5年（2020-2024）高考1年模擬生物真題分類匯編（山東專用） 專題18 基因工程（原卷版）

2020-2024年五年高考真題分類匯編PAGEPAGE1專題18基因工程五年考情考情分析基因工程2020年山東卷第5題2020年山東卷第15題2020年山東卷第25題2021年山東卷第13題2021年山東卷第25題2022年山東卷第13題2022年山東卷第25題2023年山東卷第25題2024年山東卷第13題2024年山東卷第25題通常以具體情境，考查基因工程的原理、工具和基本操作程序，啟動(dòng)子的含義和功能，PCR技術(shù)的原理，限制酶的作用、基因表達(dá)載體的組成、啟動(dòng)子的作用等，題目難度系數(shù)大；其中啟動(dòng)子的插入位點(diǎn)和插入方向、報(bào)告基因的表達(dá)等都需要學(xué)生有很強(qiáng)的理解信息、獲取信息的能力、以及綜合運(yùn)用知識(shí)解決問題的科學(xué)思維和科學(xué)探究能力，通過基因工程考查學(xué)生的結(jié)構(gòu)與功能觀。1、（2024山東高考）關(guān)于“DNA的粗提取與鑒定”實(shí)驗(yàn)，下列說法正確的是（）A.整個(gè)提取過程中可以不使用離心機(jī)B.研磨液在4℃冰箱中放置幾分鐘后，應(yīng)充分搖勻再倒入燒杯中C.鑒定過程中DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)不發(fā)生改變D.僅設(shè)置一個(gè)對(duì)照組不能排除二苯胺加熱后可能變藍(lán)的干擾2、（2024山東高考）研究發(fā)現(xiàn)基因L能夠通過脫落酸信號(hào)途徑調(diào)控大豆的逆境響應(yīng)。利用基因工程技術(shù)編輯基因L，可培育耐鹽堿大豆品系。在載體上的限制酶BsaI切點(diǎn)處插入大豆基因L的向?qū)NA序列，將載體導(dǎo)入大豆細(xì)胞后，其轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物可引導(dǎo)核酸酶特異性結(jié)合基因組上的目標(biāo)序列并發(fā)揮作用。載體信息、目標(biāo)基因L部分序列及相關(guān)結(jié)果等如圖所示。（1）用PCR技術(shù)從大豆基因組DNA中擴(kuò)增目標(biāo)基因L時(shí)，所用的引物越短，引物特異性越______（填“高”或“低”）。限制酶在切開DNA雙鏈時(shí)，形成的單鏈突出末端為黏性末端，若用BsaI酶切大豆基因組DNA，理論上可產(chǎn)生的黏性末端最多有______種。載體信息如圖甲所示，經(jīng)BsaI酶切后，載體上保留的黏性末端序列應(yīng)為5'-______-3'和5'-______-3'。（2）重組載體通過農(nóng)桿菌導(dǎo)入大豆細(xì)胞，使用抗生素______篩選到具有該抗生素抗性的植株①∶④。為了鑒定基因編輯是否成功，以上述抗性植株的DNA為模板，通過PCR擴(kuò)增目標(biāo)基因L，部分序列信息及可選用的酶切位點(diǎn)如圖乙所示，PCR產(chǎn)物完全酶切后的電泳結(jié)果如圖丙所示。據(jù)圖可判斷選用的限制酶是______，其中純合的突變植株是______（填序號(hào)）。（3）實(shí)驗(yàn)中獲得1株基因L成功突變的純合植株，該植株具有抗生素抗性，檢測(cè)發(fā)現(xiàn)其體細(xì)胞中只有1條染色體有T-DNA插入。用抗生素篩選這個(gè)植株的自交子代，其中突變位點(diǎn)純合且對(duì)抗生素敏感的植株所占比例為______，篩選出的敏感植株可用于后續(xù)的品種選育。3、（2023山東高考）科研人員構(gòu)建了可表達(dá)J-V5融合蛋白的重組質(zhì)粒并進(jìn)行了檢測(cè)，該質(zhì)粒的部分結(jié)構(gòu)如圖甲所示，其中V5編碼序列表達(dá)標(biāo)簽短肽V5。（1）與圖甲中啟動(dòng)子結(jié)合的酶是____________。除圖甲中標(biāo)出的結(jié)構(gòu)外，作為載體，質(zhì)粒還需具備的結(jié)構(gòu)有________________（答出2個(gè)結(jié)構(gòu)即可）。（2）構(gòu)建重組質(zhì)粒后，為了確定J基因連接到質(zhì)粒中且插入方向正確，需進(jìn)行PCR檢測(cè)，若僅用一對(duì)引物，應(yīng)選擇圖甲中的引物___________。已知J基因轉(zhuǎn)錄的模板鏈位于b鏈，由此可知引物F1與圖甲中J基因的_____________（填“a鏈”或“b鏈”）相應(yīng)部分的序列相同。（3）重組質(zhì)粒在受體細(xì)胞內(nèi)正確表達(dá)后，用抗J蛋白抗體和抗V5抗體分別檢測(cè)相應(yīng)蛋白是否表達(dá)以及表達(dá)水平，結(jié)果如圖乙所示。其中，出現(xiàn)條帶1證明細(xì)胞內(nèi)表達(dá)了__________，條帶2所檢出的蛋白______________（填“是”或“不是”）由重組質(zhì)粒上的J基因表達(dá)的。4、（2022山東高考）關(guān)于“DNA的粗提取與鑒定”實(shí)驗(yàn)，下列說法錯(cuò)誤的是（）A.過濾液沉淀過程在4℃冰箱中進(jìn)行是為了防止DNA降解B.離心研磨液是為了加速DNA的沉淀C.在一定溫度下，DNA遇二苯胺試劑呈現(xiàn)藍(lán)色D.粗提取的DNA中可能含有蛋白質(zhì)5、（2022山東高考）某種類型的白血病由蛋白P引發(fā)，蛋白UBC可使P被蛋白酶識(shí)別并降解，藥物A可通過影響這一過程對(duì)該病起到治療作用。為探索藥物A治療該病的機(jī)理，需構(gòu)建重組載體以獲得融合蛋白FLAG-P和FLAG-P△。P△是缺失特定氨基酸序列的P，F(xiàn)LAG是一種短肽，連接在P或P△的氨基端，使融合蛋白能與含有FLAG抗體的介質(zhì)結(jié)合，但不影響P或P△的功能。（1）為構(gòu)建重組載體，需先設(shè)計(jì)引物，通過PCR特異性擴(kuò)增P基因。用于擴(kuò)增P基因的引物需滿足的條件是_______、為使PCR產(chǎn)物能被限制酶切割，需在引物上添加相應(yīng)的限制酶識(shí)別序列，該限制酶識(shí)別序列應(yīng)添加在引物的______（填“3'端”或“5'端”）。（2）PCR擴(kuò)增得到的P基因經(jīng)酶切連接插入載體后，與編碼FLAG的序列形成一個(gè)融合基因，如圖甲所示，其中“ATGTGCA”為P基因編碼鏈起始序列。將該重組載體導(dǎo)入細(xì)胞后，融合基因轉(zhuǎn)錄出的mRNA序列正確，翻譯出的融合蛋白中FLAG的氨基酸序列正確，但P基因?qū)?yīng)的氨基酸序列與P不同。據(jù)圖甲分析，出現(xiàn)該問題的原因是______。修改擴(kuò)增P基因時(shí)使用的帶有EcoRⅠ識(shí)別序列的引物來解決該問題，具體修改方案是______。（3）融合蛋白表達(dá)成功后，將FLAG-P、FLAG-P△、藥物A和UBC按照?qǐng)D乙中的組合方式分成5組。各組樣品混勻后分別流經(jīng)含F(xiàn)LAG抗體的介質(zhì)，分離出與介質(zhì)結(jié)合的物質(zhì)并用UBC抗體檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果如圖丙所示。已知FLAG-P和FLAG-P△不能降解UBC，由①②③組結(jié)果的差異推測(cè)，藥物A的作用是______；由②④組或③⑤組的差異推測(cè)，P△中缺失的特定序列的作用是______。（4）根據(jù)以上結(jié)果推測(cè)，藥物A治療該病的機(jī)理是______。6、（2020山東高考）雙脫氧核苷三磷酸（ddNTP）與脫氧核苷三磷酸（dNTP）的結(jié)構(gòu)如圖所示。已知ddNTP按堿基互補(bǔ)配對(duì)的方式加到正在復(fù)制的子鏈中后，子鏈的延伸立即終止。