液體菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程 第6部分：滑菇（征求意見稿）

ICSCCSB05212024.10.08在提交反饋意見時，請將您知道的相關(guān)專利連同支持性文件一并附上。IDB21/TXXXX—2024前言 2規(guī)范性引用文件 3術(shù)語和定義 4生產(chǎn)要求 5生產(chǎn)技術(shù) 26標簽、記錄與存檔 4DB21/TXXXX—2024本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本標準由遼寧省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出并歸口管理。本標準起草單位：遼寧省農(nóng)業(yè)科學院，遼寧三友農(nóng)業(yè)科技有限公司。本標準起草人：：張敏、宋瑩、劉娜、鄒冰、王紅、李躍、張季軍、呂立濤、鄧會超本標準發(fā)布實施后，任何單位和個人如有問題和意見建議，均可以通過來電和來函等方式進行反饋，我們將及時答復并認真處理，根據(jù)實際情況依法進行評估及復審。歸口管理部門通訊地址：遼寧省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳（沈陽市和平區(qū)太原北街2號聯(lián)系電話準起草單位通訊地址：遼寧省農(nóng)業(yè)科學院（遼寧省沈陽市沈河區(qū)東陵路84號），郵編：110001，聯(lián)系電話1DB21/TXXXX—2024液體菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程第6部分：滑菇本標準規(guī)定了滑菇（Pholiotamicrospora）液體菌種的術(shù)語和定義、生產(chǎn)要求、生產(chǎn)技術(shù)、標簽、記錄和存檔等內(nèi)容。本標準適用于遼寧省內(nèi)滑菇液體菌種生產(chǎn)。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB150壓力容器GB5749生活飲用水衛(wèi)生標準GB50073潔凈廠房設計規(guī)范GB/T12728食用菌術(shù)語NY/T528食用菌菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程NY/T1731食用菌菌種良好作業(yè)規(guī)范NY/T1742食用菌菌種通用技術(shù)要求NY/T1846食用菌菌種檢驗規(guī)程3術(shù)語和定義GB/T12728-2006界定的術(shù)語和定義適用于本文件。4生產(chǎn)要求4.1人員要求應有經(jīng)過專業(yè)培訓且掌握基礎理論知識、菌種生產(chǎn)和檢驗技術(shù)菌種生產(chǎn)所需要的技術(shù)人員和檢驗人4.2場地環(huán)境要求場地交通便利、遠離垃圾場、畜禽場舍等污染源。菌種生產(chǎn)場地應符合NY/T528規(guī)定，生產(chǎn)環(huán)境應符合NY1731，生產(chǎn)用水應符合GB5749。4.3生產(chǎn)設備與設施要求2DB21/TXXXX—2024生產(chǎn)設備和設施布局合理、規(guī)模配套，符合NY/T528規(guī)定。接種室、培養(yǎng)室按照GB50073要求設計建造。