DB21-T+2219.7-2024玉米 高粱主要病害抗性鑒定技術(shù)規(guī)范 第 7 部分：玉米青霉穗腐病

ICS65.020.2021CCSB1521遼 寧 省 地 方 標(biāo) 準(zhǔn)DB21/T2219.7—20247RulesforevaluationofsorghumandmaizeforresistancetoRulesforevaluationofsorghumandmaizeforresistancetodiseasesPart7：Penicilliumearrotofmaize2024033020240430遼寧省市場監(jiān)督管理局發(fā)布DB21/T2219.7DB21/T2219.7—2024DB21/T2219.7DB21/T2219.7—2024前 言本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件是DB21/T22197部分。DB21/T2219已經(jīng)發(fā)布和計(jì)劃發(fā)布以下部分：——1——2——第3部分：高粱鐮孢菌莖腐病；——第4部分：高粱絲黑穗病；——第5部分：玉米灰斑??；——第6部分：玉米彎孢菌葉斑病：——7——8…………。本文件起草單位：丹東農(nóng)業(yè)科學(xué)院、沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)、錦州市科學(xué)技術(shù)研究院、朝陽市農(nóng)業(yè)發(fā)展服務(wù)中心。本文件起草單位：丹東農(nóng)業(yè)科學(xué)院、沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)、錦州市科學(xué)技術(shù)研究院、朝陽市農(nóng)業(yè)發(fā)展服務(wù)中心。（號(hào)242347862。（遼寧省鳳城市草河大街99號(hào)丹東農(nóng)業(yè)科學(xué)院話I引 言2219本次發(fā)布兩個(gè)部分：——7——8本系列標(biāo)準(zhǔn)還將陸續(xù)發(fā)布其他玉米、高粱主要病害的抗病性鑒定技術(shù)部分。IIII玉米高粱主要病害抗病性鑒定技術(shù)規(guī)范第7部分：玉米青霉穗腐病范圍本文件規(guī)定了玉米青霉sp.）穗腐病抗病性鑒定技術(shù)的準(zhǔn)備、接種和評(píng)價(jià)等要求。本文件適用于栽培玉米L.）種質(zhì)資源和雜交種對(duì)玉米青霉穗腐病抗性的人工接種鑒定及評(píng)價(jià)。規(guī)范性引用文件（包括所有的修改單適用于本文件。NY/T1248.8玉米抗病蟲性鑒定技術(shù)規(guī)范第8部分：鐮孢穗腐病術(shù)語和定義NY/T1248.8界定的以及下列術(shù)語和定義適用于本文件。NY/T1248.8界定的以及下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1籽粒傷口接種kernelinoculation利用可定量的連續(xù)注射器于果穗中部進(jìn)行創(chuàng)傷注射的接種技術(shù)。4準(zhǔn)備接種物準(zhǔn)備接種物的分離、鑒定以常規(guī)組織分離法和單孢分離法（見附錄A）從田間采集的具有典型玉米青霉穗腐病癥狀的果穗分離獲得純培養(yǎng)物，利用形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)鑒定為青霉屬真菌，4℃保存?zhèn)溆谩＝臃N物的制備挑取4.1.1保存的青霉菌接種于馬鈴薯葡萄糖瓊脂（PotatoDextroseAgar，簡稱PDA）培養(yǎng)基25℃培養(yǎng)5d后，用無菌打孔器打取菌落邊緣直徑5mm的菌餅，將其接種于馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)液（PotatoDextrose，簡稱中120r/min培養(yǎng)5d水將20個(gè)mLDA和DB。鑒定圃準(zhǔn)備鑒定圃設(shè)置鑒定圃應(yīng)具備良好的自然發(fā)病環(huán)境。