某同學(xué)要通過PCR技術(shù)獲得被32p標(biāo)記且以堿基“C”為末端的、不同長度的子鏈DNA片段。在反應(yīng)管中已經(jīng)有單鏈模板、引物、DNA聚合酶和相應(yīng)的緩沖液等，還需要加入下列哪些原料①dGTP，dATP，dTTP，dCTP②dGTP，dATP，dTTP③α位32p標(biāo)記的ddCTP④γ位32p標(biāo)記的ddCTPA.①③ B.①④ C.②③ D.②④7、（2020山東高考）研究人員用三種基因探針，通過分子雜交技術(shù)分別對(duì)某動(dòng)物三種細(xì)胞中的mRNA進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果如下表所示。下列說法錯(cuò)誤的是細(xì)胞雜交帶探針輸卵管細(xì)胞未成熟紅細(xì)胞胰島B細(xì)胞卵清蛋白基因探針有無無β—珠蛋白基因探針無有無胰島素基因探針無無有A.三種探針的核苷酸序列不同B.有雜交帶出現(xiàn)表明相應(yīng)基因發(fā)生了轉(zhuǎn)錄C.用上述探針分別檢測(cè)三種細(xì)胞的DNA，實(shí)驗(yàn)結(jié)果不變D.可用mRNA逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的DNA制作相應(yīng)基因的探針8、（2020山東高考）基因定點(diǎn)整合可替換特定基因，該技術(shù)可用于單基因遺傳病的治療。苯丙酮尿癥是由PKU基因突變引起的，將正常PKU基因定點(diǎn)整合到PKU基因突變的小鼠胚胎干細(xì)胞的染色體DNA上，替換突變基因，可用來研究該病的基因治療過程。定點(diǎn)整合的過程是：從染色體DNA上突變PKU基因兩側(cè)各選擇一段DNA序列HB1和HB2，根據(jù)其堿基序列分別合成HB1和HB2，再將兩者分別與基因、連接，中間插入正常PKU基因和標(biāo)記基因，構(gòu)建出如圖所示的重組載體。重組載體和染色體DNA中的HB1和HB2序列發(fā)生交換，導(dǎo)致兩者之間區(qū)域發(fā)生互換，如圖所示。（1）構(gòu)建重組載體時(shí)，常用的工具酶有________。該實(shí)驗(yàn)用小鼠胚胎干細(xì)胞作為PKU基因的受體細(xì)胞以培育出轉(zhuǎn)基因小鼠，除了胚胎干細(xì)胞能大量增殖外，還因?yàn)榕咛ジ杉?xì)胞_________。（2）為獲得小鼠的胚胎干細(xì)胞，可將小鼠囊胚中的_________取出，并用_________處理使其分散成單個(gè)細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)過程中大部分細(xì)胞會(huì)貼附在培養(yǎng)瓶的表面生長，這種現(xiàn)象稱為___________。（3）用圖中重組載體轉(zhuǎn)化胚胎干細(xì)胞時(shí)，會(huì)出現(xiàn)PKU基因錯(cuò)誤整合。錯(cuò)誤整合時(shí)，載體的兩個(gè)中至少會(huì)有一個(gè)與一起整合到染色體DNA上。已知含有的細(xì)胞具有G418的抗性，、的產(chǎn)物都能把DHPG轉(zhuǎn)化成有毒物質(zhì)而使細(xì)胞死亡。轉(zhuǎn)化后的胚胎干細(xì)胞依次在含有G418及同時(shí)含有G418和DHPG的培養(yǎng)液中進(jìn)行培養(yǎng)，在雙重選擇下存活下來的是__________的胚胎干細(xì)胞，理由是_________。（4）將篩選得到的胚胎干細(xì)胞培育成小鼠，從個(gè)體生物學(xué)水平檢測(cè)，若小鼠__________，說明PKU基因成功表達(dá)。9、（2021山東高考）粗提取DNA時(shí)，向雞血細(xì)胞液中加入一定量的蒸餾水并攪拌，過濾后所得濾液進(jìn)行下列處理后再進(jìn)行過濾，在得到的濾液中加入特定試劑后容易提取出DNA相對(duì)含量較高的白色絲狀物的處理方式是（）A.加入適量的木瓜蛋白酶B.37～40℃的水浴箱中保溫10～15分鐘C.加入與濾液體積相等的、體積分?jǐn)?shù)為95%的冷卻的酒精D.加入NaCl調(diào)節(jié)濃度至2mol/L→過濾→調(diào)節(jié)濾液中NaCl濃度至0．14mol/L10、（2021山東高考）人類γ基因啟動(dòng)子上游的調(diào)控序列中含有BCL11A蛋白結(jié)合位點(diǎn)，該位點(diǎn)結(jié)合BCL11A蛋白后，γ基因的表達(dá)被抑制。通過改變?cè)摻Y(jié)合位點(diǎn)的序列，解除對(duì)γ基因表達(dá)的抑制，可對(duì)某種地中海貧血癥進(jìn)行基因治療。科研人員擴(kuò)增了γ基因上游不同長度的片段，將這些片段分別插入表達(dá)載體中進(jìn)行轉(zhuǎn)化和熒光檢測(cè)，以確定BCL11A蛋白結(jié)合位點(diǎn)的具體位置。相關(guān)信息如圖所示。（1）為將擴(kuò)增后的產(chǎn)物定向插入載體指導(dǎo)熒光蛋白基因表達(dá)，需在引物末端添加限制酶識(shí)別序列。據(jù)圖可知，在F1～F7末端添加的序列所對(duì)應(yīng)的限制酶是____，在R末端添加的序列所對(duì)應(yīng)的限制酶是_____。本實(shí)驗(yàn)中，從產(chǎn)物擴(kuò)增到載體構(gòu)建完成的整個(gè)過程共需要____種酶。（2）將構(gòu)建的載體導(dǎo)入除去BCL11A基因的受體細(xì)胞，成功轉(zhuǎn)化后，含F(xiàn)1～F6與R擴(kuò)增產(chǎn)物的載體表達(dá)熒光蛋白，受體細(xì)胞有熒光，含F(xiàn)7與R擴(kuò)增產(chǎn)物的受體細(xì)胞無熒光。含F(xiàn)7與R擴(kuò)增產(chǎn)物的受體細(xì)胞無熒光的原因是____。（3）向培養(yǎng)液中添加適量的雌激素，含F(xiàn)1～F4與R擴(kuò)增產(chǎn)物的受體細(xì)胞不再有熒光，而含F(xiàn)5～F6與R擴(kuò)增產(chǎn)物的受體細(xì)胞仍有熒光。若γ基因上游調(diào)控序列上與引物序列所對(duì)應(yīng)的位置不含有BCL11A蛋白的結(jié)合位點(diǎn)序列，據(jù)此結(jié)果可推測(cè)，BCL11A蛋白結(jié)合位點(diǎn)位于_____，理由是___。一、單選題1．（2024·山東德州·二模）DNA分子的堿基具有吸收260nm波長光的特性。當(dāng)DNA兩條鏈堿基緊密連接時(shí)，吸光度偏低；兩條鏈分離時(shí)，吸光度升高，因此DNA變性可通過DNA溶液對(duì)260nm波長光的吸光度來檢測(cè)。肺炎鏈球菌DNA的變性曲線如圖所示，吸光度達(dá)到最大值的50%時(shí)的溫度稱為熔解溫度（Tm）。下列說法正確的是（）A．加熱會(huì)破壞脫氧核苷酸之間的磷酸二酯鍵使DNA變性B．A、T堿基對(duì)所占比例越高的DNA，變性曲線中Tm值越高C．加熱至約70℃時(shí)DNA兩條鏈從一端向另一端逐漸分離D．利用PCR技術(shù)檢測(cè)目的基因時(shí)需要先將DNA變性2．（2024·山東威?！ざ＃│?3多不飽和脂肪酸（LCPUFA）有預(yù)防心血管疾病的作用，但大多數(shù)動(dòng)物體內(nèi)不能合成。科研人員利用轉(zhuǎn)染技術(shù)（將外源DNA轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞的技術(shù)）將LCPUFA—合成酶基因（fat-1基因，含1229bp）導(dǎo)入小鼠受精卵，培育出轉(zhuǎn)基因小鼠，基本流程如下圖甲所示。圖乙表示提取不同實(shí)驗(yàn)組別小鼠受精卵DNA后，利用fat-1基因的引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增后電泳的結(jié)果。下列說法錯(cuò)誤的是（

