檢驗科糖化血紅蛋白測定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

玉環(huán)縣人民醫(yī)院檢驗科文件編號：JYK-3-SH-048版本/修訂號：C/0主題內(nèi)容生化室作業(yè)指導(dǎo)書生效日期：20110701第4頁共4頁編寫制定日期審核審核日期：核準(zhǔn)執(zhí)行日期李永臣2010-09-15李永臣2011-07-01章林華2011-07-01糖化血紅蛋白測定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程1檢驗申請?zhí)腔t蛋白（HbA1c）測定2

標(biāo)本采集與處理2.1

標(biāo)本采集2.1.1

常規(guī)靜脈采血約2ml，EDTA二鉀抗凝，置于專用的真空采血管。2.1.2

檢驗申請單和血標(biāo)本試管標(biāo)上統(tǒng)一且唯一的標(biāo)識符。2.1.3

急診標(biāo)本采集后，在檢驗申請單上填寫標(biāo)本采集時間。2.1.4

標(biāo)本采集后與檢驗申請單一起及時運送至檢驗科。專人負(fù)責(zé)標(biāo)本的接收并記錄標(biāo)本的狀態(tài)，對不合格標(biāo)本予以拒收。2.1.5

下列標(biāo)本為不合格標(biāo)本2.1.5.1

標(biāo)本量不足：少于1.0ml的全血標(biāo)本。2.1.5.2

無法確認(rèn)標(biāo)本與申請單對應(yīng)關(guān)系的。2.1.5.3

其他如標(biāo)識涂改、標(biāo)本試管破裂等。2.1.5.4

標(biāo)本凝固。2.2

標(biāo)本保存2.2.1

接收標(biāo)本后無須分離出血清，用全血測定。2.2.2

標(biāo)本保存時間：普通冰箱中（2～8℃）穩(wěn)定5天。為避免標(biāo)本中水分揮發(fā)使血清濃縮，對保存時間超過1天的標(biāo)本均加塞密閉或覆蓋濕巾。2.2.3

已完成測試的標(biāo)本保持完整的識別號，置4～8℃冰箱內(nèi)保存7天。2.3

標(biāo)本采集的注意事項2.3.1

采血前使受檢者一般不需準(zhǔn)備。2.3.2

必須使用抗凝血，推薦的抗凝劑是EDTA二鉀。3、方法原理糖化血紅蛋白檢測使用高壓液相色譜原理（HPLC）。一個雙活塞，低脈沖HPLC泵和一個成比例的閥門來輸送緩沖液到分析柱和監(jiān)測器中。一個程序化的增強離子強度的緩沖液梯度來輸送樣本到分析柱，由于各種糖化血紅蛋白組分所帶的電荷不同，在不同離子強度洗脫液的梯度洗脫下，糖化血紅蛋白被分離。被分離的血紅蛋白然后通過過濾器光度計，415nm吸光度的改變計算出其百分濃度。4

試劑及其他用品4.1

試劑：愛科來公司配套試劑盒。4.2

試劑盒保存：未啟封試劑盒在2～8℃保存，可儲存至失效期。啟封使用的試劑置儀器試劑倉內(nèi)穩(wěn)定30天。質(zhì)控品、校準(zhǔn)品放2-8℃保存。4.3

試劑盒準(zhǔn)備：即開即用，無特殊準(zhǔn)備。5

校準(zhǔn)品與校準(zhǔn)模式5.1

校準(zhǔn)品：與試劑盒配套的校準(zhǔn)液，其濃度可溯源至美國糖化血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)化計劃（NGSP）標(biāo)準(zhǔn)參考材料。5.2

校準(zhǔn)類型和校準(zhǔn)點數(shù)目：線性模式，2個校準(zhǔn)點。5.3

校準(zhǔn)周期：①更換試劑批號或出現(xiàn)質(zhì)控漂移時；②儀器進行全面保養(yǎng)后；③儀器的重要零件更換后，進行一次校準(zhǔn)。5.4

校準(zhǔn)液重建方法：用7毫升的校正稀釋液溶解血紅蛋白校準(zhǔn)液。6

質(zhì)控品與室內(nèi)質(zhì)控規(guī)則6.1

質(zhì)控品采用由BIO-RAD公司提供的兩個不同水平定值質(zhì)控血清。6.2

質(zhì)控液重建方法：干粉質(zhì)控，加0.5ml蒸餾水到質(zhì)控液中,充分溶解后輕輕混勻后5ul分裝-20℃保存期。6.3質(zhì)控品測定：每星期一或更換試劑批號、儀器重大維護后測定質(zhì)控,每支加650ul的H液，完全溶血后放黃色架上做。6.4

