DB22T 2876-2018 黑木耳液體菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程　　

備案號：60805-2018DB22DB22/T2876—2018黑木耳液體菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程Productiontechnicalregulationsforliquidspawnonblackwoodear2018-07-30發(fā)布2018-08-30實施吉林省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布I1發(fā)酵罐實消fullfermentercultivat2液體菌種菌絲生長旺盛，達(dá)到生長對數(shù)期時結(jié)束培養(yǎng)，在無菌條件下從發(fā)酵罐通過傳送管在0.154.2.2液體發(fā)酵車間要求：動力系統(tǒng)完備需：水、電（停電需配備發(fā)電機(jī)）、蒸汽、空氣四大a)地面應(yīng)能防水、防腐蝕、防滲漏、防滑，易清洗，有適當(dāng)?shù)呐潘露龋?.0%～1.5%）和良好3菌種配制室、滅菌室、無菌接種室、恒溫培養(yǎng)室、搖瓶培養(yǎng)室、發(fā)酵配料室、發(fā)酵罐培養(yǎng)室、化驗室和菌種室規(guī)模要配套，布局合理，要有調(diào)溫設(shè)施?；炇液途N室要有相應(yīng)的實驗檢測設(shè)備和制種用的滅菌設(shè)施和常規(guī)用具。發(fā)酵罐、空氣壓縮機(jī)、空氣過濾器、高壓蒸汽滅菌鍋、凈化工作臺、恒溫回旋式振蕩器。應(yīng)有備用玻璃三角瓶、接種用火環(huán)圈、試管、量杯、容量瓶、玻璃漏斗、定量定性濾紙、精密pH試紙等生物實驗室常規(guī)用品。4.4培養(yǎng)原料應(yīng)符合NY/T528要求，生物制劑和天然材料的水不溶性固體物料應(yīng)過40目篩。經(jīng)省級以上農(nóng)作物品種審定委員會審(認(rèn))定或登記(備案)的品種應(yīng)符合NY/T528的規(guī)定，其他應(yīng)符合DB22/T2638的規(guī)定5生產(chǎn)工藝5.1工藝流程按照圖1的工藝流程進(jìn)行黑木耳液體菌種生產(chǎn)。圖1液體菌種生產(chǎn)工藝流程45.2.2.2滅菌121℃,滅菌30min。裝容量較大時，滅菌時間要適當(dāng)延長。滅菌完畢后，應(yīng)自然降壓，不應(yīng)強(qiáng)制5.2.2.3冷卻將滅菌后的液體培養(yǎng)基放入接種室內(nèi)超凈工作臺中進(jìn)行冷卻，冷卻至25℃~20℃。5.2.2.4接種5.2.2.5培養(yǎng)接種后，恒溫回旋式振蕩器培養(yǎng)6天～7天，振蕩頻率每分鐘150轉(zhuǎn)～180轉(zhuǎn)，培養(yǎng)溫度以25℃~28℃為宜。5.2.2.5.3檢查5.2.3.1.2對罐體內(nèi)、外和全部閥門用流水進(jìn)行沖洗，達(dá)到無死角、內(nèi)壁無任何培養(yǎng)料殘余55.2.3.1.3在發(fā)酵罐中加入適量的水），排氣管接入下水管道，將無菌空氣接入發(fā)酵罐底部的進(jìn)氣口，通入無菌空氣應(yīng)符合NY/T528要求。準(zhǔn)確掌握加水量，用水符合GB5749要求5.2.3.3.1將原材料分別用水溶解，倒入或用泵抽入發(fā)酵罐中。加水定容至所需體積，培養(yǎng)發(fā)酵罐內(nèi)蒸汽壓力達(dá)到0.105Mpa～0.125Mpa，溫度達(dá)到121℃~124℃,保持時間1小時。水出口排出。待溫度降至100℃,罐壓降至0.08Mpa，開始通入無菌空氣，打開上排氣閥，持續(xù)通入冷5.2.3.6接種b)調(diào)節(jié)排氣閥，使罐內(nèi)壓力降至0.0c)培養(yǎng)溫度24℃~28℃。a)母種應(yīng)以每個批號3支～5支，于4℃~6℃下貯存，貯存至經(jīng)轉(zhuǎn)接的栽培袋正常發(fā)菌；6注：樣品放置2℃~4℃保存7天。5.2.4.2檢驗?zāi)阜N、搖瓶液體種和發(fā)酵罐液體菌種生產(chǎn)的每個環(huán)節(jié)應(yīng)按照DB22/T2638要求，填寫詳實的錄，由具體操作人員現(xiàn)場記錄填寫，定期由主管領(lǐng)導(dǎo)審核，簽字后歸檔78菌液粘度高，靜置基本不分層；菌絲體稠密，菌球懸浮力好、在菌液中分可見黑木耳菌種液體培養(yǎng)中特有的菌絲形態(tài)，大量分枝菌絲分布，>0.89黑木耳菌絲在固體培養(yǎng)基上正常生長，