DB4117T 320-2021 動物病原微生物實(shí)驗(yàn)室菌種保存和活化技術(shù)指南

4117I本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定上蔡縣農(nóng)業(yè)綜合行政執(zhí)法大隊(duì)、許昌市建安區(qū)1動物病原微生物實(shí)驗(yàn)室菌種保存和活化技術(shù)指南本文件規(guī)定了動物病原微生物實(shí)驗(yàn)室常用的菌種保藏和活化的術(shù)語和定義、要求、標(biāo)準(zhǔn)菌株GB/T27025檢測和校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室能力的GB/T27476.1檢測實(shí)驗(yàn)室安全第1部SN/T2660食品微生物實(shí)驗(yàn)室菌種保藏人工采集的、經(jīng)鑒定具有保藏價值的含有動物病原微生物的體液、組織、排泄物、分泌物、污染菌種活化就是將保藏狀態(tài)的菌種放入適宜的培養(yǎng)24基本要求4.2針對動物病原微生物菌種特性選擇適宜的保存方法，宜采用兩種或兩種以上的方法保存，以保持4.3動物病原微生物菌種保存所使用的器皿要求清潔4.4根據(jù)動物病原微生物菌種保存需要選擇適合培養(yǎng)基。4.5動物病原微生物菌種保存過程中應(yīng)4.7動物病原微生物菌種保存期間，要定期檢查菌種存放設(shè)施的溫度和濕度、菌株有無污染、綿塞有4.8動物病原微生物菌種保存工作不能對周圍環(huán)境造成污染和危害。5.1獲取途徑5.1.1標(biāo)準(zhǔn)菌種的獲取可通過國家級菌種5.1.2從上級機(jī)構(gòu)下發(fā)的質(zhì)控盲樣中分離出的菌株，被證明結(jié)果是正確的、且從考核機(jī)構(gòu)獲得該菌種5.1.3從其他有效的，經(jīng)過資質(zhì)認(rèn)證的商5.2驗(yàn)收5.3標(biāo)準(zhǔn)菌種保存3a)接種：以無菌操作將菌株純培養(yǎng)物接種到固體培養(yǎng)基（斜面）或液體培養(yǎng)基中，接種固體培b)培養(yǎng)：在所保存菌種的最適培養(yǎng)條件下將細(xì)胞培養(yǎng)至穩(wěn)定期或成熟期，并進(jìn)行純度檢查。c)保存：培養(yǎng)好的菌種于4℃~6℃保存，需室溫保存的菌種在室溫（25℃)下保存。保存培每3-6個月移植一次。有特殊要求的按其規(guī)定移植。易保存于相對濕度為50%～70%的環(huán)a)灌入石蠟：將無菌的液體石蠟在無菌條件下注入剛培養(yǎng)好的新鮮培養(yǎng)斜面培養(yǎng)物上，液面高b)保存：注入液體石蠟的菌種斜面以直立狀態(tài)置低溫（4℃~6℃)干燥處保存，需室溫保存a)菌種準(zhǔn)備：在所保存菌種的最適培養(yǎng)條件下將細(xì)胞采用斜面培養(yǎng)、液體培養(yǎng)等方式培養(yǎng)至穩(wěn)b)分裝：分裝菌液應(yīng)在無菌條件下操作。采用較長的滴管，直接將菌液滴入安瓿管或凍存管底部，每管分裝量約0.1mL～0.2mL。若是球形安瓿管，裝量為半個球部。分4d)冷凍干燥：將預(yù)凍后的樣品安瓿瓶迅速置于已充分預(yù)冷的冷凍干燥機(jī)樣品艙內(nèi)按照程序冷凍干燥。完畢后取出樣品管置于干燥器內(nèi)，備用。冷凍干燥時e)安瓿管封口及真空檢驗(yàn)：從干燥器中火焰將管拉細(xì)后將管口連接到與真空安瓿管泵相連的橡皮管上，打開真空泵，在真空下用噴射火焰對準(zhǔn)管細(xì)頸部加熱熔封。熔封后的干燥管可采用f)保存：封口完全的冷凍干燥管保存于4℃~10℃。b)在無菌狀態(tài)下打開冷凍管，在所保存菌種的最適培養(yǎng)條件下降細(xì)胞培養(yǎng)至穩(wěn)定期或成熟期，進(jìn)行純度檢查后，將菌種新鮮培養(yǎng)物加入到培養(yǎng)基中制成混懸液，無菌操作將混懸液轉(zhuǎn)入到d)菌種吸附于瓷珠上后，將多余的混懸液吸出；如使用商業(yè)化的細(xì)胞凍存管，此時應(yīng)按照產(chǎn)品7.2.1定期移植法保存菌種取樣后直接接種于固體培養(yǎng)基或適量的液體培養(yǎng)基中進(jìn)行7.2.3冷凍干燥法保存的菌種復(fù)蘇先用70%酒精棉擦拭57.2.4瓷珠保存法保存菌株在無菌條件下打開冷凍管，用無菌針或接種環(huán)取出一粒瓷珠。封好冷凍管并盡快將其送回低溫條件下保存。將瓷珠直接接種于固體培養(yǎng)基或適量的液8.1微生物菌種保藏和