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家畜生理學(xué)實(shí)驗(yàn)張宇飛指導(dǎo)教師:趙懷平(高級(jí)實(shí)驗(yàn)師)了解紅細(xì)胞比容及其測(cè)定,紅細(xì)胞計(jì)數(shù)原理并掌握計(jì)數(shù)方法,學(xué)會(huì)用比色法測(cè)定血紅蛋白含量的方法并掌握其原理。血液是一種液體組織、它也是組織和細(xì)胞之間進(jìn)行物質(zhì)交換的媒介,輸送各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)及代謝物質(zhì),維持內(nèi)環(huán)境的相對(duì)恒定。因此血量與血液成份的相對(duì)穩(wěn)定,是生命活動(dòng)正常進(jìn)行的基本條件。因此當(dāng)組織和細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題時(shí)先首就會(huì)反映到血液中。在臨床診斷過(guò)程中往往將血液學(xué)檢測(cè)作為重要方法,也是體檢的重要檢測(cè)項(xiàng)目。正因?yàn)檠簩W(xué)檢測(cè)相對(duì)操作簡(jiǎn)單、易于操作往往將血液學(xué)檢測(cè)統(tǒng)稱為血常規(guī)。我們將經(jīng)過(guò)抗凝處理的血液置于比容管中經(jīng)3000轉(zhuǎn)/分鐘離心30分鐘,由于血細(xì)胞密度較大在離心力作用下會(huì)下沉并被壓緊,可見到血液分為三層,上層為淡黃色的液體為血漿,中間有一薄層灰白色的物質(zhì),為白細(xì)胞和血小板。下層為深紅色的是紅細(xì)胞,這個(gè)實(shí)驗(yàn)稱為、紅細(xì)胞壓積‘pcv’它表示每100毫升血液中、紅細(xì)胞、白細(xì)胞和血小板、血漿。各占百分比,這就是血液的組成。血液主要由血漿、紅細(xì)胞、白細(xì)胞和血小板、等物質(zhì)組成,其結(jié)構(gòu)和功能十分復(fù)雜。在作血液學(xué)檢測(cè)過(guò)程中,往往有互補(bǔ)過(guò)程、例如;在做紅細(xì)胞壓積如果指標(biāo)正常,做紅細(xì)胞計(jì)數(shù)指標(biāo)低于正常,那么動(dòng)物可能患有大分子性貧血。如果在做紅細(xì)胞壓積指標(biāo)低于正常,而做紅細(xì)胞計(jì)數(shù)指標(biāo)正常時(shí),那么動(dòng)物可能患有小分子性貧血。我們所做的實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目,只是血液學(xué)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目中的一少部份。本次實(shí)驗(yàn)應(yīng)用的血液為家兔血液。本次實(shí)驗(yàn)應(yīng)用的方法為試管法。在吸取血液、和液體時(shí)主要應(yīng)用移液器來(lái)完成。四、實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目12543血液的組成紅細(xì)胞壓積‘pcv’紅細(xì)胞計(jì)數(shù)‘RBC’血紅蛋白測(cè)定‘Hb’白細(xì)胞沉降率的測(cè)定12345五、實(shí)驗(yàn)方法01紅細(xì)胞比容的測(cè)定02采抗凝的兔血。03用帶穿刺針頭的注射器,抽取制備好的抗凝血,將針頭插入溫氏管底部,慢慢將血液注入其中,使血液準(zhǔn)確的裝到10刻度處。04離心3000轉(zhuǎn)/每分鐘,離心半小時(shí)。05取出并讀數(shù),讀數(shù)時(shí)以紅細(xì)胞所占的容積為準(zhǔn)不包括白細(xì)胞和血小板沉積所形成的灰白色沉淀。血紅蛋白的測(cè)定將稀鹽酸加入測(cè)定管至刻度“2”或“10%”處,并將測(cè)定管放入比色箱中。用吸管血液到20立方毫米處,再將吸管插入裝有稀鹽酸的測(cè)定管中,再反復(fù)吸幾次吸管,使吸管壁上的血液全部沉入測(cè)定管當(dāng)中。在吹吸時(shí)防止氣泡產(chǎn)生,靜置十分鐘。比色:用蒸餾水逐滴加入測(cè)定管中,每次加入用玻璃棒將拌或搖勻,再插入比色箱中進(jìn)行比色。這樣測(cè)定管中的顏色逐漸變淡,直至與比色箱的顏色一致。讀數(shù):讀出其中液體凹面的刻度。紅細(xì)胞計(jì)數(shù)推片及充液:在推片和充液前,先在顯微鏡下檢查計(jì)數(shù)板和蓋玻片是否清潔,若不干凈則清潔后使用。推片是指用手指將蓋玻片固定在計(jì)數(shù)板的正中間計(jì)數(shù)室邊緣,然后大拇指將其緩慢的推行,使蓋玻片貼在計(jì)數(shù)室兩側(cè)的槽上,充液是指將稀釋好的血液搖勻后,先棄去吸管內(nèi)的前兩滴,然后用半滴放到計(jì)數(shù)室和蓋玻片的間隙,同毛吸作用使血液進(jìn)入計(jì)數(shù)室內(nèi)。吸血及血液的稀釋:吸血及血液的稀釋均在紅細(xì)胞吸管中進(jìn)行。