人皰疹病毒8型PCR試劑盒說明書

第第頁人皰疹病毒8型PCR試劑盒說明書人皰疹病毒8型PCR試劑盒說明書【產(chǎn)品名稱】商品名稱：人皰疹病毒8型PCR試劑盒Name：HumanHerpesvirus8（HHV8）PCRKit【包裝規(guī)格】50次/盒【產(chǎn)品及特點(diǎn)】人皰疹病毒8型（HumanHerpesvirus8,HHV8）是從淋巴增生性疾病和艾滋病患者淋巴細(xì)胞中培養(yǎng)獲得的一種新病毒，可通過唾液飛沫及密切接觸（如接吻，共用餐、飲器具等）、輸血傳播。除免疫低下（如先天性免疫缺陷、艾滋病、長期服用免疫抑制劑等）外，絕大多數(shù)人感染后終身都不會產(chǎn)生明顯癥狀；免疫低下者，如HIV感染者，當(dāng)人體特異性免疫被減弱至肯定程度時，潛匿的病毒可被激活并產(chǎn)生急性感染癥狀，此時會顯現(xiàn)間質(zhì)性肺炎、腦炎、腦膜炎、肝炎及多器官衰竭等癥狀，活化的病毒可大規(guī)模感染T淋巴細(xì)胞，使免疫功能進(jìn)一步減弱，該病毒對人體健康有較大影響，因此檢測人皰疹病毒8型DNA具有緊要意義。本產(chǎn)品就是依據(jù)PCR原理開發(fā)的、檢測此病毒的試劑盒。本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn)：1.即開即用，用戶只需要供應(yīng)病毒DNA模板。2.引物經(jīng)過精心優(yōu)化，專一性強(qiáng)，只擴(kuò)增人皰疹病毒8型病毒DNA，與其他病毒沒有交叉反應(yīng)。3.供應(yīng)陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。4.PCRmix中含上樣染料，PCR后可以直接上樣電泳。5.本試劑盒充分做40μL體系的PCR50次，但只能用于科研?！疽?guī)格及成分】成份編號十孔盒包裝PCRMagicMix3.0639811mL（紅蓋）超純水1093501mL（亮黃色）人皰疹病毒8型PCR引物混合液3026yw100μL（白蓋）人皰疹病毒8型PCR陽性對照（1×10E8拷貝/μL）939813026pc50μL（黃蓋）【運(yùn)輸及保管】低溫運(yùn)輸，20℃保管，保管期限為一年。人皰疹病毒8型PCR陽性對照需要單獨(dú)放置，不要污染其他試劑。【自備試劑】樣品DNA。【使用方法】一、樣品DNA的制備用自選方法純化N+2個樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。2.假如有N個樣品，則需做N+2個提取，包含一個樣品制備陽性對照和一個樣品制備陰性對照。樣品制備陽性對照是人皰疹病毒8型PCR陽性對照的1000倍稀釋液，其總體積等于試劑盒所需的樣品量，樣品制備陰性對照是直接用水。二、設(shè)置PCR反應(yīng)（40μL體系）3.對N+2個樣品，在PCR時需要加添一個PCR陽性對照和一個PCR陰性對照，故需要設(shè)置N+4個反應(yīng)。在N+4個PCR管中分別加入下列成分：成分N+2個樣品管PCR陰性對照PCR陽性對照PCRMagicMix3.0各20μL20μL20μL人皰疹病毒8型通用PCR引物混合液各2μL2μL2μLN+2個樣品DNA模板各18μLPCR陰性對照（水）18μLPCR陽性對照（人皰疹病毒6型通用PCR陽性對照的1000倍稀釋液）18μL4.按下表設(shè)置PCR反應(yīng):過程溫度時間預(yù)變性95℃5minPCR反應(yīng)（35個循環(huán)）95℃15sec55℃15sec82℃30sec最終延長82℃10min三、電泳檢測5.取5μLPCR產(chǎn)物電泳進(jìn)行檢測。本產(chǎn)品供應(yīng)的PCRMix在擴(kuò)增結(jié)束后可以直接上樣，不需要另外再加loadingbuffer。預(yù)期的PCR產(chǎn)物長度為481b