DB32T-彩色馬蹄蓮組培快繁技術(shù)規(guī)程

Q/LB.□XXXXX-XXXX目次TOC\o"1-1"\h\t"標準文件_一級條標題,2,標準文件_附錄一級條標題,2,"前言 II1范圍 12規(guī)范性引用文件 13術(shù)語和定義 14組培苗的生產(chǎn) 14.1外植體獲取 14.2外植體的消毒 14.3不定芽的誘導 14.4不定芽的增殖 14.5壯芽培養(yǎng) 24.6壯苗培養(yǎng) 24.7瓶內(nèi)結(jié)球培養(yǎng) 24.8生根培養(yǎng) 25煉苗和移栽 25.1環(huán)境條件 25.2移栽基質(zhì) 25.3煉苗 25.4移栽 26移栽后管理 36.1水分 36.2光照 36.3溫度 36.4濕度 36.5施肥 36.6病害防治 37一年生仔球的生產(chǎn) 3附錄A（資料性）基質(zhì)消毒方法 4附錄B（資料性）常用細菌殺菌劑 6前言本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件由江蘇省中國科學院植物研究所提出并歸口。本文件起草單位：江蘇省中國科學院植物研究所。本標準主要起草人：鄭玉紅，傅力，付嬌嬌，韓福貴。彩色馬蹄蓮組培快繁技術(shù)規(guī)程范圍本文件規(guī)定了彩色馬蹄蓮品種組織培養(yǎng)快速繁殖、組培苗的移栽管理和病蟲害防治的技術(shù)要求。本文件適用于江蘇省采用組織培養(yǎng)的方式進行彩色馬蹄蓮的繁殖。規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。LY/T1589花卉術(shù)語CJ/T135園林綠化球根花卉種球術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。一年生仔球oneyear~oldtuber組培苗經(jīng)過一個生長季的栽培發(fā)育形成的塊莖。組培苗的生產(chǎn)外植體獲取選取直徑大于4.0cm的健康的彩色馬蹄蓮塊莖，用800~1000倍廣譜性殺菌劑水溶液浸泡15min后，淺埋于經(jīng)高壓滅菌的濕潤細沙中，在光照強度3000lx、光照時間12h/d、(25±1)℃的條件下預培養(yǎng)7～10d后，選取芽長約1cm的塊莖，作為外植體。外植體的消毒用軟毛刷將塊莖刷洗干凈，避免損傷頂芽，將其切成長寬均約為1.5cm的帶芽小塊，放入含1%液體洗滌劑的溶液中振蕩洗滌20min~30min，之后流水沖洗40min~60min，轉(zhuǎn)入超凈工作臺，75％酒精消毒30s~45s后，無菌水沖洗2~3次，再用有效氯含量2%~3%的次氯酸鈉溶液消毒25min～35min，無菌水沖洗4～5次，無菌吸水紙吸干表面的水分。不定芽的誘導將消毒好的彩色馬蹄蓮種球切成大小約lcm3的帶芽小塊，接種至下列培養(yǎng)基中：基本培養(yǎng)基MS，蔗糖30g/L，6~BA2.0~5.0mg/L，pH5.8；在溫度（25±1）℃，黑暗培養(yǎng)，直至外植體萌發(fā)出不定芽。不定芽的增殖將生長至4~6cm的不定芽連同部分塊莖一起切下，在不定芽增殖培養(yǎng)基中進行增殖培養(yǎng)：基本培養(yǎng)基MS，瓊脂6.5g/L~7.0g/L，蔗糖30g/L，6~BA2.0mg/L~4.0mg/L，pH5.8；溫度（25±1℃），光照強度為1000~3000lx，光照時間12h，直至誘導出塊狀叢生芽。壯芽培養(yǎng)將塊狀叢生芽分切成約1.0cm2小塊，接種到壯芽培養(yǎng)基上，進行壯芽培養(yǎng)：基本培養(yǎng)基MS，瓊脂6.5g/L~7.0g/L，蔗糖30g/L，NAA0~0.5mg/L，6~BA2.0mg/L~3.0mg/L，pH5.8；溫度（25±1）℃，光照強度為1000~3000lx，光照時間12h，培養(yǎng)周期60d~80d，直至叢生芽長成可以分切成單株的小苗。其中，在30d~40d，采用同樣的配方進行繼代培養(yǎng)。壯苗培養(yǎng)將壯芽后分切成單株的小苗接種到一下培養(yǎng)基中進行壯苗培養(yǎng)，培養(yǎng)基組分為：基本培養(yǎng)基MS，瓊脂6.5g/L~7.0g/L，蔗糖30g/L，NAA0~1.0mg/L，6~BA2.0mg/L~3.0mg/L，pH5.8；溫度（25±1）℃，光照強度為1000~3000lx，光照時間12h，培養(yǎng)周期60d~80d，直至長成塊莖直徑約0.5cm小苗。瓶內(nèi)結(jié)球培養(yǎng)將塊莖約0.5cm小苗保留1cm~2cm葉柄，進行瓶內(nèi)結(jié)球培養(yǎng)：基本培養(yǎng)基MS，瓊脂6.5g/L~7.0g/L，蔗糖40g/L~60g/L，NAA0.5mg/L~1.0mg/L，6~BA1.0mg/L~2.0mg/L，pH5.8；溫度（25±1）℃，光照強度為1000~3000lx，光照時間12h，進行光照培養(yǎng)30d~40d，直至每株小苗均膨大出直徑0.5cm~0.8cm的塊莖。生根培養(yǎng)將已結(jié)球的試管苗，保留1~2cm葉柄，進行生根培養(yǎng)：基本培養(yǎng)基MS，瓊脂6.5g/L~7.0g/L，蔗糖30g/L，IBA1.0mg/L~2.0mg/L，pH5.8；培養(yǎng)溫度（25±1）℃，光照強度為1000~3000lx，光照時間為12h，直至每株苗均長出長度2.0cm~3.0cm、數(shù)量3~5條組培苗。煉苗和移栽環(huán)境條件宜在春季或9~10月進行。若其他季節(jié)進行，需在溫度和濕度可調(diào)控的溫室進行。移栽基質(zhì)第一次使用的基質(zhì)無需消毒，重復使用基質(zhì)須消毒。消毒的方法分物理消毒法和化學消毒法2種，詳見附錄A。要求疏松、透氣并具有一定的保水性能。采用泥炭土:珍珠巖＝2:1時，可加入適量的蛭石。煉苗在組織培養(yǎng)的緩沖間將組培瓶蓋擰松，放置2~3d；之后打開瓶蓋，再放置2d～3d，煉苗即可完成。移栽煉苗完成后，用鑷子將組培苗從瓶中取出，洗凈根部的培養(yǎng)基，用800倍~1000倍廣譜殺菌劑浸泡8min~10min，移栽到10×10的穴盤中。若直接移栽到苗床上，定植的密度以（600~700）株/m2為宜。定植深度以不倒伏為準，然后用噴霧法澆透水，移栽后管理水分掌握“少量多次”的原則，澆水的頻率也應因季節(jié)而異。水質(zhì)應符合GB5084的要求，無病菌，EC值在1.5以下，pH值為6.5～7.2。定植約4周后，進行正常的水分管理。光照夏季進行組培苗的露地移栽時，須加蓋一層遮光度30%～50%遮陽網(wǎng)進行遮蔭。溫度應將環(huán)境溫度控制18℃～28℃，最高不超過30℃。夏季移栽，當溫度超過28℃時，即應用微噴霧設備降溫，同時加大遮陽度，保持良好的通風。濕度保持相對濕度60%~80%。移栽一周內(nèi)宜保持70%~80%，一周后可逐步降低。施肥定植約4周后，需進行根外施肥?？墒褂肗:P:K=2:1:1，濃度0.3%~0.5%的液態(tài)肥，并按先低后高的原則，每7d~10d施肥一次。病害防治以預防細菌性病害為主?？擅?~3周進行一次灌根。常用光譜性殺菌劑均可使用。一年生仔球的生產(chǎn)彩色馬蹄蓮組培苗在穴盤或苗床上栽培一個生長季節(jié)，并發(fā)育出直徑約2cm的塊莖后，即可通過斷水等方法強制其休眠。待葉片變黃后采收，置于陰涼、通風處干燥。采收過程中盡量避免損傷塊莖表皮。此即為一年生仔球，可進行大田種植，開展商業(yè)化生產(chǎn)。

