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DB22DB22/T2988—2019白靈菇和杏鮑菇菌種真實(shí)性鑒定ITS-RFLP法VerificationofgenuinenessforPleurotustuoliensisandPleurotuseryngiistrain—ITS-RFLP吉林省市場監(jiān)督管理廳發(fā)布I126.41mol/L三羥甲基氨基甲烷-鹽酸（Tris6.7異戊醇（C5H12O避光、密封、4℃保存。7.5低溫離心機(jī)：溫度參數(shù)范圍應(yīng)滿足0℃~4℃需求，轉(zhuǎn)數(shù)達(dá)到15000r/min。7.6恒溫水浴鍋：溫度參數(shù)范圍應(yīng)滿足28℃~40℃需求。7.7生化培養(yǎng)箱：溫度參數(shù)范圍應(yīng)滿足18℃~28℃需求。7.9冰箱：溫度參數(shù)范圍應(yīng)滿足-20℃~4℃需求。3無菌條件下，將斜面培養(yǎng)基上的菌株接種至100mL裝有4將樣品放置恒溫水浴鍋或者恒溫培養(yǎng)箱，37℃培養(yǎng)4h～6h。9.4.1.1將煮沸的的瓊脂糖凝膠液冷卻至65℃后緩慢倒入干燥的制膠容器內(nèi)，使其均勻覆蓋在容器底層，室溫冷卻至凝固，瓊脂糖溶液濃度為1.0%(用于DNA濃度和PCR檢測)和1.8%(用于酶切檢測)。9.4.1.2凝固后的膠板置于電泳槽內(nèi)，緩慢、垂直拔出梳子，添加1×TAE電泳緩沖液，直至沒過膠在點(diǎn)樣板上混合樣品與上樣緩沖液按比例5:1混勻，每加完一個(gè)樣品均更換移液器的槍頭。電壓在3V/cm～5V/cm之間，樣品由負(fù)極向正極移動(dòng)，當(dāng)溴酚藍(lán)移動(dòng)至膠板2/3處，停止電泳。將凝膠轉(zhuǎn)入玻璃或塑料容器中，加入0.5ug/mL核酸染料(EB、goldview等)中染色15min~重復(fù)處理提取樣品重復(fù)處理提取樣品重復(fù)處理三重復(fù)處理一重復(fù)處理15白靈菇和杏鮑菇的DNA片段大小在均在660bp±20bp。重復(fù)處理一重復(fù)處理二重復(fù)處理一重復(fù)處理二重復(fù)處理三杏鮑菇白靈菇杏鮑菇白靈菇杏鮑菇白靈菇杏鮑菇白靈菇10.3.1白靈菇酶切后的兩條片段大小分別為為510bp和150bp。10.3.2杏鮑菇酶切后的兩條片段大小分別為430bp和230bp。酶切處理酶切處理杏鮑菇酶切處理白靈菇酶切處理杏鮑菇酶切處理白靈菇酶切處理杏鮑菇酶切處理白靈菇酶切處理杏鮑菇酶切處理白靈菇重復(fù)實(shí)驗(yàn)一重復(fù)實(shí)驗(yàn)二重復(fù)實(shí)驗(yàn)三11鑒定bp,杏鮑菇酶切后兩條片段大小分別為430bp±10bp、230±106）
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