）A．采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法可確保圖甲中轉(zhuǎn)染的效果B．PCR擴(kuò)增3輪后，只含一種引物的DNA分子的比例為1/4C．由圖乙可知，只有2組轉(zhuǎn)染成功D．若fat-l基因單點(diǎn)插入，則轉(zhuǎn)基因小鼠相互交配產(chǎn)生的大多數(shù)后代體內(nèi)能合成LCPUFA3．（2024·山東·二模）由于PCR擴(kuò)增出的目的基因末端為平末端，且無合適的限制酶識(shí)別序列，需借助中間載體P將目的基因接入載體E。下圖為兩種載體的結(jié)構(gòu)和相關(guān)限制酶的識(shí)別序列，下列敘述正確的是（

）

A．構(gòu)建重組載體P時(shí)，應(yīng)選擇EcoRV進(jìn)行酶切，再用T4DNA連接酶連接B．為了便于該目的基因接入載體E，可用限制酶EcoRV或SmaI切割載體PC．載體P不能作為基因表達(dá)載體，是因?yàn)樗缓鹗济艽a子和終止密碼子D．若受體細(xì)胞表現(xiàn)出抗性基因的相應(yīng)性狀，表明重組載體成功導(dǎo)入受體細(xì)胞4．（2024·山東·模擬預(yù)測(cè)）研究人員用酶和酶兩種限制酶同時(shí)處理某DNA分子和質(zhì)粒，得到的DNA片段如圖所示。圖中DNA片段只注明了黏性末端處的堿基種類，其他堿基的種類未注明。下列敘述錯(cuò)誤的是（

）A．該DNA分子和質(zhì)粒上均含有酶的一個(gè)切割位點(diǎn)和酶的一個(gè)切割位點(diǎn)B．根據(jù)圖示信息不能確定圖中形成的不同黏性末端與這兩種限制酶的對(duì)應(yīng)關(guān)系C．用T4DNA連接酶或E.coliDNA連接酶均可以將片段乙和片段丁連接起來D．片段乙、片段丁、片段戊可依次連接形成一個(gè)環(huán)狀DNA分子5．（2024·山東淄博·二模）dNTP（包括dATP、dTTP、dGTP、dCTP）的結(jié)構(gòu)與ATP類似，除堿基不同外，dNTP含有脫氧核糖。與dNTP相比，ddNTP的五碳糖為雙脫氧核糖，其3'碳位為-H且不能與磷酸形成化學(xué)鍵?，F(xiàn)有甲~丁四個(gè)PCR反應(yīng)體系，甲體系中含有放射性磷標(biāo)記的ddATP（記作ddATP+）和DNA模板鏈。PCR完成后，經(jīng)電泳（分子量小的DNA在電場(chǎng)中移動(dòng)快）將甲體系中一組長度不等的DNA單鏈分離。丙、乙、丁三個(gè)PCR體系與甲相似，分別用于檢測(cè)T、C、G的堿基序列，檢測(cè)結(jié)果如圖。下列說法正確的是（

