑟菌對(duì)人致病寄生在人體內(nèi)鼻咽腔的腐生菌解乳糖奈瑟菌、干燥奈瑟菌、微黃奈瑟菌、粘液奈瑟菌、淺黃奈瑟菌、灰色奈瑟菌、延長(zhǎng)奈瑟菌、去氮奈瑟菌和多糖奈瑟菌第一節(jié)奈瑟菌屬革蘭陰性球菌二、腦膜炎奈瑟菌臨床意義寄居于人的鼻咽腔、口腔粘膜上，通過(guò)呼吸道分泌物或空氣微滴核而傳播。流行性腦脊髓膜炎冬末春初，多為學(xué)齡兒童、青少年感染后多為隱性感染，少數(shù)可發(fā)展為菌血癥或敗血癥，進(jìn)而累及腦、脊髓膜，形成化膿性腦膜炎可出現(xiàn)嚴(yán)重的臨床癥狀如發(fā)熱、頭痛、腦膜刺激癥陽(yáng)性、甚至休克和DIC等；菌血癥和細(xì)菌的損傷作用使約半數(shù)患者出現(xiàn)皮下瘀斑革蘭陰性球菌盡管可以在鼻咽部形成帶菌狀態(tài)，但侵襲性的腦膜炎奈瑟菌感染多為新近感染，急性發(fā)病，發(fā)病時(shí)機(jī)體內(nèi)缺乏殺菌抗體。主要致病物質(zhì)是內(nèi)毒素：可引起發(fā)熱、微循環(huán)障礙，嚴(yán)重者可致內(nèi)毒素休克、血栓、DIC等依據(jù)莢膜多糖的抗原成分可分為：A、B、C、……等13個(gè)血清群，我國(guó)A群占95.8%，其余為B、C等群。革蘭陰性球菌淋病奈瑟菌臨床意義淋病的病原菌主要通過(guò)性接觸直接感染在分娩時(shí)通過(guò)產(chǎn)道感染新生兒臨床表現(xiàn)為：?jiǎn)渭冃粤懿∨枨谎卓谘什亢透亻T(mén)直腸淋病淋菌性結(jié)膜炎播散性淋病致病物質(zhì)包括菌毛、外膜蛋白、蛋白水解酶、脂多糖和鐵調(diào)節(jié)蛋白革蘭陰性球菌奈瑟菌形態(tài)革蘭陰性雙球菌直徑0.6~1.5μm

腎形或咖啡豆樣，凹面相對(duì)某些菌種形成莢膜三、生物學(xué)特性革蘭陰性球菌2．培養(yǎng)特性營(yíng)養(yǎng)要求高專(zhuān)性需氧，初次分離需5%~7%CO2和高濕度低于30℃不生長(zhǎng)孵育24h后在培養(yǎng)基上自溶腦膜炎奈瑟菌血瓊脂平板或巧克力瓊脂平板：光滑、濕潤(rùn)、透明或半透明、直徑1~2mm的不溶血、圓形、露珠狀菌落卵黃瓊脂平板：無(wú)色、光滑、濕潤(rùn)奶油狀菌落革蘭陰性球菌淋病奈瑟菌巧克力或MTM選擇性培養(yǎng)基（萬(wàn)古霉素）

:菌落圓形，光滑濕潤(rùn)、凸起、半透明自溶淋病奈瑟菌在巧克力瓊脂平板上的菌落特征革蘭陰性球菌3．生化特性氧化酶陽(yáng)性，觸酶陽(yáng)性4．抵抗力很弱四敏感：熱、寒冷、干燥、消毒劑對(duì)青霉素敏感近年來(lái)由質(zhì)粒介導(dǎo)的β內(nèi)酰胺酶所致的耐藥在淋病奈瑟菌中產(chǎn)生較多革蘭陰性球菌四、微生物檢驗(yàn)革蘭陰性球菌（一）腦膜炎奈瑟菌1、標(biāo)本采集

腦脊液、關(guān)節(jié)液、血液、瘀點(diǎn)穿刺液等采集后立即送檢標(biāo)本運(yùn)送時(shí)需要35℃保溫血平板床邊接種后置35℃孵育血標(biāo)本接種在血液培養(yǎng)瓶中置35℃孵育革蘭陰性球菌2、標(biāo)本直接檢查直接涂片檢查腦脊液直接或經(jīng)離心后取沉淀涂片皮膚瘀點(diǎn)滲出液涂片見(jiàn)白細(xì)胞內(nèi)外革蘭陰性雙球菌，可報(bào)告“檢出革蘭陰性雙球菌，疑似腦膜炎奈瑟菌”。有助于流行性腦脊髓膜炎早期診斷抗原檢查膠乳凝集試驗(yàn)和其他凝集試驗(yàn)包括A、C、Y、W125血清型的多價(jià)抗體和血清型B抗體檢測(cè)結(jié)果結(jié)合涂片和培養(yǎng)結(jié)果抗原檢測(cè)陽(yáng)性結(jié)果可作出快速、推測(cè)性診斷革蘭陰性球菌3、分離培養(yǎng)鑒定