部分場所設施設備應達到如下要求：a)接種室、固體菌種培養(yǎng)室、液體菌種培養(yǎng)室配備調(diào)溫設施；b)接種室、固體菌種培養(yǎng)室空間潔凈度達到萬級；液體菌種培養(yǎng)室空間潔凈度達到十萬級；c)化驗室和菌種保藏室具備相應檢測設備、滅菌設施及常規(guī)實驗用具。4.4培養(yǎng)原料化學試劑類、生物制劑及天然材料類應符合NY/T528要求，不溶于水固體物料小于40目。4.5菌種從具備相應資質(zhì)的單位引種。選用優(yōu)質(zhì)、高產(chǎn)、穩(wěn)定、抗逆性強、商品性好的滑菇品種，且種性清楚。菌種應符合NY/T528要求。5生產(chǎn)技術(shù)5.1母種制作5.1.1推薦培養(yǎng)基配方馬鈴薯200g，鋸末50g，麥麩50g，葡萄糖20g，蛋白胨2g，VB10.01g，磷酸二氫鉀1.5g，硫酸鎂0.75g，瓊脂粉18g~20g，水定容至1000mL，pH自然。5.1.2培養(yǎng)基配置按照生產(chǎn)量和配方5.1.1比例要求進行原料稱量。容器內(nèi)加水，鋸末和麥麩用紗布包好后放在容器內(nèi)共同煮，將去皮切片馬鈴薯置沸水中煮15min~20min，四層紗布過濾、定容至生產(chǎn)用量，加入瓊脂充分融化后，再加入其他原料，分裝到生產(chǎn)用試管中，分裝量為試管長1/4~1/5，塞上膠塞，進行滅菌（0.11MPa~0.12MPa，滅菌30min），將滅菌后試管趁熱擺放在斜面板上冷卻，試管中培養(yǎng)基斜面長度為試管長度1/2~2/3。母種的容器、滅菌、滅菌效果的檢查符合NY/T528要求。試管冷卻后，試管內(nèi)無明顯水珠后用于下一步接種使用。5.1.3接種和培養(yǎng)按照1:20～1:30的比例，對保藏的母種進行轉(zhuǎn)管接種，將接種后的試管放在培養(yǎng)溫度為18℃~21℃、空氣相對濕度為75%以下、避光、通風良好的條件下培養(yǎng)。5.1.4母種檢驗按照NY/T1846規(guī)程進行檢驗。培養(yǎng)期間每天檢查2次，及時淘汰染菌或劣勢菌種。逐支進行檢驗，肉眼觀察要求菌絲棉絮狀、較短，厚薄均勻一致、無角變，菌絲長勢強，尖端菌絲一致、整齊；顯微鏡觀察菌絲粗壯、無雜菌、無蟲及無蟲卵。菌絲長滿，質(zhì)量符合NY/T1742要求的菌種進入下一步生產(chǎn)流程。5.1.5貯存及留樣3DB21/TXXXX—2024將制備好的母種放置于溫度4℃、空氣相對濕度60%～70%、通風、清潔、避光的條件下貯存。母種應留樣備查，留樣的數(shù)量應以每個批號3~5支為宜，留樣至經(jīng)液體菌種轉(zhuǎn)接的栽培種（菌棒）出菇結(jié)束。5.2搖瓶菌種制備5.2.1推薦培養(yǎng)基配方紅糖20g，豆粉6g，磷酸二氫鉀3g，硫酸鎂1.5g，水定容至1000mL，pH自然。5.2.2培養(yǎng)基配置按照生產(chǎn)量和配方5.2.1比例要求進行原料稱量。容器內(nèi)加水，豆粉用紗布包好后放在容器內(nèi)共同煮，將去皮切片馬鈴薯置煮沸的水中，煮15min~20min，四層紗布過濾，濾液按照生產(chǎn)量定容，加入其他原料，分裝至搖瓶中，裝液量為搖甁容量的1/5~2/5，膠塞封口，并用硫酸紙或牛皮紙包扎，培養(yǎng)基配置后應在4h內(nèi)高壓滅菌，0.11MPa~0.12MPa，滅菌30min。滅菌效果的檢查符合NY/T528要求。5.2.3接種和培養(yǎng)培養(yǎng)基冷卻至25℃以下，按無菌操作規(guī)程，用接種鏟從母種培養(yǎng)基斜面上切取（3~5）mm×（3~5）mm的菌種塊，接種到搖瓶液體培養(yǎng)基中，每100mL液體培養(yǎng)基中接入6~8塊。