2024年主管檢驗技師考試臨床醫(yī)學(xué)檢驗血液學(xué)檢驗講義第4章血細胞化學(xué)染色的臨床應(yīng)用

血細胞化學(xué)染色的臨床應(yīng)用要點1：

過氧化酶染色（POX）

（1）原理

血細胞內(nèi)的過氧化酶分解H2O2，釋出初生態(tài)氧，使無色聯(lián)苯胺氧化成藍色聯(lián)苯胺，後者深入變成棕黑色化合物，從容于胞質(zhì)內(nèi)。

（2）成果判斷

陽性成果為胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黑色顆粒。①（－），無顆粒。②（±），顆粒細小、彌散分布。③（＋），顆粒較粗、局灶分布。④（＋＋），顆粒粗大、密集、分布較廣，占胞質(zhì)的1/2～2/3。⑤（＋＋＋），顆粒粗大、成團塊，幾乎充斥胞質(zhì)。⑥（＋＋＋＋），顆粒成團塊狀，充斥胞質(zhì)，并覆蓋胞核。

（3）正常血細胞的染色反應(yīng)

1）粒細胞系統(tǒng)：原始粒細胞大多呈陰性反應(yīng)，有的可出現(xiàn)少許藍黑色顆粒。自早幼粒細胞至成熟中性粒細胞均呈陽性反應(yīng)，隨細胞的成熟，陽性反應(yīng)的程度逐漸增強。中性分葉核粒細胞為強陽性反應(yīng)，嗜酸性粒細胞陽性反應(yīng)的程度最強，其陽性顆粒比中性粒細胞粗大，有折光性，嗜堿性粒細胞呈陰性反應(yīng)。

2）單核細胞系統(tǒng)：原始單核細胞呈陰性反應(yīng)，幼單核細胞和單核細胞呈弱陽性反應(yīng)，陽性顆粒少而細小，彌散分布，有的也可呈陰性反應(yīng)。

3）其他細胞：淋巴細胞、巨核細胞、血小板、幼紅細胞、漿細胞和組織細胞均呈陰性反應(yīng)。有的吞噬細胞可呈陽性反應(yīng)。

過氧化酶染色（POX）模式圖

（4）臨床意義

1）協(xié)助鑒別急性白血病的類型：

①急性粒細胞白血病時，白血病性原始粒細胞可呈陽性反應(yīng)，陽性顆粒壹般較多，較粗大，常呈局限性分布；急性淋巴細胞白血病時，原始淋巴細胞和幼淋巴細胞均呈陰性反應(yīng)；急性單核細胞白血病時，白血病性原始單核細胞呈陰性反應(yīng)，有時雖少數(shù)可呈弱陽性反應(yīng)，但陽性顆粒少而細小，常彌散分布。

②小型原始粒細胞和原始淋巴細胞不易區(qū)別，假如小型原始細胞呈過氧化物酶陽性反應(yīng)，可確定為小型原始粒細胞。

③急性早幼粒細胞白血病有時須與急性單核細胞白血病鑒別，假如白血病細胞呈過氧化物酶強陽性反應(yīng)，應(yīng)確定為急性早幼粒細胞白血病。

④急性單核細胞白血病有時須與組織細胞白血病或惡性組織細胞病鑒別，異常組織細胞的過氧化物酶呈陰性反應(yīng)，而白血病性幼單核細胞和單核細胞呈弱陽性反應(yīng)。

2）成熟中性粒細胞過氧化物酶活性的變化：

①活性增高：可見于再生障礙性貧血、感染（尤其是化膿菌感染）、急性淋巴細胞白血病和慢性淋巴細胞白血病。

②活性減低：可見于急性粒細胞白血病、慢性粒細胞白血病、急性單核細胞白血病、骨髓增生異常綜合征、放射病及退化性中性粒細胞。

過碘酸-雪夫反應(yīng)（糖原染色、PAS）

（1）原理

過碘酸是氧化劑，使含乙二醇的多糖類物質(zhì)氧化，形成雙醛基。醛基與雪夫試劑中的無色品紅結(jié)合，形成紫紅色化合物，附著在具有多糖類的胞質(zhì)中。紅色的深淺與細胞內(nèi)能反應(yīng)的乙二醇基的量成正比。

