T-YNRZ 019-2024 珠芽黃魔芋組培種苗生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程

ICS65.020.20CCSB23TechnicalregulationsfortheproductionofAmorphophallusspp.seedintissueIT/YNRZ019—2024本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容有可能涉及專利，本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。本文件由云南省熱帶作物科學(xué)研究所提出。本文件由云南省熱帶作物學(xué)會歸口。本文件起草單位：云南省熱帶作物科學(xué)研究所。本文件主要起草人：魏麗萍、黃菁、田耀華、巖香甩、穆洪軍、何海寧、龔燕雄、劉世紅、張兆T/YNRZ019—2024《珠芽黃魔芋組培種苗生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程》標(biāo)準(zhǔn)在文件編制過程中已經(jīng)識別出文件中的某些內(nèi)容涉及“一種珠芽魔芋的培養(yǎng)方法”發(fā)明專利，專利號：ZL202311206821.6。該專利由云南省熱帶作物科學(xué)研究所申報，發(fā)明人為魏麗萍、黃菁、龔燕雄、巖香甩等。標(biāo)準(zhǔn)起草人和專利發(fā)明人為同一團(tuán)隊成員。專利持有人已經(jīng)提交必要專利許可聲明，同意在公平、合理、無歧視基礎(chǔ)上許可任何組織或者個人在實施該文件時涉及專利內(nèi)容，可以無償使用該專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)提請注意,聲明符合本文件時，可能涉及[1、2、3、4條]內(nèi)容與“一種珠芽魔芋的培養(yǎng)方法”發(fā)明專利相關(guān)內(nèi)容的使用。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)對于該專利的真實性、有效性和范圍無任何立場。該專利持有人已向本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)承諾，他愿意同任何申請人在合理且無歧視的條款或條件下，就專利可無償使用。該專利持有人的聲明已在本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)備案。相關(guān)信息可以通過以下聯(lián)系方式獲得：專利持有人姓名：魏麗萍、黃菁、龔燕雄、巖香甩、張兆豪、張勇波、謝江、原慧芳、田耀華。地址：云南省景洪市宣慰大道99號。請注意除上述專利外，本文件的某些內(nèi)容仍可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。1T/YNRZ019—2024珠芽黃魔芋組培種苗生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程本文件規(guī)定了珠芽黃魔芋組培種苗生產(chǎn)技術(shù)中的培養(yǎng)基母液的配制、培養(yǎng)基生長調(diào)節(jié)劑的配制、培養(yǎng)基制備、接種、培養(yǎng)、煉苗移栽和種苗出圃等內(nèi)容。本文件適用于珠芽黃魔芋組培種苗生產(chǎn)。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T317白砂糖GB/T603化學(xué)試劑試驗方法中所用制劑及制備GB5749生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法3術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。4培養(yǎng)基母液的配制4.1母液的配制方法和保存試劑配制嚴(yán)格按照GB/T603規(guī)定方法配制，所用水執(zhí)行GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法標(biāo)準(zhǔn)。通常將常用試劑配制成比培養(yǎng)基所需濃度高10倍～100倍的母液，母液置于4℃的冰箱中貯存。4.2大量元素母液的配制分別稱取硝酸銨33g、硝酸鉀38g、磷酸二氫鉀3.4g、七水硫酸鎂7.4g、二水氯化鈣8.8g，分別加少量蒸餾水在不同的容器內(nèi)充分溶解，用玻璃棒攪拌促溶解，定容至1000ml容量瓶，置棕色廣口瓶中保存，貼上標(biāo)簽。4.3微量元素母液的配制分別稱取碘化鉀0.166g、硼酸1.24g、四水硫酸錳3.38g、七水硫酸鋅1.72g、二水鉬酸鈉0.05g、五水硫酸銅0.005g、六水氯化鈷0.005g，可混合置于燒杯內(nèi)加少量蒸餾水溶解定容至1000ml容量瓶，置棕色廣口瓶中保存，貼上標(biāo)簽。4.4鐵鹽母液的配制稱取乙二胺四乙酸二鈉7.46g和硫酸亞鐵5.56g，分別溶于450ml蒸餾水中，加熱，不斷攪拌，溶解后，兩液混合，調(diào)PH至5.5加水定容至1000ml，置棕色廣口瓶中保存，貼上標(biāo)簽。