接種完成后及時貼好標簽，靜置培養(yǎng)24h后，置于搖床上進行震蕩培養(yǎng)。培養(yǎng)條件為溫度18℃~21℃,避光，旋轉(zhuǎn)式搖床振蕩頻率150r/min，培養(yǎng)時間7d~9d。5.2.4菌種檢驗按照NY/T1846-的要求進行菌種檢查。培養(yǎng)期間每天檢查1次，如發(fā)現(xiàn)有異味、培養(yǎng)基渾濁等不正?，F(xiàn)象應及時淘汰。5.2.5貯存及留樣將制備好的液體菌種置于溫度4℃、空氣相對濕度60%～70%、通風、清潔、避光的條件下貯存，貯存期不超過10d。留樣的數(shù)量一般每個批號3瓶，留至生產(chǎn)者正常生產(chǎn)條件下該菌種出第一潮菇。5.3發(fā)酵罐液體菌種生產(chǎn)5.3.1推薦培養(yǎng)基配方紅糖20g，玉米粉6g，磷酸二氫鉀3g，硫酸鎂1.5g，水定容至1000mL，pH自然。5.3.2發(fā)酵罐檢查與清洗檢查發(fā)酵罐上全部閥門、安全閥、壓力表，要求完好，工作正常?？諝膺^濾器濾芯應無油污、料污、無破損，外殼內(nèi)外壁要求無污物、光亮潔凈。對罐體內(nèi)、外和全部閥門用流水進行沖洗，達到無死角、內(nèi)壁無任何培養(yǎng)料殘余物。5.3.3空消滅菌4DB21/TXXXX—2024如遇發(fā)酵罐初次使用、出現(xiàn)雜菌、長期放置、更換品種等情況之一時，需對發(fā)酵罐進行空消滅菌。要求罐體壓力0.120Mpa~0.140Mpa、溫度121℃~126℃時，滅菌時間30min~40min。5.3.4投料定容按照配方5.3.1比例準備培養(yǎng)料，用水符合GB5749要求，培養(yǎng)基質(zhì)符合NY/T528要求。用熱水將原料充分攪拌溶解，倒入或用泵抽入發(fā)酵罐中，加水定容至罐體總?cè)莘e的60%~80%，擰緊上料口蓋，再次檢查發(fā)酵罐各部位安裝是否合格。5.3.5實消滅菌與冷卻投料定容完成后，利用外源蒸汽實消滅菌。按高壓蒸汽滅菌方法操作，發(fā)酵罐內(nèi)壓力達到0.11Mpa~0.12Mpa，培養(yǎng)基溫度達到121℃~123℃、保持時間為60min～90min。實消滅菌結(jié)束后，將培養(yǎng)基降溫至25℃以下。降溫過程中要及時向培養(yǎng)器內(nèi)補充無菌空氣，保持發(fā)酵罐正壓。5.3.6接種接種時，兩人配合操作，利用火焰保護接種法接入搖甁菌種，接種量為0.5%~1.5%V/V。具體方法如下：用75%酒精將接種口的外蓋和周圍擦拭兩遍，用95%酒精浸濕發(fā)酵罐投料口使用的火圈，開大排氣閥，當罐壓降到接近于0時，迅速關(guān)閉排氣閥并點燃放在投料口的上方火圈，此時打開進料口蓋，把搖瓶液體菌種迅速投入罐中，迅速蓋好進料口蓋、擰緊。罐內(nèi)升壓后移走火焰圈，液體菌種進入培養(yǎng)階段。5.3.7培養(yǎng)培養(yǎng)時控制進氣閥的通風量為1：0.5~1.2V/V(料液體積/空氣體積)，罐壓保持在0.02Mpa~0.05Mpa之間、培養(yǎng)溫度為23℃~25℃。培養(yǎng)5d~8d后，發(fā)酵罐菌種即可達到放罐指標。5.3.8檢驗培養(yǎng)開始3d后從發(fā)酵罐中取樣進行檢測，檢測方法同5.2.4。如異常情況則排空罐內(nèi)培養(yǎng)物，空消滅菌，重新生產(chǎn)。5.3.9留樣液體菌種在發(fā)酵罐內(nèi)應持續(xù)通入無菌空氣，