腦脊液巧克力瓊脂或羊血瓊脂平板咽拭子或鼻咽拭子選擇性培養(yǎng)基上如改良的Thayer-Martin(MTM)、GC-Lect、NewYorkCity(NCY)等培養(yǎng)基血標(biāo)本經(jīng)增菌培養(yǎng)基增菌后，移種至巧克力瓊脂或羊血瓊脂平板置5%~7%CO235℃孵育，每隔24h觀察平板革蘭陰性球菌鑒定初步確定為奈瑟菌屬直徑1~2mm，灰褐色、光滑、半透明、稍扁的菌落涂片革蘭陰性雙球菌氧化酶觸酶陽(yáng)性進(jìn)一步：葡萄糖和麥芽糖陽(yáng)性、其他糖類(lèi)陰性可確定為腦膜炎奈瑟菌用分型血清確定血清型別平板上未發(fā)現(xiàn)菌落，繼續(xù)觀察72h后無(wú)菌生長(zhǎng)可報(bào)告為陰性革蘭陰性球菌（二）淋病奈瑟菌檢驗(yàn)程序革蘭陰性球菌1．標(biāo)本采集

陰道和宮頸分泌物用無(wú)菌塑料棒滌綸拭子，伸入陰道后穹隆或?qū)m頸內(nèi)1cm處停留10~15秒時(shí)間，蘸取尿道分泌物棄去前段膿性分泌物，留取后段作為標(biāo)本尿液直腸肛拭標(biāo)本廢棄第一根污染棉簽，用第二根棉簽醮取的分泌物新生兒結(jié)膜炎時(shí)應(yīng)采取眼結(jié)膜表面分泌物革蘭陰性球菌2．標(biāo)本直接檢查革蘭染色鏡檢男性尿道分泌物標(biāo)本中可見(jiàn)中性多形核細(xì)胞內(nèi)、外較多革蘭陰性雙球菌，有助于男性淋病早期診斷女性宮頸或直腸拭子標(biāo)本涂片中可見(jiàn)胞內(nèi)、外大量革蘭陰性雙球菌，由于女性陰道和直腸有許多正常菌群寄居，故涂片所見(jiàn)結(jié)果必須由培養(yǎng)結(jié)果證實(shí)方可報(bào)告新生兒結(jié)膜分泌物可見(jiàn)胞內(nèi)、外大量革蘭陰性雙球菌可初步診斷為淋球菌性結(jié)膜炎革蘭陰性球菌3．分離培養(yǎng)與鑒定選擇培養(yǎng)基如MTM，Martin-Lewis（ML），或NYC5%CO2孵育每隔24h觀察平板革蘭陰性球菌（1）形態(tài)和生化學(xué)鑒定可疑菌落直徑0.5~1mm，灰褐色、光滑、半透明呈露滴狀凸起的菌落確認(rèn)菌落涂片，見(jiàn)革蘭陰性雙球菌氧化酶和觸酶試驗(yàn)陽(yáng)性葡萄糖陽(yáng)性，其它糖類(lèi)陰性培養(yǎng)需觀察72h后無(wú)菌生長(zhǎng)可報(bào)告為陰性。革蘭陰性球菌（2）免疫學(xué)鑒定直接熒光染色凝集試驗(yàn)或免疫滲濾技術(shù)革蘭陰性球菌（3）分子生物學(xué)鑒定檢測(cè)靶片段的基因隱蔽性質(zhì)粒、染色體基因探針、抗淋病奈瑟菌胞嘧啶DNA甲基轉(zhuǎn)移酶基因、透明蛋白(opa)基因、菌毛DNA探針、rRNA基因探針和porA假基因?；蛱结橂s交、核酸擴(kuò)增革蘭陰性球菌藥物敏感性試驗(yàn)?zāi)紊幟粼囼?yàn)選擇藥物為青霉素、頭孢菌素及環(huán)丙沙星等。治療首選藥物為青霉素。革蘭陰性球菌第二節(jié)卡他莫拉菌卡他莫拉菌（M.catarrhalis）又稱(chēng)為卡他布蘭漢菌（Branhamaceae

catarrhalis）可存在于健康人群的上呼吸道導(dǎo)致中耳炎、鼻竇炎、慢性阻塞性肺炎免疫抑制和ICU患者可導(dǎo)致菌血癥社區(qū)呼吸道感染的主要病原體之一。

革蘭陰性球菌形態(tài)G-雙球菌有抗退色傾向卡他莫拉菌革蘭染色革蘭陰性球菌營(yíng)養(yǎng)要求不高血平板或巧克力平板：菌落灰白色、不透明、光滑凸起；繼培養(yǎng)，菌落干燥、堅(jiān)硬，整體推移感，不易乳化，NS中自凝革蘭陰性球菌微生物檢驗(yàn)中耳炎或鼻竇炎患者穿刺抽取標(biāo)本呼吸道感染患者采取合格痰標(biāo)本或支氣管灌洗液口咽部位存在卡他莫拉菌可污染痰液標(biāo)本痰液標(biāo)本直接涂片革蘭染色如出現(xiàn)多個(gè)中性粒細(xì)胞、柱狀上皮細(xì)胞以及大量的直徑為0.5~1.5μm革蘭陰性雙球菌可懷疑卡他莫拉菌感染

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