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DB34DB34/T1938—2013鴨黃病毒感染診斷技術規(guī)程TechnicalregulationforDiagnosisofduckflavivirusinfection安徽省質量技術監(jiān)督局發(fā)布I1本標準規(guī)定了鴨黃病毒感染臨床診斷和PCR檢測的技術規(guī)程，其中包括流行病學、臨床診斷、實等地的蛋鴨和種鴨由于鴨黃病毒感染而引起聚合酶鏈式反應（polymerasechaPCR技術是一種在體外酶促合成特異DNA片段的一種方法。由高溫變性、低溫退火及適溫延伸等——上游引物R1：5'-CGCGGATCCTCTGGGAACGACGAGAAG-3'——下游引物R2：5'-CCGGAATTCTCGGCATTGACATTTACT-3'2該病一年四季均可發(fā)生。病鴨開始出現采食量減少和產蛋量下降。產蛋率從產蛋高峰下降到10%以下，種蛋受精率降低10％左右。病鴨產蛋多為畸形蛋和軟殼蛋，病死率0～15％。沒有繼發(fā)感況下，病程持續(xù)10～30d，鴨群會自然康復，產蛋率也隨之恢復，但一般最多可恢復到發(fā)病前的70%。有飲、食欲，但多數因飲水、采食困難衰竭而死，死在10℃以下進行樣品處理。用無菌PBS緩沖液與樣品按體積質量比5:1將樣在含有樣品的塑料離心管中加入600μL抽提液A（1mol/LTris水溶液飽和酚:三氯甲烷:異戊醇按照25:24:1的混合液用力混合至少30s,12000r/min離心5min,小心取上層水相(約800μL)，再加入700μL抽提液B(三氯甲烷/異戊醇按24:1的比例混合液)，用力混合至少30s,12000r/min離心5min，小心取上層水相(約600μL)。再加入-20℃預冷的1.5倍體積的無水乙在上述反應管中繼續(xù)加入5μL的5倍逆轉錄酶濃縮緩酶抑制劑(20U),1μL逆轉錄酶M-MLV(10U)和1.——雙蒸滅菌水37.5μL——反轉錄產物4μL——上游引物0.5μL——下游引物0.5μL——10×PCRBuffer5μL5.7.4蓋好電泳儀，插好電極，將電壓調至90V左5.8.1從樣品處理開始設立陽性對照、陰性5.8.2取含有鴨黃病毒AH-F10株（中國典5.8.4取等體積水代替樣品為模板作5.9.2結果出現大小約260bp擴增片段時，初步判定為鴨6.1臨床診斷符合4.1、4.2、4.3、4.4，初步判定為6.3診斷結果符合6.1、6.2，______________

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