（2）成果判斷

陽性成果為胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)紅色顆粒、塊狀或呈彌漫狀紅色。①（－），胞質(zhì)無色，無顆粒。②（＋），胞質(zhì)淡紅色或有少許紅色顆粒，壹般＜10個顆粒。③（＋＋），胞質(zhì)紅色或有10個以上紅色顆粒。④（＋＋＋），胞質(zhì)呈暗紅色或有粗大紅色顆粒，可出現(xiàn)紅色塊狀。⑤（＋＋＋＋），胞質(zhì)呈紫紅色或有粗大紅色塊狀。

過碘酸-雪夫反應(yīng)（糖原染色、PAS）模式圖

（3）正常血細胞的染色反應(yīng)

1）粒細胞系統(tǒng)：原始粒細胞為陰性反應(yīng)；自早幼粒細胞至中性分葉核粒細胞均呈陽性反應(yīng)，并隨細胞的成熟，陽性反應(yīng)的程度逐漸增強；嗜酸性粒細胞的顆粒自身不著色，而顆粒之間的胞漿呈紅色；嗜堿性粒細胞為陽性反應(yīng)，陽性反應(yīng)物質(zhì)為大小不壹的紫紅色顆粒。

2）紅細胞系統(tǒng)：幼紅細胞和紅細胞均呈陰性反應(yīng)。

3）單核細胞系統(tǒng)：原始單核細胞為陰性反應(yīng)，幼單核細胞為（＋）陽性反應(yīng)，單核細胞為（＋）～（＋＋）陽性反應(yīng)。有時在胞質(zhì)的邊緣處陽性反應(yīng)顆粒較粗大。

4）淋巴細胞：大多數(shù)淋巴細胞為陰性反應(yīng)，少數(shù)淋巴細胞可呈（＋）陽性反應(yīng)。

5）巨核細胞和血小板：巨核細胞為陽性反應(yīng)，陽性反應(yīng)物質(zhì)為紅色顆粒狀，有時為紅色塊狀。血小板為陽性反應(yīng)，陽性反應(yīng)物質(zhì)為細顆粒狀，有時為紅色小塊狀。

6）其他細胞：漿細胞壹般為陰性反應(yīng)，少數(shù)可呈陽性反應(yīng)，陽性反應(yīng)物質(zhì)為紅色細胞顆粒狀。巨噬細胞可呈陽性反應(yīng)，陽性反應(yīng)物質(zhì)為紅色細顆粒狀。

（4）臨床意義

1）紅細胞系統(tǒng)：

①紅血病或紅白血病時幼紅細胞可呈陽性反應(yīng)，有時陽性反應(yīng)幼紅細胞的比例增高，陽性反應(yīng)的程度也很強，有時紅細胞也呈陽性反應(yīng)。

②缺鐵性貧血、珠蛋白生成障礙性貧血（又稱地中海貧血）以及骨髓增生異常綜合征時幼紅細胞可呈陽性反應(yīng)，有時陽性反應(yīng)幼紅細胞的比例也較高。有時紅細胞也可呈陽性反應(yīng)。

③巨幼細胞性貧血、溶血性貧血、再生障礙性貧血和白血病等疾病時，幼紅細胞為陰性反應(yīng)，有時僅個別幼紅細胞呈陽性反應(yīng)。

2）白細胞系統(tǒng)：急性淋巴細胞白血病時白血病性原始淋巴細胞的陽性反應(yīng)物質(zhì)為紅色粗顆粒狀或紅色塊狀，底色不紅；急性粒細胞白血病時，白血病性原始粒細胞的陽性反應(yīng)物質(zhì)呈均勻分布的紅色細顆粒狀或呈均勻紅色；急性單核細胞白血病時，白血病性原始單核細胞的陽性反應(yīng)物質(zhì)呈紅色細顆粒狀，彌散分布，有時在胞漿的邊緣處顆粒較粗大。

3）其他細胞：①協(xié)助鑒別不經(jīng)典巨核細胞和霍奇金細胞或Reed-Sternberg細胞，前者呈強陽性反應(yīng)，後者呈弱陽性或陰性反應(yīng)。②協(xié)助鑒別戈謝細胞和尼曼-匹克細胞，前者呈強陽性反應(yīng)，後者是弱陽性反應(yīng)，且空泡中心為陰性反應(yīng)。③協(xié)助鑒別白血病細胞和腺癌骨髓轉(zhuǎn)移的腺癌細胞，後者呈強陽性反應(yīng)，陽性反應(yīng)物質(zhì)為紅色細顆粒狀或粗顆粒狀，有時呈紅色塊狀。