質(zhì)控規(guī)則：采用Westgard多規(guī)則質(zhì)控規(guī)則，由計算機程序進行檢索與判斷。6.5

如出現(xiàn)失控情況，按室內(nèi)質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)操作程序采取各種有效的糾正措施及時糾正，并在確認(rèn)重新回復(fù)到控制狀態(tài)后開始標(biāo)本檢測。7

適用儀器適用HA-8160糖化血紅蛋白檢測系統(tǒng)。8

標(biāo)本檢測步驟裝載試劑→進行校準(zhǔn)→進行質(zhì)控→輸入標(biāo)本檢測項目→加載標(biāo)本→標(biāo)本測定→結(jié)果復(fù)核→報告。9

主要分析參數(shù)分析儀器配套的原裝試劑，可采用儀器提供的分析參數(shù)直接使用。10結(jié)果計算儀器根據(jù)校準(zhǔn)曲線自動計算出樣本的結(jié)果。11

檢驗結(jié)果的報告及范圍11.1

結(jié)果的報告11.1.1

結(jié)果經(jīng)審核后，確認(rèn)準(zhǔn)確無誤后發(fā)出報告。11.1.2

報告單上標(biāo)明結(jié)果的計量單位、參考區(qū)間、報告日期、時間、操作者和審核者簽名，并有與申請單相同的醫(yī)學(xué)信息。11.1.3

如收到標(biāo)本的質(zhì)量可能對測定結(jié)果有影響的也在報告單上指出。11.2

報告范圍：2.0～18.5%，超過此范圍的結(jié)果報告時必須附有證明該結(jié)果準(zhǔn)確可靠的文字說明，例如：系根據(jù)標(biāo)本稀釋后重復(fù)測定的結(jié)果。12

操作性能12.1

精密度：變異系數(shù)批內(nèi)為0.5-1.0%；批間為1.65-2.66%左右。12.2

方法的有限性及干擾因素:膽紅素、維生素C、氨基甲酰血紅蛋白、乙?；t蛋白和乳糜微粒對測定均無影響。13

參考范圍及醫(yī)學(xué)決定水平參考范圍：HbA1c

0～6.5%.14

臨床意義14.1評價血糖控制治療的療效：反映2～3個月前平均血糖水平，可作為衡量糖尿病人血糖控制情況的良好指標(biāo)糖化血紅蛋白是葡萄糖或磷酸化葡萄糖與血紅蛋白中2個β鏈的N末端氨基酸結(jié)合后形成的產(chǎn)物，稱為GHb或HbA1。HbA1包括HbA1a、HbA1b、HbA1c和HbA1d。其中HbA1c是葡萄糖與血紅蛋白β鏈N末端氨基酸發(fā)生的非酶促反應(yīng)的產(chǎn)物。首先形成中間產(chǎn)物醛亞胺的反應(yīng)快速且可逆，稱為不穩(wěn)定的HbA1c；繼而通過Amadori轉(zhuǎn)位和分子重排，形成酮胺結(jié)構(gòu)，稱為穩(wěn)定型的HbA1c，該反應(yīng)緩慢且不可逆。HbA1c占HbA1的2/3以上，其余的糖化血紅蛋白是血紅蛋白與磷酸葡萄糖或果糖結(jié)合的產(chǎn)物。血紅蛋白發(fā)生非酶促糖化反應(yīng)的量與反應(yīng)物的濃度即血紅蛋白和葡萄糖成正比。由于血紅蛋白濃度保持相對穩(wěn)定，因此，血紅蛋白的糖化水平主要取決于葡萄糖的濃度。血紅蛋白的半衰期為60天，故HbA1c的含量可反映測定前8～10周的平均血糖水平。測定糖尿病患者HbA1c的水平，可以監(jiān)測近2個月的血糖控制水平?？蓞f(xié)助判斷預(yù)后：糖尿病合并視網(wǎng)膜病者，如HbA1c為8-10%，提示病變?yōu)橹械瘸潭?，可用激光進行治療；大于10%為嚴(yán)重病損，預(yù)后較差。對妊娠糖尿病，判斷是否致畸、死胎和子癇前期更有意義。14.2

病理性低血糖,各種原因所致紅細(xì)胞平均壽命縮短的溶血性貧血，影響了血紅蛋白的糖化過程，會使HbA1C降低。15

結(jié)果審核以及分析與相關(guān)項目的聯(lián)系15.1

由資深專業(yè)人員負(fù)責(zé)檢驗結(jié)果的審核。15.2

認(rèn)真審核每一個測定結(jié)果，審核者對發(fā)出報告結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性負(fù)責(zé)，并在報告單的審核者處簽名。15.3

相關(guān)項目：審核與空腹血糖、餐后二小時血糖、糖耐量等的關(guān)系，如出現(xiàn)與臨床不符甚至相悖的情況，應(yīng)分析與查找原因。16

暫時無威脅生命的“緊急值”及報告規(guī)定17

有關(guān)引用程序與文件17.1HA-8160糖化血紅蛋白