）A．ddATP+中的放射性磷酸基團(tuán)應(yīng)位于ddATP的末端B．甲體系中除含ddATP+外，還應(yīng)含有dTTP、dGTP、dCTPC．新?lián)饺朊撗鹾塑账嵬ㄟ^磷酸二酯鍵連接在子鏈的5'端D．模板DNA的堿基序列為3'CTGGACTGACAT5'6．（2024·山東濟(jì)寧·三模）變性梯度凝膠電泳（DGGE）是根據(jù)DNA在不同濃度的變性劑中解鏈程度的不同，導(dǎo)致電泳遷移率發(fā)生變化，從而將片段大小相同而堿基組成不同的DNA片段分開。當(dāng)DNA片段泳動(dòng)到某一濃度的變性劑位置時(shí)，DNA發(fā)生解旋變性，導(dǎo)致電泳遷移率下降，最終會(huì)停留在某一位置。下列說法正確的是（

）A．提高電泳的溫度有利于提高分離效率B．DGGE技術(shù)可用于基因突變檢測(cè)及相關(guān)研究C．DNA中的A、T堿基含量越高越不容易發(fā)生變性D．電泳時(shí)需將待測(cè)DNA與電泳緩沖液混合后注入加樣孔內(nèi)7．（2024·山東·模擬預(yù)測(cè)）天然β-淀粉酶大多耐熱性差，不利于工業(yè)化應(yīng)用。某天然β-淀粉酶由484個(gè)氨基酸構(gòu)成，研究發(fā)現(xiàn)，將該酶第476位天冬氨酸替換為天冬酰胺，耐熱性明顯提升。我國學(xué)者借助PCR改造β-淀粉酶基因（如圖，①~④表示引物片段），并將改造的基因與pLN23質(zhì)粒重組后導(dǎo)入大腸桿菌，最終獲得耐高溫的β-淀粉酶。下列相關(guān)敘述正確的是（

）

A．PCR中使用的聚合酶屬于以RNA為模板的DNA聚合酶B．由圖可知，β-淀粉酶基因改造方案中需用到引物①和④C．改造后的基因應(yīng)該插入pLN23質(zhì)粒的起始密碼子的下游D．利用PCR在分子水平上確定目的基因是否轉(zhuǎn)錄需用到逆轉(zhuǎn)錄酶8．（2024·山東濰坊·二模）從大腸桿菌中提取某條mRNA逆轉(zhuǎn)錄形成一條cDNA單鏈并測(cè)序，測(cè)得該序列為5'-?CGTAGC，?-3'?，F(xiàn)將該序列形成雙鏈，構(gòu)建表達(dá)載體并導(dǎo)入細(xì)胞中表達(dá)形成肽鏈。反密碼子與對(duì)應(yīng)的氨基酸關(guān)系如下表所示。下列說法錯(cuò)誤的是（

）反密碼子（方向?yàn)?'到5'）CGACGUUGCACGAGCGCU氨基酸丙氨酸丙氨酸蘇氨酸半胱氨酸絲氨酸精氨酸A．5'-GCU-3'和5'-GCA-3'是編碼丙氨酸的密碼子B．編碼該mRNA的DNA序列的模板鏈與該cDNA單鏈序列相同C．構(gòu)建表達(dá)載體時(shí)該cDNA單鏈的3'端與啟動(dòng)子相連D．該細(xì)胞表達(dá)的多肽序列為“?-丙氨酸-半胱氨酸-?”9．（2024·山東濟(jì)南·三模）臨床上可采用PCR和DNA反向點(diǎn)雜交相結(jié)合的檢測(cè)技術(shù)對(duì)HPV基因進(jìn)行分型，過程如下：設(shè)計(jì)出針對(duì)已知有致癌風(fēng)險(xiǎn)的23種HPV基因的特異性引物并標(biāo)記上會(huì)發(fā)生顯色反應(yīng)的生物素，通過PCR對(duì)待測(cè)樣本DNA進(jìn)行擴(kuò)增，再將擴(kuò)增產(chǎn)物直接與固定在膜上的分型基因探針（包括17種高危型和6種低危型）進(jìn)行雜交。經(jīng)顯色處理后，與固定化探針結(jié)合的HPV基因就會(huì)在相應(yīng)位置產(chǎn)生顯色反應(yīng)，從而判斷待測(cè)樣本是否被含有這些HPV基因的病毒感染。有關(guān)說法錯(cuò)誤的是（）A．生物素應(yīng)標(biāo)記在引物的5’端B．該檢測(cè)技術(shù)需要對(duì)擴(kuò)增的DNA樣本進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳C．該檢測(cè)技術(shù)具有高度的特異性，能夠準(zhǔn)確地區(qū)分不同類型的HPV病毒D．反向點(diǎn)雜交是通過分型基因探針與擴(kuò)增的目的片段堿基互補(bǔ)配對(duì)結(jié)合在一起的10．（2024·山東濱州·二模）染色體DNA復(fù)制時(shí)需要一小段RNA作為引物，這是因?yàn)镈NA聚合酶只能從引物的3'端連接脫氧核苷酸。復(fù)制時(shí)兩條子鏈的延伸方向相反，其中一條子鏈稱為前導(dǎo)鏈，該鏈連續(xù)延伸，另一條稱為后隨鏈，該鏈逐段延伸，這些片段稱為岡崎片段，如圖1所示。圖2表示圖1中一段RNA引物去除并修復(fù)的過程。下列說法錯(cuò)誤的是（）A．酶1可以切除RNA片段，但不能切除與脫氧核苷酸連接的核糖核苷酸B．染色體DNA復(fù)制需要RNA聚合酶、DNA連接酶的參與C．每個(gè)岡崎片段的形成和其引物去除并修復(fù)的過程需兩次DNA聚合酶的催化D．染色體DNA復(fù)制結(jié)束并切除所有引物后形成的兩個(gè)子代DNA分子堿基序列完全相同11．（2024·山東泰安·二模）稻米胚乳直鏈淀粉含量高會(huì)導(dǎo)致食用品質(zhì)差。研究發(fā)現(xiàn)，水稻蠟質(zhì)基因（Wx）編碼直鏈淀粉合成酶。若Wx基因中第226位堿基是正常的G，該位點(diǎn)所在內(nèi)含子能被正常剪接，胚乳中直鏈淀粉含量最高，基因型記做GG；若該位點(diǎn)突變成T，則不能被正常剪接，胚乳中直鏈淀粉合成水平會(huì)降低，基因型記做TT。為檢測(cè)Wx基因該位點(diǎn)堿基是G或T，研究人員以待測(cè)水稻葉片總DNA為材料，以Wx基因片段設(shè)計(jì)引物如圖所示，對(duì)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)AccⅠ酶切后電泳。已知引物1為5'-GCTTCACTTCTCTGCTTGTG-3'，兩引物之間無另外的AccⅠ酶的識(shí)別位點(diǎn)。下列說法正確的是（