要點2：

堿性磷酸酶染色（NAP）

（1）原理（偶氮偶聯(lián)法）

血細胞內(nèi)的堿性磷酸酶在pH9.4～9.6的條件下將基質(zhì)液中的α-磷酸萘酚鈉水解，產(chǎn)生α-萘酚與重氮鹽偶聯(lián)形成不溶性灰黑色沉淀，定位于酶活性所在之處。

（2）成果判斷

陽性成果為胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)灰褐色至深黑色顆粒狀或片狀沉淀①（－），灰褐色沉淀，為0分。②（＋），胞質(zhì)出現(xiàn)灰褐色沉淀，為1分。③（＋＋），胞質(zhì)深褐色沉淀，為2分。④（＋＋＋），胞質(zhì)中已基本充斥棕黑色顆粒狀沉淀，但密度較低，為3分。⑤（＋＋＋＋），胞質(zhì)全被深黑色團塊沉淀所充斥，密度高，甚至遮蓋胞核，為4分。

堿性磷酸酶染色（NAP）模式圖

（3）正常血細胞的染色反應(yīng)

1）堿性磷酸酶重要存在于成熟中性粒細胞，除巨噬細胞可呈陽性反應(yīng)外，其他血細胞均呈陰性反應(yīng)。

2）成熟中性粒細胞堿性磷酸酶（NAP）積分值的計算：在油鏡下，計數(shù)100個成熟中性粒細胞（包括中性分葉核粒細胞和中性桿狀核粒細胞）。分別記錄其分級狀況，所有陽性反應(yīng)的細胞之和即為陽性率，將所有陽性反應(yīng)細胞均以“＋”級表達後，計算其總積分值。

例：某患者計數(shù)100個成熟中性粒細胞，其成果如下表：反應(yīng)程度個數(shù)（個）積分（分）－100＋2020＋＋4080＋＋＋2060＋＋＋＋1040100200陽性率為90%，積分值為200（4）參照值：成熟中性粒細胞堿性磷酸酶（NAP）的積分值為30～130。由于各試驗室的試驗條件不壹樣，正常值也有差異，應(yīng)建立本試驗室的正常值。這裏的正常值僅供參照。

（5）臨床意義

1）生理變化：①年齡變化：新生兒NAP活性增高，後來下降。小朋友期各年齡大體相似，成年期較小朋友期活性減低，老年期更低。②應(yīng)激狀態(tài)下的變化：緊張、恐驚、劇烈運動等NAP活性可增高。③月經(jīng)周期中的變化：經(jīng)前期增高，行經(jīng)後減少，經(jīng)後期恢復(fù)。④妊娠期的變化：妊娠2～3個月的NAP積分值輕度增高，後來逐月增高，分娩時達高峰，產(chǎn)後則恢復(fù)正常。

2）病理性變化：

①感染：細菌性感染時NAP積分值增高。在細菌性感染中球菌性感染較桿菌性感染為高；在球菌性感染中，急性較慢性為高。病毒性感染時，NAP積分值壹般無明顯變化。因此本染色法有時可協(xié)助鑒別細菌性感染和病毒性感染。

②血液?。郝粤＜毎籽〉腘AP積分值明顯減低，常為“0”，緩和時NAP積分值上升到正常。類白血病反應(yīng)時的NAP積分值明顯增高，中性桿狀核粒細胞的堿性磷酸酶活性增強，甚至中性晚幼粒細胞也呈陽性反應(yīng)。因此本法常用來鑒別慢粒和類白血病反應(yīng)及觀測慢粒療效的指標之壹。

急性粒細胞白血病時NAP積分值減低，急性淋巴細胞白血病時NAP積分值壹般增高，因此本法可作為鑒別急粒和急淋的措施之壹；急性單核細胞白血病時NAP積分值壹般減低，有時可正常；粒細胞白血病合并細菌性感染時NAP積分值可增高，但不如單純細菌性感染增高的明顯；再生障礙性貧血的NAP積分值增高，當病情好轉(zhuǎn)時，NAP積分值可下降，完全緩和時NAP活性可恢復(fù)到正常，因此本法對再障的診斷、療效觀測和估計病情均有壹定意義。

陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿的NAP積分值減低，因此本法可作為鑒別陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿和再生障礙性貧血的措施之壹；紅細胞增多癥的NAP積分值升高，而繼發(fā)性紅細胞增多癥的NAP積分值無明顯變化。因此本法可用來鑒別真性紅細胞增多癥和繼發(fā)性紅細胞增多癥；骨髓增生異常綜合征的NAP積分值減低。

③其他：紅白血病的NAP積分值減低，慢性淋巴細胞白血病、骨髓纖維化、原發(fā)性血小板增多癥和紅血病等疾病的NAP積分值可增高；NAP積分值減低，也可見于鐮形細胞性貧血、嚴重嗜酸粒細胞增多癥、家族性低磷酸酶血癥。

3）其他：應(yīng)用腎上腺皮質(zhì)激素、雌激素和ACTH後NAP積分值增高。

要點3：

酯酶染色

酯酶存在于不壹樣的白細胞中，根據(jù)不壹樣的底物顯示酶的活性，可將酯酶提成三種，包括萘酚-AS-D氯乙酸酯酶、α-乙酸萘酚酯酶和α-丁酸萘酚酯酶。萘酚-AS-D氯乙酸酯酶為粒系細胞所特有，又稱特異性酯酶染色。α-乙酸萘酚酯酶可存在于多種細胞，故又稱非特異性酯酶染色。α-丁酸萘酚酯酶重要存在于單核系細胞中，又稱單核細胞酯酶。三種酯酶染色對不壹樣細胞的識別和急性白血病的診斷與鑒別有壹定意義。

氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色（AS-D-NCE）

（1）原理

血細胞內(nèi)的氯乙酸AS-D萘酚酯酶將基質(zhì)液中的氯乙酸AS-D萘酚水解，產(chǎn)生萘酚AS-D，進而與基質(zhì)液中的堅牢藍GBC偶聯(lián)，形成不溶性紅色沉淀，定位于胞質(zhì)內(nèi)。屬于特異性酯酶染色。

（2）成果判斷

陽性成果為胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)紅色沉淀：①（－）胞質(zhì)無色。②（＋）胞質(zhì)呈淡紅色。③（＋＋）鮮紅色沉淀充斥胞質(zhì)。④（＋＋＋）深紅色沉淀充斥胞質(zhì)。

（3）正常血細胞的染色反應(yīng)

1）粒細胞系統(tǒng)：原粒細胞為陰性反應(yīng)或陽性反應(yīng)，自早幼粒細胞至成熟中性粒細胞均為陽性反應(yīng)，酶活性并不隨細胞的成熟而增強。嗜酸性粒細胞為陰性反應(yīng)或弱陽性反應(yīng)，嗜堿性粒細胞為陽性反應(yīng)。

2）其他血細胞單核細胞為陰性反應(yīng)，個別可呈弱陽性反應(yīng)。淋巴細胞、漿細胞、幼紅細胞和血小板均呈陰性反應(yīng)。

（4）臨床意義

鑒別急性白血病的類型。急性粒細胞白血病時，白血病性原始粒細胞可出現(xiàn)陽性反應(yīng)；急性單核細胞白血病及急性淋巴細胞白血病時，白血病細胞均呈陰性反應(yīng)；急性粒-單核細胞白血病時，部分白血病細胞可呈陽性反應(yīng)（原粒和早幼粒）。有些白血病細胞呈陰性反應(yīng)（原始單核和幼單核細胞）。

α-醋酸萘酚酯酶染色（α-NAE）

（1）原理

血細胞內(nèi)的α-醋酸萘酚酯酶（α-NAE）將基質(zhì)液中的α-醋酸萘酚水解，產(chǎn)生α-萘酚，萘酚再與堅牢藍B偶聯(lián)，形成不溶性灰黑色或棕黑色沉淀，定位于胞質(zhì)內(nèi)。屬于非特異性醋酸染色。

（2）成果判斷

染色陽性成果為胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黑色顆粒沉淀。

α-醋酸萘酚酯酶染色（α-NAE）模式圖

（3）正常血細胞的染色反應(yīng)

1）單核細胞系統(tǒng)：原始單核細胞為陰性反應(yīng)或弱陽性反應(yīng)；幼單核細胞和單核細胞為陽性反應(yīng)，這種反應(yīng)可被氯化鈉克制。

