霉菌實驗報告

霉菌實驗報告霉菌實驗報告范文

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一.實驗目的

1．掌握配制馬鈴薯培養(yǎng)基（PDA）的一般方法。

2．學習并掌握觀察霉菌形態(tài)的基本方法。

3．了解并掌握四類霉菌（根霉、毛霉、曲霉、青霉）的基本形態(tài)。

二.實驗原理

1.霉菌

霉菌是可產(chǎn)生復雜分枝的菌絲體，其菌絲分基內(nèi)菌絲和氣生菌絲，氣生菌絲生長到一定階段分化產(chǎn)生繁殖菌絲，由繁殖菌絲產(chǎn)生孢子。霉菌菌絲體（尤其是繁殖菌絲）及孢子的形態(tài)特征是識別不同種類霉菌的重要依據(jù)。

霉菌菌絲和孢子的寬度通常比細菌和放線菌粗得多（約3～10μm），常是細菌菌體寬度的幾倍至幾十倍，因此，用低倍顯微鏡即可觀察。本實驗采用毛霉、青霉，曲霉，根霉四種常見的霉菌作為菌種進行觀察。

2.小室培養(yǎng)法

觀察霉菌的形態(tài)有多種方法，常用的有直接制片觀察法、載玻片培養(yǎng)觀察法和玻璃培養(yǎng)觀察法三種方法，本次實驗采用載玻片培養(yǎng)觀察法（小室培養(yǎng)法）。

用無菌操作將培養(yǎng)基瓊脂薄層置于載玻片上，沿瓊脂邊緣接種后蓋上蓋玻片培養(yǎng)，霉菌即在載玻片和蓋玻片之間的有限空間內(nèi)沿蓋玻片橫向生長。培養(yǎng)一定時間后，將載玻片上的培養(yǎng)物置于顯微鏡下觀察。這種方法既可以保持霉菌自然生長狀態(tài)，還便于觀察不同發(fā)育期的培養(yǎng)物。

三．實驗器材

1.菌種

曲霉（Aspergillussp.），青霉（Penicilliumsp.），毛霉（Mucorsp.）和根霉（Rhizopussp.）培養(yǎng)48h的馬鈴薯瓊脂（PDA）斜面培養(yǎng)物。

2.培養(yǎng)基及試劑

馬鈴薯瓊脂（PDA），20%甘油（無菌），乙醇。

3.儀器及其它用品

無菌操作臺，解剖刀，鑷子，無菌吸管，U型玻璃棒，普通光學顯微鏡，擦鏡紙，綢布，酒精燈，載玻片，接種針，培養(yǎng)皿等。

四．操作步驟

1.培養(yǎng)基的配制

按附錄所示配方稱取PDA各組分，先將馬鈴薯去皮，切成小塊稱取20g煮沸

姓名系年級?學號?組別科目?題目霉菌的形態(tài)觀察

同組者：

20min，然后先用1層紗布濾去未溶解的固體，再用6層紗布過濾，將濾液體積用無菌水調(diào)至101mL，然后再加入糖及瓊脂，加塞后用牛皮紙包好，準備滅菌。

2.培養(yǎng)基及裝置的滅菌

（1）滅菌準備

準備12個平皿，在其中10個平皿皿底鋪一張略小于皿底的圓濾紙片，再放一U形玻棒，其上放一潔凈載玻片和三塊蓋玻片，蓋上皿蓋后再與另外2個空平皿一起用牛皮紙包好；在101mL錐形瓶中用甘油配制20%的甘油，加塞包好；最后取2mL移液管兩支并用牛皮紙包好。

（2）滅菌

將上述用牛皮紙包好的儀器與試劑連同配好的PDA培養(yǎng)基一并放入滅菌鍋中110℃滅菌20到30min（由于培養(yǎng)基中有葡萄糖，為防止由于高溫而使糖發(fā)生糊化而變質(zhì)，滅菌溫度不宜過高）。

3.瓊脂塊制備

分別取已滅菌并溶化冷卻至約50℃的馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基6～7mL注入兩個滅菌空平皿中，使之凝固成薄層。在兩個凝固后的平板背部用記號筆畫下約1x1cm的方格，通過無菌操作，用解剖刀沿畫下的方格線將其切成方形的'瓊脂塊。（注：解剖刀使用前應先在酒精中浸泡，然后在酒精燈上灼燒，冷卻后再進行切割操作）

4.接種

在無菌操作臺上，先用鑷子將載玻片放于U型玻璃管上，然后用解剖刀取一小塊兒瓊脂塊，置于載玻片上，用接種環(huán)分別從斜面培養(yǎng)物上挑取很少量的4種菌的孢子，分別接種于培養(yǎng)小室中瓊脂塊的邊緣上，用無菌鑷子將蓋玻片覆蓋在瓊脂塊上。最后用移液管在培養(yǎng)小室中的圓濾紙上加2mL滅菌的20%的甘油（用于保持平皿內(nèi)的濕度)，蓋上皿蓋并貼上標簽，每一種菌接種兩個小室（其中毛霉接種4個小室）。

5.恒溫培養(yǎng)

將接種后的平皿正置于28℃培養(yǎng)箱中恒溫培養(yǎng)7天。6.鏡檢

在顯微鏡下直接觀察小室培養(yǎng)后的載玻片，用低倍鏡即可較為清晰的觀察到霉菌的菌絲體及孢子，根據(jù)所學的四種菌的基本特征對四種菌進行觀察比較與區(qū)分，必要時可以采用高倍鏡對菌進行觀察。

五．實驗結(jié)果記錄

1.四種霉菌的形態(tài)特征

姓名系年級?學號?組別科目?題目霉菌的形態(tài)觀察

同組者：

毛霉、根霉、青霉、曲霉的形態(tài)特征比較

2.四種霉菌的圖示

圖1根霉的形態(tài)（10x40）

姓名系年級?學號?組別科目?題目霉菌的形態(tài)觀察

同組者：

圖2黑曲霉的形態(tài)（10x10）

圖

3黑曲霉的形態(tài)（10x40）

圖4黑曲霉足細胞（10x40）

姓名系年級?學號?組別科目?題目霉菌的形態(tài)觀察

同組者：

圖5毛霉的形態(tài)（10x40）

分生小梗隔

圖6青霉的形態(tài)（10x40）

六、實驗小結(jié)

通過本次實驗，學會了小室培養(yǎng)培及馬鈴薯培養(yǎng)基的配制方法。另外，通過觀察霉菌的形態(tài)并且有特別的關(guān)注不同霉菌的細節(jié)及不同之處，比如菌絲是否有隔，孢子囊形態(tài)等特征，細心比較各種霉菌細節(jié)狀態(tài)的不同，掌握了霉菌的一些基本形態(tài)特征，擴展了視野。

七、思考題

1、黑曲霉和黑根霉在形態(tài)