）A．該實(shí)驗(yàn)中需設(shè)計(jì)的引物2為5'-TTCAACTCTCGTTAAATCAT-3'B．若酶切產(chǎn)物只能觀察到450bp的DNA條帶，則表明該水稻品種為TT型C．GT雜合型水稻品種酶切電泳結(jié)果為3條條帶D．組成上述兩種淀粉合成酶的氨基酸種類不同，數(shù)目相同12．（2024·山東·二模）可利用基因芯片技術(shù)檢測(cè)棉花基因在胚珠和纖維組織中的表達(dá)情況，基因芯片的制作和檢測(cè)流程如下；將棉花基因組中的各基因分別進(jìn)行PCR擴(kuò)增→再將各基因擴(kuò)增產(chǎn)物按一定順序點(diǎn)在玻璃板上的相應(yīng)位置，變性、固定→分別從棉花胚珠和纖維中分離總mRNA，反轉(zhuǎn)錄生成cDNA→將兩種cDNA分別用綠色和紅色熒光染料標(biāo)記→將標(biāo)記后的cDNA與基因芯片雜交→進(jìn)行熒光檢測(cè)（若綠色和紅色疊加則呈現(xiàn)黃色）。下列說法錯(cuò)誤的是（

）A．逆轉(zhuǎn)錄過程與芯片雜交過程的堿基互補(bǔ)配對(duì)方式相同B．若芯片上某基因處的紅色熒光較強(qiáng)，說明該基因在棉花纖維組織中表達(dá)水平較高C．若芯片上某基因處顯示黃色，可能是由于該基因在兩種組織中均表達(dá)D．若某基因處只出現(xiàn)紅色或綠色，該基因可能是組織特異性表達(dá)的基因13．（2024·山東日照·二模）反向PCR是利用已知序列設(shè)計(jì)引物對(duì)未知序列進(jìn)行擴(kuò)增的技術(shù)，其過程如下圖。下列敘述錯(cuò)誤的是（

）A．過程①可用同種限制酶切割磷酸和脫氧核糖之間的磷酸二酯鍵B．過程②需用DNA連接酶將酶切片段環(huán)化以實(shí)現(xiàn)對(duì)未知序列的擴(kuò)增C．過程③需添加方向相對(duì)的引物1和3以便DNA聚合酶從其3′端延伸子鏈D．過程③中將溫度調(diào)至72℃的目的是使引物與模板鏈通過堿基互補(bǔ)配對(duì)結(jié)合14．（2024·山東濟(jì)寧·二模）關(guān)于“DNA粗提取和鑒定”以及“DNA片段的擴(kuò)增及電泳鑒定”實(shí)驗(yàn)，下列說法錯(cuò)誤的是（）A．將洋蔥研磨液離心是為了加速雜質(zhì)的沉淀B．根據(jù)DNA在不同濃度NaCl溶液中的溶解度不同，可去除部分雜質(zhì)C．DNA分子在電場(chǎng)作用下可以帶上正電荷或負(fù)電荷D．PCR實(shí)驗(yàn)中使用的微量離心管和槍頭在使用前需進(jìn)行高壓滅菌處理15．（2024·山東棗莊·二模）DNA的雙鏈中，轉(zhuǎn)錄時(shí)作為模板功能的鏈叫作反義鏈，另一條叫作有義鏈。下圖是DNA分子中某些基因有義鏈和反義鏈?zhǔn)疽鈭D。下列說法錯(cuò)誤的是（）A．根據(jù)啟動(dòng)子和終止子的相對(duì)位置可以判斷哪條鏈作為反義鏈B．不同的基因可能同時(shí)復(fù)制，也可能同時(shí)轉(zhuǎn)錄C．DNA分子的一條鏈對(duì)不同基因來說，有的是有義鏈，有的是反義鏈D．基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯都是沿著模板的3'端到5'端進(jìn)行的二、多選題16．（2024·山東青島·三模）科學(xué)家將某病毒抗原蛋白的部分編碼序列（RBD）拼接成融合基因2RBD和3RBD，探究RBD的二聚體蛋白和三聚體蛋白能否模擬RBD的天然構(gòu)象并獲得高效免疫原性。為鑒定重組質(zhì)粒是否構(gòu)建成功，將重組質(zhì)粒用NcoI和SacI雙酶切處理后電泳，結(jié)果如圖，其中泳道1為雙酶切pNZ8149-2RBD，兩個(gè)條帶大小分別為2507bp和2020bp。將構(gòu)建好的重組質(zhì)粒分別導(dǎo)入工程菌中進(jìn)行表達(dá)產(chǎn)物的檢測(cè)。下列說法正確的是（

）A．PCR擴(kuò)增融合基因時(shí)，在引物的3'端添加相應(yīng)限制酶的識(shí)別序列B．據(jù)圖可知，融合基因3RBD的長度為2686bpC．泳道2呈現(xiàn)一個(gè)條帶的原因是酶切pNZ8149-3RBD后產(chǎn)生的兩個(gè)片段大小相近D．從工程菌細(xì)胞表面提取蛋白質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)，從而進(jìn)一步比較兩者的免疫原性17．（2024·山東臨沂·二模）丙型肝炎是由丙型肝炎病毒（HCV）引起的一種傳染病。為研制針對(duì)HCV的多肽疫苗，某研究小組構(gòu)建LTB-R9-Bp融合基因的過程如圖，進(jìn)而構(gòu)建出融合基因表達(dá)載體，其中LTB是一種免疫增強(qiáng)劑基因，R9-Bp是HCV兩個(gè)相連的包膜蛋白基因。下列說法正確的是（

）A．PCR反應(yīng)體系中需加入待擴(kuò)增的模板、引物、原料以及耐高溫的DNA聚合酶B．若要大量擴(kuò)增LTB-R9-Bp融合基因，可選擇引物P2和引物P3繼續(xù)進(jìn)行PCRC．融合基因表達(dá)載體的組成元件有融合基因、標(biāo)記基因、啟動(dòng)子和終止密碼子等D．若利用轉(zhuǎn)基因植物生產(chǎn)該疫苗，需用到基因工程、植物組織培養(yǎng)和抗原抗體雜交技術(shù)18．（2024·山東青島·二模）TaIBH1-2D是小麥中一個(gè)調(diào)控千粒重的關(guān)鍵基因。為驗(yàn)證TaIBHI-2D的功能，研究人員構(gòu)建了過表達(dá)株系，可利用酶切法檢驗(yàn)TaIBH1-2D與載體是否連接，圖1三個(gè)泳道分別是用不同的限制酶完全酶切后（只考慮圖示酶切位點(diǎn)），產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳的結(jié)果；同時(shí)構(gòu)建了敲除TaIBH1-2D基因的突變體。圖2統(tǒng)計(jì)了不同植株的千粒重。下列說法正確的是（