2）粒細胞系統(tǒng)：各期粒細胞為陰性反應(yīng)，有時少數(shù)粒細胞可呈弱陽性反應(yīng)，此反應(yīng)不被氟化鈉克制。

3）巨核細胞和血小板為陽性反應(yīng)。

4）其他血細胞：幼紅細胞和淋巴細胞壹般為陰性反應(yīng)，有時少數(shù)細胞也可是弱陽性反應(yīng)，此反應(yīng)不被氯化鈉克制；漿細胞為陰性反應(yīng)。

（4）臨床意義

1）協(xié)助鑒別急性白血病的類型：單核細胞白血病時，白血病原始單核細胞可呈陽性反應(yīng)，幼單核細胞和單核細胞大多呈陽性反應(yīng)，此反應(yīng)能被氟化鈉克制，克制率在50%以上；急性粒細胞白血病時，白血病原始粒細胞為陰性反應(yīng)，有時個別白血病原始粒細胞可呈陽性反應(yīng)，但此反應(yīng)不被氟化鈉克制。

急性淋巴細胞白血病時，白血病原始淋巴細胞為陰性反應(yīng)，有時原始淋巴細胞可出現(xiàn)陽性反應(yīng)，重要見于T細胞型急淋；急性粒-單核細胞白血病時，部分原始白血病細胞呈陽性反應(yīng)，并能被氟化鈉克制，這些白血病細胞也許是單核細胞系細胞，部分白血病細胞呈陰性反應(yīng)，也許是粒細胞系細胞。

2）紅血病和紅白血?。寒惓Ｓ准t細胞可呈陽性反應(yīng)。

3）巨幼細胞貧血：巨幼細胞也可呈陽性反應(yīng)。

醋酸AS-D萘酚酯酶染色（AS-D-NAE）和氟化鈉克制試驗

（1）原理

血細胞內(nèi)的醋酸AS-D萘酚酯酶與重氮鹽偶聯(lián)，形成不溶性藍色沉淀，定位于胞質(zhì)內(nèi)。氟化鈉克制試驗是以相似措施制備2份基質(zhì)液，其中壹份加入適量氯化鈉，另壹份不加氯化鈉作對照。將已固定的2張相似標本的涂片混入這2種不壹樣基質(zhì)液中，分別作醋酸AS-D萘酚酯酶染色。屬于非特異性酯酶染色。

用油鏡觀測計數(shù)100或200個被檢細胞，分別計算出克制前和克制後的陽性率和陽性積分，按下述公式計算出克制率。

克制率（%）＝（克制前陽性率－克制後陽性率或陽性積分）/克制前陽性率或陽性積分×100

所謂克制是指氟化鈉試驗的克制率不小于50%。

（2）成果判斷

染色陽性成果為胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黑色顆粒沉淀：①（－），無顆粒沉淀，為0分。②（±），顆粒少許、稀疏，為0.5分。③（＋），胞質(zhì)內(nèi)1/2區(qū)域出現(xiàn)顆粒沉淀，為1分。④（＋＋），胞質(zhì)內(nèi)3/4區(qū)域出現(xiàn)顆粒沉淀，為2分。⑤（＋＋＋），胞質(zhì)內(nèi)充斥顆粒沉淀，為3分。⑥（＋＋＋＋），胞質(zhì)內(nèi)充斥濃密的顆粒沉淀，為4分。

（3）正常血細胞的染色

1）粒細胞系統(tǒng)：原粒細胞為陰性反應(yīng)或陽性反應(yīng)，自早幼粒細胞至成熟中性粒細胞均為陽性反應(yīng)，壹般為（＋）～（＋＋），此反應(yīng)不被氟化鈉克制。

2）單核細胞系統(tǒng)：原始單核細胞為陰性反應(yīng)或陽性反應(yīng)，幼單核細胞和單核細胞均為陽性反應(yīng)，壹般為（＋＋）～（＋＋＋），此反應(yīng)能被氟化鈉克制。

3）淋巴細胞：淋巴細胞呈弱陽性反應(yīng)，此反應(yīng)不被氟化鈉克制。

4）紅細胞系統(tǒng)：初期幼紅細胞可呈陽性反應(yīng)，隨細胞的成熟陽性反應(yīng)程度逐漸減弱，此反應(yīng)不被氟化鈉克制。

5）巨核細胞和血小板：為陽性反應(yīng)。

（4）臨床意義

協(xié)助鑒別急性白血病的類型。急性粒細胞白血病時，白血病原始粒細胞可呈陽性反應(yīng)，此反應(yīng)不被氯化鈉克制。急性單核細胞白血病時，白血病原始單核細胞可呈陽性反應(yīng)，幼單核細胞和單核細胞為陽性反應(yīng)，此反應(yīng)被氯化鈉克制。急性粒-單核細胞白血病時，部分白血病細胞的陽性反應(yīng)可被氟化鈉克制，部分陽性反應(yīng)不被氯化鈉克制。

