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DB22DB22/T3172.1—2020流感病毒HA和NA基因熒光RT-PCR檢測(cè)第1部分：H7N9亞型禽流感病毒Real-timeRT-PCRdetectiononHAandNAgenesofinfluenzavirusPart1：H7N9subtypeavianinfluenzavirus吉林省市場(chǎng)監(jiān)督管理廳發(fā)布I1Ct值：每個(gè)反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號(hào)達(dá)到的設(shè)定的閾值時(shí)所RT-PCR：反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（Reversetranscription-pTaq酶：Taq脫氧核糖核酸聚合酶（Thermusaquatic根據(jù)H7N9亞型禽流感病毒HA基因和NA基因序列設(shè)計(jì)特異引物和探針，探針結(jié)合部位在擴(kuò)增片段內(nèi)部。HA基因和NA基因探針?lè)謩e在5’端標(biāo)記發(fā)出的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)所吸收，儀器檢測(cè)不到熒光信號(hào)；而反應(yīng)進(jìn)行到延伸階段時(shí)，Taq酶發(fā)揮25’–TGCACAGGGAGAGGGAACTG–3’5’–CAAATTGTTGGTTGGTTTTTGC–3’38.1.2除商品化棉拭子、采樣袋外，上述采樣工具應(yīng)經(jīng)121℃±2℃,15min高壓滅菌并烘干或經(jīng)8.2.1.1根據(jù)動(dòng)物的種類，可采集咽喉拭子、泄殖腔拭子（禽）或鼻拭子（豬等其他動(dòng)樣品在震蕩器上充分混合后，將拭子中的液體擠出，3000r/min離心5min，吸取上清液轉(zhuǎn)入無(wú)用無(wú)菌的剪刀和鑷子剪取待檢樣品2.0g于研缽中充分研磨，再加10.0mLPBS（含有青霉素和鏈4反應(yīng)體系配制見(jiàn)表2與表3，每份檢測(cè)樣品的熒光RT-PCR體系為25μL。用旋渦振蕩器進(jìn)行混勻，RTEnzymeMix5U/μL（6.1RTEnzymeMix5U/μL（6.15Ct值均≤30.0，且HA基因與NA基因同時(shí)擴(kuò)增出特定的擴(kuò)增曲線，判為陽(yáng)性，報(bào)告樣品中

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