）A．電泳的緩沖液中含指示劑，可在紫外燈下被檢測(cè)出來B．泳道1為單酶切空載體，泳道2為單酶切的重組載體C．泳道3為雙酶切的重組載體，且目的基因與載體正確連接D．由圖2分析，TaIBH1-2D負(fù)調(diào)控小麥千粒重19．（2024·山東泰安·模擬預(yù)測(cè)）為使玉米獲得抗除草劑性狀，科研人員進(jìn)行了相關(guān)操作(如圖所示)。含有內(nèi)含子的報(bào)告基因不能在原核生物中正確表達(dá)，其正確表達(dá)產(chǎn)物能催化無色物質(zhì)K呈現(xiàn)藍(lán)色。轉(zhuǎn)化過程中愈傷組織表面常殘留農(nóng)桿菌，會(huì)導(dǎo)致未轉(zhuǎn)化的愈傷組織可能在含除草劑的培養(yǎng)基中生長。下列敘述錯(cuò)誤的是（

）

A．T-DNA可將基因G轉(zhuǎn)移并整合到愈傷組織細(xì)胞的染色體DNA上B．利用物質(zhì)K和抗生素進(jìn)行篩選1，可獲得農(nóng)桿菌的藍(lán)色菌落C．利用物質(zhì)K和除草劑進(jìn)行篩選2，更易于獲得抗除草劑的轉(zhuǎn)基因植株D．提高培養(yǎng)基中細(xì)胞分裂素和生長素的比值，有利于誘導(dǎo)生根20．（2024·山東·模擬預(yù)測(cè)）科學(xué)家發(fā)現(xiàn)一種名為Tat-SIRT5-CTM的細(xì)胞穿透肽，其可以抑制小膠質(zhì)細(xì)胞中炎癥細(xì)胞因子的表達(dá)，使神經(jīng)元免受損傷。研究者欲通過基因工程來生產(chǎn)Tat-SIRT5-CTM，如圖是采用PCR技術(shù)檢測(cè)目的基因插入染色體的位置的流程圖。下列說法正確的是（）A．Tat-SIRT5-CTM可防止某些疾病造成腦損傷B．可利用抗原—抗體雜交技術(shù)檢測(cè)穿透肽的表達(dá)量C．轉(zhuǎn)基因技術(shù)中目的基因插入染色體的位點(diǎn)通常具有確定性D．Ⅰ過程不能利用不同的限制酶切割，來構(gòu)建圖中的環(huán)狀DNA三、非選擇題21．（2024·山東青島·三模）乳酸菌是乳酸的傳統(tǒng)生產(chǎn)菌，但耐酸能力較差，影響產(chǎn)量。釀酒酵母耐酸能力較強(qiáng)，但不產(chǎn)生乳酸。研究者將乳酸菌的乳酸脫氫酶基因（LDH）插入釀酒酵母表達(dá)載體pAUR123（圖1）中，經(jīng)過轉(zhuǎn)化、篩選、鑒定和培養(yǎng)，獲得了產(chǎn)乳酸的商用釀酒酵母菌。(1)研究者將LDH基因編碼序列中的同義密碼子（一種氨基酸有兩種或者兩種以上的遺傳密碼子）替換為釀酒酵母偏好的密碼子，替換的目的是。再通過法將核苷酸按照順序一個(gè)一個(gè)連接起來，由此獲得少量的LDH。(2)圖2所示LDH的部分序列和相應(yīng)限制酶識(shí)別序列，AUG為真核生物偏好的起始密碼子，利用E．coliDNA連接酶將LDH正確插入pAUR123載體時(shí)，應(yīng)分別選擇、對(duì)目的基因和載體進(jìn)行酶切處理。(3)將得到的重組pAUR123表達(dá)載體，轉(zhuǎn)入經(jīng)處理的大腸桿菌，接種于液體培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，其目的是。再將重組表達(dá)載體和不能合成尿嘧啶的釀酒酵母細(xì)胞懸液混合，轉(zhuǎn)化后的細(xì)胞稀釋涂布于不含尿嘧啶的培養(yǎng)基中進(jìn)行篩選，據(jù)此推測(cè)，pAUR123上的標(biāo)記基因?yàn)椤?4)通過技術(shù)檢測(cè)釀酒酵母菌株中是否轉(zhuǎn)錄出LDH的mRNA。欲對(duì)轉(zhuǎn)LDH基因釀酒酵母發(fā)酵產(chǎn)乳酸能力進(jìn)行檢測(cè)，其實(shí)驗(yàn)思路是。22．（2024·山東菏澤·一模）酵母是一種能夠引發(fā)有機(jī)源或者動(dòng)物源物質(zhì)發(fā)酵的真菌，它有許多分類，其中釀酒酵母是知名度最高，也是與人類關(guān)系最廣泛的一種酵母。我國是世界上啤酒生產(chǎn)和消費(fèi)大國，啤酒是以大麥為主要原料經(jīng)酵母發(fā)酵制成的。請(qǐng)回答下列問題：(1)為了制備啤酒酵母分離培養(yǎng)基，實(shí)驗(yàn)人員將馬鈴薯去皮切塊后高壓煮沸，過濾后補(bǔ)加蒸餾水至1L，加入葡萄糖和瓊脂后加熱融化。將馬鈴薯高壓煮沸的目的是，該培養(yǎng)基的碳源主要包括，用于裝培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿一般用法進(jìn)行滅菌處理。(2)啤酒在工業(yè)化生產(chǎn)過程中，發(fā)酵過程分為兩個(gè)階段。第一階段結(jié)束后，發(fā)酵液在的環(huán)境下儲(chǔ)存一段時(shí)間進(jìn)行第二階段，形成澄清、成熟的啤酒。(3)下圖所示為用釀酒酵母生產(chǎn)乙肝疫苗的過程圖，回答相關(guān)問題：①研究人員擬用PCR擴(kuò)增目的基因片段，已知目的基因的一條鏈為5'—ATTCCATATC……CCATGCC—3'。在PCR反應(yīng)體系中需加入緩沖液、引物、4種脫氧核苷酸、含目的基因的DNA模板以及。設(shè)計(jì)了一條引物為5'—GGCATG—3'，另一條引物為（寫出6個(gè)堿基即可）。②要形成有效的重組質(zhì)粒，選擇適當(dāng)?shù)南拗泼负苤匾?，根?jù)圖乙和圖丙可知，選擇最佳，原因是。③在添加卡那霉素和四環(huán)素的培養(yǎng)基中有少量菌落，說明了。23．（2024·山東菏澤·二模）由P基因編碼的P蛋白是一種水通道蛋白，該蛋白在植物調(diào)節(jié)水分吸收方面發(fā)揮著重要作用?？蒲腥藛T成功培育出超量表達(dá)P蛋白的轉(zhuǎn)基因玉米。培育過程中所用DNA片段和Ti質(zhì)粒的酶切位點(diǎn)如圖1所示。(1)構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，切割Ti質(zhì)粒應(yīng)選用酶。從切割DNA片段和Ti質(zhì)粒到構(gòu)建基因表達(dá)載體完成共需種酶。(2)將農(nóng)桿菌浸泡過的玉米愈傷組織進(jìn)行植物組織培養(yǎng)，培養(yǎng)基中需加入（填“潮霉素”、“卡那霉素”或“潮霉素或卡那霉素”）進(jìn)行篩選，理由是。篩選出的愈傷組織最終培養(yǎng)成轉(zhuǎn)基因玉米。(3)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法除了用于獲取轉(zhuǎn)基因植物外，還可以通過T-DNA插入基因內(nèi)部使基因沉默，獲得突變體。為了獲得mm突變體，某科研小組利用野生型MM，通過農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法使基因M沉默。由于T-DNA插入的位置是隨機(jī)的，為確定T-DNA是否插入M基因中，該小組采用“三引物法”進(jìn)行PCR擴(kuò)增，即采用三種引物（LP、RP、BP），LP、RP為與目的基因片段互補(bǔ)的特異引物，BP為插入T-DNA的特異引物，如圖所示。（說明：T-DNA插入基因后，會(huì)阻止被插入基因兩端引物的擴(kuò)增產(chǎn)物的形成）根據(jù)下表中三種樣品的電泳結(jié)果判斷樣品是純合突變體，理由是。引物種類樣品序號(hào)LP+RPBP+RP樣品1有大片段無樣品2有大片段有小片段樣品3無有小片段24．（2024·山東臨沂·二模）滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)（RCA）是借鑒自然界中病原生物體環(huán)狀DNA分子滾環(huán)式復(fù)制方式發(fā)展起來的一種核酸擴(kuò)增方法，在致病菌、核酸腫瘤標(biāo)記物、蛋白質(zhì)、生物小分子和病毒檢測(cè)領(lǐng)域有著廣泛應(yīng)用。圖1為RCA原理示意圖。具核梭桿菌為一種強(qiáng)粘附性消化道細(xì)菌，侵入腸黏膜后可誘導(dǎo)局部炎癥和細(xì)胞因子的表達(dá)增加，導(dǎo)致結(jié)直腸腫瘤的形成?？蒲腥藛T采用基于RCA的熒光標(biāo)記滾環(huán)擴(kuò)增檢測(cè)方法，實(shí)現(xiàn)了在微量樣品及復(fù)雜環(huán)境下的高靈敏度、高特異性的檢測(cè)。圖2為熒光標(biāo)記滾環(huán)擴(kuò)增檢測(cè)過程示意圖，過程②是使鎖式探針環(huán)化的過程。其中nusG基因?yàn)榫吆怂髼U菌的特異性基因，鎖式探針為依據(jù)nusG基因序列設(shè)計(jì)出來的單鏈DNA分子，由兩端的檢測(cè)臂和無關(guān)序列組成。只有當(dāng)環(huán)境中存在靶核酸序列時(shí)，鎖式探針才能完成成環(huán)連接反應(yīng)。檢測(cè)探針中的熒光基團(tuán)（FAM）距離淬滅基團(tuán)（BHQ-1）比較近時(shí)，熒光會(huì)被淬滅。

