AbMole SMAD3 在前列腺癌中的作用研究新發(fā)現(xiàn)

AbMole|SMAD3在前列腺癌中的作用研究新發(fā)現(xiàn)前列腺癌作為男性中第二常見的癌癥，一直以來都是醫(yī)學研究的重點領域。近期，一篇發(fā)表在《NucleicAcidsResearch》的研究論文為我們深入理解前列腺癌的發(fā)病機制提供了新的視角。來自馬里蘭大學生物化學與分子生物學系的Hee-YoungJeon,MajidPornour,HyunjuRyu等多名研究人員發(fā)表了題為《SMAD3promotesexpressionandactivityoftheandrogenreceptorinprostatecancer》的研究成果。在該文章中，研究人員使用購自AbMole的IWP-L6（目錄號M1839），該研究聚焦于SMAD3在前列腺癌中的作用，通過一系列嚴謹?shù)膶嶒灲沂玖似鋵π奂に厥荏w（AR）表達和活性的重要影響。實驗結果表明，SMAD3在前列腺癌中扮演著關鍵角色。首先，SMAD3促進PCa細胞中AR和AR靶基因的表達。通過敲低SMAD3，研究人員發(fā)現(xiàn)PCa細胞中AR和AR靶基因的mRNA水平顯著減少，同時AR和AR-V7的蛋白水平也降低。而敲低SMAD4或SMAD2對AR信號幾乎沒有影響，這明確地指出SMAD3是PCa細胞中AR表達和活性的關鍵調(diào)節(jié)因子。圖1.SMAD3促進AR和AR靶標的表達。進一步的研究發(fā)現(xiàn)，SMAD3調(diào)節(jié)AR表達不需要TGF-β信號。TGF-β處理對PCa細胞中AR和AR靶基因的表達沒有影響。這意味著SMAD3對AR的調(diào)控作用獨立于傳統(tǒng)認知中的TGF-β信號通路，為前列腺癌的研究開辟了新的方向。圖2.SMAD4或SMAD2對AR和AR靶標的表達影響很小或沒有影響。RNA測序分析為SMAD3的作用提供了更全面的證據(jù)。對轉導了sh-Control、sh-SMAD2、sh-SMAD3或sh-SMAD4慢病毒的Rv1細胞進行RNA測序分析顯示，SMAD3敲低后，許多與AR信號相關的基因表達發(fā)生了變化?；虮倔w論（GO）分析進一步揭示了這些變化的生物學意義，表明SMAD3在調(diào)節(jié)前列腺癌細胞的生物學過程中起著重要作用。Cut&runChIP-sequencing分析則深入探究了SMAD3與染色質的相互作用。對轉導了sh-Control或sh-SMAD3慢病毒的Rv1細胞進行ChIP-seq制備和分析發(fā)現(xiàn)，SMAD3與AR基因的特定區(qū)域結合，提示SMAD3可能直接調(diào)控AR的表達。在生物信息學分析方面，轉錄調(diào)節(jié)因子預測等方法也為SMAD3的作用提供了支持。通過這些分析，研究人員確定了SMAD3可能調(diào)控的基因網(wǎng)絡，進一步闡明了SMAD3在前列腺癌中的作用機制。圖3.AR的重新表達部分挽救了SMAD3-KDPCa細胞的AR靶表達和生長。此外，實驗還通過質粒構建、慢病毒載體包裝和轉導等方法，深入研究了SMAD3與AR的關系。構建的多種質粒用于表達AR、SMAD3等蛋白，慢病毒載體則將特定的基因導入PCa細胞，為實驗提供了有力的工具。免疫沉淀和westernblotting實驗檢測了蛋白質的表達和相互作用。結果證實了SMAD3與AR之間存在相互作用，進一步支持了SMAD3對AR表達和活性的調(diào)節(jié)作用。實時RT-PCR分析檢測了細胞中AR、SMAD3等基因的mRNA水平，與其他實驗結果相互印證，再次強調(diào)了SMAD3在前列腺癌細胞中對AR表達的重要性。ChIP-PCR檢測了AR基因中不同區(qū)域的染色質結合情況，為SMAD3直接調(diào)控AR表達提供了更直接的證據(jù)。CRISPRi靶向SBE位點的實驗則阻斷了SMAD3與SBE的結合，進一步證實了SMAD3通過與特定位點結合來調(diào)節(jié)AR表達。2D菌落形成試驗和軟瓊脂試驗檢測了PCa細胞的菌落形成能力。結果顯示，SMAD3敲低后，PCa細胞的菌落形成能力減弱，表明SMAD3對前列腺癌細胞的生長和增殖具有重要影響。最后，異種移植模型的構建為研究結果提供了體內(nèi)證據(jù)。裸鼠異種移植模型顯示，SMAD3敲低的PCa細胞腫瘤形成能力降低，進一步證實了SMAD3在前列腺癌中的關鍵作用。綜上所述，該研究通過多方面的實驗結果，明確了SMAD3在前列腺癌中促