4.5有機(jī)母液的配制分別稱取煙酸0.05g、VB?0.01g、VB60.05g、甘氨酸0.2g，混合置于燒杯內(nèi)加少量蒸餾水溶解定容至1000ml容量瓶，置棕色廣口瓶中保存，貼上標(biāo)簽。2T/YNRZ019—20245培養(yǎng)基生長調(diào)節(jié)劑的配制5.1NAA的配制和保存稱取NAA0.1g，先用少量95%乙醇或無水乙醇完全溶解，定容至1000ml容量瓶。5.26-BA的配制稱取6-BA0.1g，先用少量95%乙醇或無水乙醇完全溶解，定容至1000ml容量瓶。5.3KT的配制和保存稱取KT0.1g，先用少量95%乙醇或無水乙醇完全溶解，定容至1000ml容量瓶。5.4TDZ的配制和保存稱取TDZ0.1g，先用少量95%乙醇或無水乙醇完全溶解，定容至1000ml容量瓶。6培養(yǎng)基制備6.1制備方法培養(yǎng)基由試劑、蔗糖、瓊脂、水組成，蔗糖和水應(yīng)分別符合GB/T317和GB5749規(guī)定，試劑配制嚴(yán)格按照GB/T603規(guī)定方法配制，所用水執(zhí)行GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格。6.1.1稱量稱取所需量的瓊脂和蔗糖單獨放入燒杯中，加入少量的蒸餾水，攪拌讓其溶化。6.1.2配制依次把稱取好的母液及生長調(diào)節(jié)劑倒入已溶化的瓊脂中，加入蔗糖，置于電磁爐上加熱，不斷攪拌，直至瓊脂和蔗糖完全溶解最終定容到所需體積。6.2pH值調(diào)整培養(yǎng)基最佳pH值為5.8，采用酸度計或精密pH試紙測定，通常用1mol/L的NaOH或1mol/L的HCL來調(diào)節(jié)。6.3培養(yǎng)基分裝配制好的培養(yǎng)基需趁熱分裝，分裝量以培養(yǎng)容器體積的1/4～1/3為宜，分裝后應(yīng)立即密封。6.4培養(yǎng)基滅菌培養(yǎng)基分裝后在24h內(nèi)完成滅菌工作，在壓力為0.105MPa，溫度121℃的條件下，滅菌25min～30min。6.5培養(yǎng)基保存滅菌后的培養(yǎng)基應(yīng)保存于潔凈、干燥的培養(yǎng)基儲存室中，2℃~4℃條件下7d內(nèi)使用。7接種7.1外植體的選擇選用無病蟲害、健壯的珠芽為外植體。7.2外植體的消毒珠芽應(yīng)先去皮，用自來水沖洗30min，將洗凈后的珠芽轉(zhuǎn)至超凈工作臺上，用75%乙醇浸泡10s~20s，用無菌水沖洗2次，再用0.1%升汞消毒12min，最后用無菌水沖洗5次～7次后備用。3T/YNRZ019—20247.3外植體的接種在超凈工作臺上，將消毒后的珠芽黃魔芋珠芽切成約0.5cm×0.5cm的小塊，接種到初代培養(yǎng)基上，切口接觸培養(yǎng)基，接種后做好標(biāo)記。8培養(yǎng)8.1培養(yǎng)條件珠芽黃魔芋最適宜的培養(yǎng)溫度為26℃,光照強度為2000Lx，光照時間為10h/d。8.2初代培養(yǎng)8.2.1初代培養(yǎng)基珠芽黃魔芋組培快繁技術(shù)中誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+TDZ0.5mg/L+NAA2.0mg/L+肌醇0.1g/L+蔗糖30g/L+瓊脂6g/L。8.2.2初代培養(yǎng)基條件接種好的培養(yǎng)瓶放置在培養(yǎng)架上，培養(yǎng)30d～50d形成愈傷組織或叢生芽。叢生芽和愈傷組織繼續(xù)培養(yǎng)或者轉(zhuǎn)接，培養(yǎng)30d左右，形成完整組培苗。8.3增殖培養(yǎng)8.3.1葉片培養(yǎng)將無菌組培苗濃綠厚大的葉片切成大小約0.5cm×0.5cm小塊，葉面朝上平鋪于培養(yǎng)基上，培養(yǎng)周期30d～50d，形成愈傷組織和叢生芽。8.3.2葉柄培養(yǎng)將無菌組培苗生長健壯的葉柄切成約1cm的小段，扦插于培養(yǎng)基上，培養(yǎng)周期30d～50d，形成愈傷組織和叢生芽。8.3.3葉柄和葉片繼代增殖培養(yǎng)基葉柄和葉片繼代增殖培養(yǎng)基為MS+TDZ0.2mg/L+NAA0.4mg/L+6BA1.0mg/L+肌醇0.1g/L+蔗糖30g/L+瓊脂6g/L。8.3.4愈傷組織培養(yǎng)將剪掉葉片和葉柄的愈傷組織分割成約大小0.5cm×0.5cm，轉(zhuǎn)接到葉柄和葉片繼代增殖培養(yǎng)基上，培養(yǎng)周期30d左右，形成無根苗。8.3.5愈傷組織培養(yǎng)基愈傷組織繼代增殖培養(yǎng)MS+KT0.9mg/L+NAA0.2mg/L+肌醇0.1g/L+蔗糖30g/L+瓊脂6g/L。8.4生根培養(yǎng)8.4.1生根培養(yǎng)條件叢生芽或無根苗轉(zhuǎn)接至生根培養(yǎng)基上，培養(yǎng)周期15d左右，形成完整的組培苗。8.4.2生根培養(yǎng)基生根培養(yǎng)基為MS+IBA1.0mg/L+肌醇0.1g/L+蔗糖30g/L+瓊脂6g/L。9煉苗移栽9.1煉苗4T/YNRZ019—2024在室溫、自然光下，選擇株高3cm～5cm的組培苗，先擰松瓶蓋放置2d～3d，再半揭瓶蓋放置2d~3d，最后完全揭開瓶蓋放置3d～5d后