（資料性）

基質(zhì)消毒方法A.1物理方法一般采用蒸汽消毒，即將基質(zhì)堆成圓錐狀，高度不超過1.5m，將多孔的管子平放并埋入基質(zhì)約40cm、80cm、120cm高處，表面嚴實地覆蓋塑料薄膜，然后從蒸汽鍋爐中放出200℃左右蒸汽，使基質(zhì)溫度上升70℃~90℃保持0.5h~lh即可。A.2化學方法A.2.1威百畝消毒將基質(zhì)平鋪，厚度30cm-40cm，按6g/m2用藥量，加水稀釋，用噴霧器均勻噴灑在基質(zhì)表面，然后再噴一次灌溉水，讓基質(zhì)充分濕潤，最后用完好的塑料薄膜覆蓋，四周壓實，15d后掀膜即可。操作應選在早晚涼爽環(huán)境中進行。A.2.2五氯硝基苯消毒40%可濕性粉劑，按照1:(20~40)拌細土，然后將待消毒的基質(zhì)平鋪，厚度30cm-40cm，按10g/m2用量均勻撒在基質(zhì)上，然后再噴一次灌溉水，讓基質(zhì)濕潤，最后用完好的塑料薄膜覆蓋，四周壓實15d后掀膜即可。

（資料性）

常用細菌殺菌劑B1常用細菌殺菌劑常用細菌殺菌劑見表B.1。常用細菌殺菌劑名稱規(guī)格用法用量備注五氯硝基苯70%粉劑土壤消毒按每平方米8g~9g，拌入細土，施入播種溝或播種穴內(nèi)。藥劑不得與幼苗直接接觸多菌靈50%可濕性粉劑稀釋600倍~1000倍液噴霧或浸種;土壤消毒按按每平方米6g~8g。長期連續(xù)使用易引起病菌產(chǎn)生抗藥性，應與其他殺菌劑輪換使用。甲基托布津50%可濕性粉劑稀釋700倍~1000倍噴霧。長期連續(xù)使用易引起病菌產(chǎn)生抗藥性，應與其他殺菌劑輪換使用。不得與多菌靈