計(jì)數(shù):稀釋的血液進(jìn)入計(jì)數(shù)室后,靜置2~3分鐘后,在低倍顯微鏡下找中央大方格,然后在高倍鏡下數(shù)4個(gè)角上的小方格和中央小方格中紅細(xì)胞數(shù)目。結(jié)果計(jì)算:N指細(xì)胞總數(shù)稀釋200倍:x=N﹡1010稀釋100倍:x=N﹡5﹡105六、結(jié)果分析血液的組成01血液由血細(xì)胞(紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板)和血漿組成。離體后血液自然凝固,分離的淡黃色透明液體稱為血清。血液加抗凝劑后分離出來(lái)的淡黃色液體稱為血漿。血清與血漿差別是:血清缺少某些凝血因子,如凝血因子Ⅰ(纖維蛋白原)、Ⅱ(凝血酶原)、Ⅴ、Ⅷ等。02全血適用于臨床血液學(xué)檢查,如血細(xì)胞計(jì)數(shù)、分類和形態(tài)學(xué)檢查等。血漿適用于血漿生理性和病理性化學(xué)成分的測(cè)定,特別是內(nèi)分泌激素測(cè)定;血漿除鈣離子外,含有其他全部凝血因子,也適用于血栓與止血的檢查。血清適用于臨床化學(xué)和臨床免疫學(xué)檢查。03紅細(xì)胞比容指紅細(xì)胞在全血中所占的容積百分比。正常值:37%——50%,女低于男。臨床意義血細(xì)胞比容測(cè)定的臨床意義基本同紅細(xì)胞計(jì)數(shù)或血紅蛋白測(cè)定,常用作貧血診斷和分類的指標(biāo)。還可用于臨床決定病人是否需要補(bǔ)液的實(shí)驗(yàn)檢查依據(jù)。紅細(xì)胞比容升高,見于劇烈運(yùn)動(dòng)或情緒激動(dòng)的正常人,以及大面積燒傷等各種有脫水癥狀的病人。紅細(xì)胞比容減少,見于正常孕婦、各種貧血病人,以及應(yīng)用干擾素、青霉素、吲跺美辛(消炎痛)、維生素A等藥物。3、紅細(xì)胞計(jì)數(shù).生理變化
(1)初生兒較成年為高;老年人比青壯年者稍低。
(2)超力型人的紅細(xì)胞數(shù)較正力型和無(wú)力型者高,兩種體質(zhì)極端的紅細(xì)胞之差可達(dá)20%。
(3)妊娠時(shí)期血漿量增多而多有稀血癥。此外,居住高山因缺氧可引起生理性紅細(xì)胞增多。
.病理變化
(1)增高見于
真性紅細(xì)胞增多癥;嚴(yán)重脫水、嚴(yán)重?zé)齻靶菘?;先天性心臟?。ǚ?lè)氏四聯(lián)癥),慢性獲得性心臟?。宦苑闻K疾?。ǚ螝饽[、嚴(yán)重的支氣管性哮喘、纖維性肺結(jié)核等);異常血紅素(高鐵血紅蛋白血癥、硫化血紅蛋白血癥等);其他:腫瘤(腎臟腫瘤、腎上腺瘤、腎母細(xì)胞瘤、腦瘤、肝癌、子宮纖維肉瘤、前列腺癌、胃癌、肺癌、嗜鉻細(xì)胞瘤);腎臟病(腎盂積水、多囊腎、腎動(dòng)脈狹窄);皮質(zhì)醇增多癥及脾結(jié)核等。
減低見于正常細(xì)胞型貧血:此種貧血之MCV、MCH及MCHC均正常。如急性失血后貧血、溶血性貧血、再生障礙性貧血及其他骨髓病所致之貧血。小細(xì)胞低色素性貧血:此種貧血MCV、MCH及MCHC均降低、如缺鐵性貧血,地中海貧血及維生素B缺乏所致之貧血。大細(xì)胞型貧血:平均紅細(xì)胞容積(MCV)和平均紅細(xì)胞血紅蛋白(MCH)增加,平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度(MCHC)正?;蚪档?。如維生素B12。及葉酸缺乏之貧血;某些溶血性貧血,肝疾患所致的貧血及內(nèi)分泌疾患如甲狀腺機(jī)能低下所致的貧血等。單純小細(xì)胞型貧血;此種貧血之MCV和MCH均減少,但MCHC正常。如慢性感染、慢性腎疾患等。12345血紅蛋白(Hb)測(cè)定臨床意義血紅蛋白測(cè)定的臨床意義與紅細(xì)胞計(jì)數(shù)大致相同,但血紅蛋白能更好地反映貧血程度。各種影響紅細(xì)胞計(jì)數(shù)的因素也同時(shí)影響血紅蛋白,但被影響的程度在比例上不一定相稱。如在小細(xì)胞性貧血時(shí),血紅蛋白減少的程度常較紅細(xì)胞數(shù)嚴(yán)重;在大細(xì)胞性貧血時(shí),紅細(xì)胞減少程度常較血紅蛋白嚴(yán)重。注凡在單位體積的血液中,紅細(xì)胞數(shù)、血紅蛋白或紅細(xì)胞比積低于正常數(shù)值,稱為貧血。綜合國(guó)內(nèi)調(diào)查資料,中國(guó)人正常與貧血的分界標(biāo)準(zhǔn)為:男性,紅細(xì)胞少于400萬(wàn),血紅蛋白低于12g;女性,紅細(xì)胞少于350萬(wàn),血紅蛋白低于10.5g,即稱貧血。六、紅細(xì)胞沉降率(ESR)測(cè)定
臨床意義
ESR的變化主要同血漿中球蛋白,如α2和γ球蛋白,尤其是與纖維蛋白原的含量多少有關(guān),如果球蛋白與纖維蛋白原含量多于正常,血沉就增快,所以變化無(wú)特異性。但對(duì)任何一種血沉增速的疾病,在病程內(nèi)定期觀察血沉的動(dòng)態(tài)變化,可以幫助推斷病變的發(fā)展情況。
增高見于:
生理性:妊娠后3個(gè)月到產(chǎn)后1個(gè)月,小兒和50歲以上的老人。
病理性:
(1
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