1試驗(yàn)設(shè)計(jì)鑒定材料隨機(jī)排列或順序排列。在進(jìn)行選育品種抗病性鑒定時(shí)，每30行鑒定材料設(shè)1組已知抗病和（見附錄50行鑒定材料設(shè)1組已知抗病和感病對(duì)照材料，鑒定圃周邊應(yīng)設(shè)置保護(hù)行。鑒定圃應(yīng)具備良好的自然發(fā)病環(huán)境和排灌設(shè)施。種植要求鑒定材料播種時(shí)間與生產(chǎn)播種時(shí)間相同。鑒定小區(qū)行長0.62113株時(shí)視為該品種/材料鑒定無效。12接種接種時(shí)期接種時(shí)期為果穗吐絲后14d～21d，接種可全天進(jìn)行。接種方法5.3接種前后的田間管理接種后對(duì)鑒定圃進(jìn)行常規(guī)田間管理。6調(diào)查調(diào)查時(shí)間5.3接種前后的田間管理接種后對(duì)鑒定圃進(jìn)行常規(guī)田間管理。6調(diào)查調(diào)查時(shí)間在玉米生理成熟后進(jìn)行調(diào)查，同批次接種材料應(yīng)在同一天完成。調(diào)查方法采收接種的雌穗，去除苞葉后逐穗調(diào)查并對(duì)雌穗籽粒被病菌侵染的面積進(jìn)行分級(jí)記載，見表1。表1玉米青霉穗腐病田間調(diào)查結(jié)果表6.3病情分級(jí)依據(jù)表2中的描述，逐個(gè)記載調(diào)查雌穗的發(fā)病級(jí)別。2編號(hào)1級(jí)3級(jí)5級(jí)7級(jí)9級(jí)1234……表2玉米對(duì)穗腐病抗性鑒定的病情級(jí)別劃分病情分級(jí)描述(發(fā)病面積占雌穗總面積比例)1A≤1%31%＜A≤10%510%＜A≤25%725%＜A≤50%9A＞50%注：發(fā)病面積占雌穗總面積比例以A表示。評(píng)價(jià)鑒定有效性判別當(dāng)設(shè)置的感病對(duì)照材料平均病情級(jí)別≥5.6時(shí)，該批次鑒定視為有效?？剐栽u(píng)價(jià)指標(biāo)表3玉米對(duì)青霉穗腐病抗性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)平均病情級(jí)別抗性D≤1.5高度抗病Highlyresistant（高抗HR）1.5＜D≤3.5抗病Resistant（抗R）3.5＜D≤5.5中度抗病Moderatelyresistant（中抗MR）5.5＜D≤7.5感病Susceptible（感S）7.5＜D≤9.0高度感病Highlysusceptible（高感HS）注：平均病情級(jí)別以D表示。重復(fù)鑒定重復(fù)鑒定若鑒定材料初次鑒定時(shí)表現(xiàn)為高抗、抗、中抗，應(yīng)在次年進(jìn)行重復(fù)鑒定。抗性評(píng)價(jià)8鑒定結(jié)果匯總玉米抗青霉穗腐病鑒定結(jié)果整理后填入鑒定結(jié)果表格，見圖1。3圖1玉米抗青霉穗腐病鑒定結(jié)果匯總表樣式圖44附錄 A（資料性）玉米青霉穗腐病病原菌青霉菌的形態(tài)學(xué)鑒定引起玉米青霉穗腐病的主要致病菌為青霉屬真菌。sp.)青霉菌的分子鑒定（Deoxyribonucleic（InternalTranscribedSpacer，ITS）進(jìn)行PCR擴(kuò)增。對(duì)擴(kuò)增片段進(jìn)行測序和比對(duì)，確定種的分類地位。PCR反應(yīng)體系：擴(kuò)增的引物為真菌的通用引物：PCR反應(yīng)體系（25μL）：上下游引物（10μmol/L）各1μL，模板DNA（100ng/μL）1μL，2×TaqPCRmix12.5μL，ddH2O9.5μL。A.1PCR5PCR5530A.1PCR5基因引物名稱序列（5'-3'）ITSITS1/ITS4TAATTCACAATGGAGGGTAGGGTAAGGATACCACGCTTGG附錄 B（資料性）青霉菌培養(yǎng)基配方PDA馬鈴薯200g，葡萄糖20g，瓊脂18g～20g，蒸餾水1000mL。分裝在三角瓶中后121℃高壓滅菌20min后備用。PDA培養(yǎng)基用于青霉菌