堿性α-丁酸萘酚酯酶染色（α-NBE）

（1）原理

血細胞內(nèi)的α-丁酸萘酚酯酶（α-NBE）在pH堿性的條件下水解基質(zhì)液中的α-丁酸萘酚，釋放出α-萘酚，後者與基質(zhì)液中的重氮鹽偶聯(lián)形成不溶性的有色沉淀，定位于細胞質(zhì)內(nèi)酶所在的部位。本試驗常用的重氮鹽為堅牢紫醬GBC，形成的有色沉淀為紅色。α-NBE重要存在于單核細胞中，其陽性產(chǎn)物能被氟化鈉克制，而其他細胞系列的陽性產(chǎn)物不能被氟化鈉克制。屬于單核細胞酯酶染色。

（2）成果判斷

陽性成果為胞質(zhì)中出現(xiàn)藍色顆粒。

（3）正常血細胞的染色反應(yīng)

1）粒細胞系統(tǒng)：各期粒細胞均呈陰性。

2）單核細胞系統(tǒng)：分化差的原單細胞呈陰性，分化好的原單細胞呈陽性，幼稚及成熟的單核細胞呈陽性，陽性反應(yīng)能被氟化鈉克制。

3）淋巴細胞系統(tǒng)：外周血的T淋巴細胞、非T非B淋巴細胞可呈陽性，B淋巴細胞呈陰性。

4）其他細胞：巨核細胞、幼紅細胞、漿細胞呈陰性或弱陽性；組織細胞也可呈陽性，但不被氟化鈉克制。

（4）臨床意義

與α-NAE（醋酸萘酚酯酶）染色的臨床意義相似，敏感性不如α-NAE，而特異性較α-NAE高，是急性白血病常用的細胞化學(xué)染色。

1）輔助鑒別急性白血病細胞類型：

①急性單核細胞白血?。簡魏讼导毎蠖鄶?shù)呈陽性，陽性反應(yīng)能被氟化鈉克制；

②急性粒細胞白血病：原粒細胞壹般呈陰性；

③急性早幼粒細胞白血病：早幼粒細胞常呈陰性；

④急性粒單細胞白血病：部分白血病細胞陽性，部分白血病細胞陰性；

⑤急性淋巴細胞白血?。涸技坝字闪馨图毎及愠赎幮?。

2）急性單核細胞白血病有時須與惡性組織細胞病相鑒別，異常組織細胞也可呈陽性，但陽性反應(yīng)不能被氟化鈉克制。

酸性磷酸酶染色（ACP）

（1）原理

血細胞內(nèi)的酸性磷酸酶在酸性條件下，將基質(zhì)中的磷酸萘酚AS-BI水解，釋放萘酚AS-BI，萘酚AS-BI與六偶氮付品紅偶聯(lián)，形成不溶性紅色沉淀，定位于胞質(zhì)內(nèi)，假如血細胞的胞質(zhì)呈紅色為陽性反應(yīng)，無紅色為陰性反應(yīng)。

抗酒石酸酸性磷酸酶染色是用相似措施制備2份基質(zhì)液，壹份再加入適量L-酒石酸，另壹份不加L-酒石酸。取兩張相似標本的涂片，分別用這2種不壹樣基質(zhì)液作酸性磷酸酶染色。假如血細胞內(nèi)的酸性磷酸酶耐L-酒石酸克制的都呈陽性反應(yīng)。假如不耐L-酒石酸克制的，不加L-酒石酸的呈陽性反應(yīng)，而加L-酒石酸的呈陰性反應(yīng)。

（2）成果判斷

陽性成果為胞質(zhì)中出現(xiàn)鮮紅色顆粒沉淀：

①（－），胞質(zhì)無色。

②（＋），胞質(zhì)出現(xiàn)淡紅色顆粒。

③（＋＋），胞質(zhì)充斥鮮紅色顆粒。

④（＋＋＋），胞質(zhì)充斥深紅色顆粒。

（3）正常血細胞的染色反應(yīng)