(1)由圖1推測(cè)，Phi29DNA聚合酶的作用是。與常規(guī)PCR相比，RCA缺乏環(huán)節(jié)，因此可推測(cè)RCA擴(kuò)增過程中使用的Phi29DNA聚合酶不具有的特性。(2)過程②鎖式探針完成成環(huán)連接反應(yīng)需要的催化。腸道中含有多種微生物，為保證檢測(cè)的特異性，在設(shè)計(jì)鎖式探針時(shí)需保證，同時(shí)還需注意無關(guān)序列中不含。(3)若檢測(cè)樣品存在具核梭桿菌，檢測(cè)探針中熒光基團(tuán)發(fā)出熒光的原理是。該檢測(cè)方法具有高靈敏度的原因是。25．（2024·山東濟(jì)寧·三模）PCR技術(shù)的實(shí)用性和極強(qiáng)的生命力其使成為生物科學(xué)研究的一種重要方法，極大地推動(dòng)了分子生物學(xué)以及生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。下面是兩個(gè)具體實(shí)驗(yàn)中的PCR技術(shù)應(yīng)用，請(qǐng)根據(jù)資料回答下列問題：(1)重疊延伸PCR技術(shù)是一種通過寡聚核苷酸鏈之間重疊的部分互相搭橋、互為模板，通過多次PCR擴(kuò)增，從而獲得目的基因的方法。利用該技術(shù)可以實(shí)現(xiàn)基因的定點(diǎn)誘變。它在需要誘變的位置合成兩個(gè)帶有變異基因堿基的互補(bǔ)引物，然后分別與引物a和引物d做PCR，這樣得到的兩個(gè)PCR引物產(chǎn)物都帶有變異基因，并且彼此重疊，再將重疊部位進(jìn)行重組PCR就能得到誘變PCR產(chǎn)物，如圖所示：①PCR擴(kuò)增DNA的過程中，引物a、b、c、d中，PCRI應(yīng)選擇圖1中引物，大量擴(kuò)增突變產(chǎn)物AD則應(yīng)選擇引物。②重疊延伸PCR通過實(shí)現(xiàn)定點(diǎn)突變。PCR1和PCR2需要分別進(jìn)行的原因是。③若正?；蚩杀幌拗泼窪pnI識(shí)別并切割，特定位點(diǎn)突變后的基因不能被DpnI識(shí)別，請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)思路鑒定上述過程獲得的突變產(chǎn)物AD是否為突變基因：。(2)反向PCR可用于擴(kuò)增未知序列，其原理如下圖所示。下圖鏈狀DNA分子內(nèi)側(cè)是已知序列，外側(cè)為未知序列。①不直接在圖2中DNA分子的兩端設(shè)計(jì)引物并進(jìn)行擴(kuò)增，原因是。②圖3中環(huán)狀DNA進(jìn)行PCR的過程中，沿引物A延伸子鏈的延伸方向是（填“順時(shí)針”或“逆時(shí)針”），PCR產(chǎn)物（填“含有”或“不含”）EcoRI的酶切位點(diǎn)。26．（2024·山東濟(jì)南·模擬預(yù)測(cè)）雄性不育植株可簡(jiǎn)化育種流程，是雜交育種的重要材料。研究發(fā)現(xiàn)利用油菜純合的雄性不育植株甲做母本與野生型雜交，后代均可育，但總會(huì)出現(xiàn)部分白化幼苗長到成體死亡。為研究相關(guān)機(jī)制，提高育種效率，科研人員進(jìn)行了相關(guān)實(shí)驗(yàn)。(1)植株甲中存在雄性不育基因A’，導(dǎo)致雄蕊不能發(fā)育。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)甲與油菜品系丙雜交，后代均可育，且不出現(xiàn)白化現(xiàn)象?？蒲腥藛T將甲與野生型雜交所得存活的F1與甲、丙雜交得到的F1雜交，發(fā)現(xiàn)子代中雄性可育幼苗占比為，進(jìn)而推測(cè)丙產(chǎn)生了新的顯性突變基因(記作B)，使雄性不育基因A’導(dǎo)致的不育性狀得以恢復(fù)，且兩基因位于非同源染色體上。(2)為研究A’、B基因與白化性狀的關(guān)系，科研人員進(jìn)行如下實(shí)驗(yàn)。①從油菜中分離A’、B基因，將A'基因?qū)霐M南芥(擬南芥不含與A’、B同源的基因)，篩選得到至少插入一個(gè)外源基因的轉(zhuǎn)基因植株TA群體。將B基因轉(zhuǎn)入擬南芥，經(jīng)篩選獲得純合子TB．設(shè)計(jì)雜交實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)存活F1的基因組成，雜交組合及結(jié)果如下表。組號(hào)雜交組合存活的F1成體總數(shù)含A’成體數(shù)不含A’成體數(shù)一♀TA群體×♂野生63095535二♀TA群體×♂TB607415192據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果推測(cè)，A’基因引起部分子代死亡，B基因可抑制A’基因的作用，依據(jù)是。二組F1中含有A’的植株比例超過1/2的原因。②植物中核蛋白N與葉綠體發(fā)育有關(guān)。新的研究發(fā)現(xiàn)，基因A’的表達(dá)產(chǎn)物可與核蛋白N形成復(fù)合體?？蒲腥藛T推測(cè)，基因B通過抑制A’基因的表達(dá)而解除A’對(duì)N的影響。為證明該推測(cè)，請(qǐng)完成下列實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。實(shí)驗(yàn)材料操作觀察指標(biāo)野生型擬南芥導(dǎo)入A’基因葉綠體發(fā)育情況ⅠⅡⅢⅣa.導(dǎo)入A’基因

