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備案號：56303-2017DB22DB22/T2688.3—2017飼料中三種致病菌檢測微滴數字PCR法第3部分：產氣莢膜梭菌DeterminationofthreepathogenicbacteriainfeedbydropletdigitalPCRmethodPart3：Clostridiumperfringens吉林省質量技術監(jiān)督局發(fā)布I本標準按照GB/T1.1-2009和GB/T20001.4-2015給出的規(guī)則1警示——使用本標準的人員應有正規(guī)實驗室工作的實踐經驗。本標準并未指出所有可能的安全問本標準規(guī)定了飼料中產氣莢膜梭菌檢測微滴數字PCR法的試劑和材料、儀器和設備、樣品、試驗步GB4789.1食品安全國家標準食品微生物學檢驗總則GB4789.13-2012食品安全國家標準食品微生物學檢驗WS/T230-2002臨床診斷中聚合酶鏈反應（PCR）技理及陽性微滴的個數與比例得出靶分子的起始拷貝數或濃度。本標準通針特異性引物和探針進行數字4.5裂解液：2%CTAB(cetyltrithylammoniumbromide，十六烷基三甲基溴化銨)，Tris(trishydroxymethylaminomethane，三羥甲基氨基甲烷)，1.4mol/LNaClEDTA(ethylenediaminetetr24.10異丙醇。探針-5＇-FAM-TCATCATTCAACCAAAGGAG按照GB/T14699.1對飼料進行采樣（6.1產氣莢膜），311143反應條件：95℃/5min，1個循環(huán)；95℃/15s，60℃/1min，40個循環(huán)；98℃/1根據數字PCR體系中陰性分割體系的終點熒光值設定熒光的閾值限。閾值限需要對空白和陽性擴增8.3.1樣品基因沒有得到擴增，擴增終點熒光信號小于閾值，可判定樣品結果8.3.2樣品基因得到擴增，擴增終點熒光

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