b.導(dǎo)入B基因

c.導(dǎo)入A’、B基因

d.野生型擬南芥

e.N缺失突變擬南芥觀察指標(biāo)Ⅰ～Ⅳ應(yīng)依次填寫(填寫選項(xiàng)前字母)。(3)B基因突變?nèi)缦聢D1所示：為了檢測(cè)某個(gè)體基因型，研究人員擬用PCR擴(kuò)增該基因，再用某限制酶(識(shí)別序列及切割位點(diǎn)如圖2所示)完全酶切。設(shè)計(jì)了一條引物為5’-GGCATG-3’，另一條引物為(寫出6個(gè)堿基即可)。用上述引物擴(kuò)增基因片段后，其酶切產(chǎn)物長度可能為bp(注：該酶切位點(diǎn)在目的基因片段中唯一)。再對(duì)酶切產(chǎn)物通過的方法檢測(cè)，可以確定該個(gè)體基因型。27．（2024·山東德州·二模）抗菌肽是一類廣泛存在于自然界中的多肽，對(duì)細(xì)菌、真菌、寄生蟲和病毒具有廣泛的抑制作用?？蒲腥藛T將抗菌肽Piscidin基因及NK-lysin基因進(jìn)行融合形成雜合肽NK-LPd基因（部分過程如圖1所示），從而獲得具有更高抗菌活性的雜合抗菌肽。

(1)DNA聚合酶能夠從引物的（填“3′”或“5′”）端開始連接脫氧核苷酸。若設(shè)計(jì)的引物較長，為提高PCR的準(zhǔn)確度需要適當(dāng)（填“提高”或“降低”）復(fù)性溫度。(2)Piscidin基因表達(dá)以a鏈為模板，NK-lysin基因表達(dá)以d鏈為模板。為了實(shí)現(xiàn)圖1中兩基因重疊延伸，PCR1過程中需要分別在引物和引物的5′端添加互補(bǔ)序列。(3)圖2為PCR1擴(kuò)增產(chǎn)物（Ⅰ、Ⅱ）和PCR2擴(kuò)增產(chǎn)物（Ⅲ）的凝膠電泳實(shí)驗(yàn)結(jié)果，根據(jù)結(jié)果可說明基因融合成功，判斷依據(jù)是。

(4)在轉(zhuǎn)化前，需要先構(gòu)建含NK-LPd基因的表達(dá)載體，其目的是；在成功轉(zhuǎn)化的酵母菌中提純得到雜合抗菌肽NK-LPd，為驗(yàn)證NK-LPd對(duì)大腸桿菌的抑菌效果，先將大腸桿菌涂布在圖3的平板上，再放置濾紙片。根據(jù)圖示實(shí)驗(yàn)結(jié)果推測(cè)，在A、D區(qū)域放置的濾紙片分別為。

28．（2024·山東青島·二模）某種雄性不育水稻是由野生型水稻的核基因M突變?yōu)閙所致，科研團(tuán)隊(duì)構(gòu)建轉(zhuǎn)基因智能不育系的思路是：將育性恢復(fù)基因OsNP1（在原始生殖細(xì)胞中表達(dá)）、花粉失活基因ZM-AA（在花粉中表達(dá)）兩個(gè)基因一起構(gòu)建重組Ti質(zhì)粒。然后通過農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將目的基因?qū)胗鷤M織細(xì)胞，從轉(zhuǎn)基因后代中篩選m位點(diǎn)是純合的但是兩個(gè)轉(zhuǎn)基因位點(diǎn)是雜合的可育植株。(1)圖1為已導(dǎo)入ZM-AA基因的重組Ti質(zhì)粒，圖2為OsNP1基因和相應(yīng)的酶切位點(diǎn)，其中A鏈為轉(zhuǎn)錄模板鏈。為使OsNP1基因與圖1中Ti質(zhì)粒正確連接來構(gòu)建基因表達(dá)載體，應(yīng)選擇的酶有；采用PCR技術(shù)擴(kuò)增圖2中的OsNP1基因時(shí)，會(huì)出現(xiàn)長、中、短三種長度的單鏈，一個(gè)OsNP1基因在第n次循環(huán)中新合成的短鏈數(shù)為。(2)重組Ti質(zhì)粒中的新霉素抗性基因和卡那霉素抗性基因的具體作用分別是