粒細胞、單核細胞、淋巴細胞、巨核細胞、血小板、漿細胞、巨噬細胞呈陽性。

（4）臨床意義

1）協(xié)助鑒別戈謝細胞和尼曼-匹克細胞，前者酸性磷酸酶染色為陽性反應(yīng)，後者為陰性。

2）協(xié)助診斷多毛細胞白血病，多毛細胞白血病時多毛細胞的酸性磷酸酶染色為陽性反應(yīng)，此酶耐L-酒石酸的克制作用。淋巴肉瘤細胞和慢性淋巴細胞白血病的淋巴細胞，酸性磷酸酶染色也呈陽性反應(yīng)，但此酸可被L-酒石酸克制。

3）協(xié)助鑒別T淋巴細胞和B淋巴細胞，T淋巴細胞呈陽性反應(yīng)，而B淋巴細胞為陰性反應(yīng)。

要點4：

鐵染色

（1）原理

細胞外含鐵血黃素和幼紅細胞內(nèi)的鐵與酸性亞鐵氰化鉀發(fā)生普魯士藍反應(yīng)，形成藍色的亞鐵氰化鐵沉淀，定位于含鐵的部位。

（2）正常血細胞的染色反應(yīng)

1）細胞外鐵：觀測骨髓小粒中的鐵，呈彌散藍色、顆粒狀、小珠狀或塊狀。根據(jù)骨髓小粒中鐵的存在方式及量將細胞外鐵分為（－）、（＋）、（＋＋）、（＋＋＋）、（＋＋＋＋）。

細胞外鐵染色真實圖

2）細胞內(nèi)鐵：觀測100個中幼紅細胞和晚幼紅細胞計算出鐵粒幼紅細胞的比例。鐵粒幼紅細胞是指胞質(zhì)中出現(xiàn)藍色鐵顆粒的幼紅細胞，根據(jù)藍色鐵顆粒多少、粗細分為Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型及環(huán)形鐵粒幼紅細胞。環(huán)形鐵粒幼紅細胞是指幼紅細胞胞質(zhì)內(nèi)藍色在5顆以上，圍繞核周1/3以上者。成熟紅細胞中出現(xiàn)鐵顆粒稱為鐵粒紅細胞。

環(huán)形鐵粒幼細胞（細胞內(nèi)鐵染色）

（3）參照值

1）細胞外鐵：（＋）～（＋＋），大多為（＋＋）。

2）鐵粒幼細胞：12%～44%

由于各試驗室的試驗條件不壹樣，正常值也有差異，應(yīng)建立本試驗室的正常值。

（4）臨床意義

1）缺鐵性貧血時，骨髓細胞外鐵明顯減低，甚至消失；鐵粒幼細胞的百分率減低。經(jīng)有效鐵劑治療後，細胞外鐵增多；因此鐵染色可作為診斷缺鐵性貧血及指導(dǎo)鐵劑治療的重要措施。

2）鐵粒幼細胞貧血時，出現(xiàn)較多環(huán)鐵粒幼細胞，鐵粒幼細胞也增多，其所含鐵顆粒的數(shù)目也較多，顆粒也粗大，有時還可見鐵粒紅細胞。因此本染色可作為診斷鐵粒幼細胞性貧血的重要措施。

3）骨髓增生異常綜合征時鐵粒幼細胞的比例可增高，其所含鐵顆粒的數(shù)目可增多，環(huán)鐵粒幼細胞常見。在鐵粒幼細胞難治性貧血，環(huán)鐵粒幼細胞在15%以上。

4）非缺鐵性貧血如溶血性貧血、營養(yǎng)性巨幼細胞貧血、再生障礙性貧血和白血病，細胞外鐵正?；蛟龈?，鐵粒幼細胞正?；蛟龈摺?/p>

5）感染、肝硬化、慢性腎炎及尿毒癥、血色病及多次輸血後，骨髓細胞外鐵增長。

三種常用細胞化學(xué)染色在鑒別急性白血病類型中應(yīng)用

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化學(xué)染色急粒白血病急單白血病急淋白血病

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POX分化差的原始細胞（－）～（＋）（－）

（－）～（＋）

分化好的原始細胞

（＋）～（＋＋＋）

PAS（－）或（＋）（－）或（＋）彌漫性（＋）成塊或顆

彌漫性淡紅色淡紅色或顆粒狀粒狀

α-NAE（－）-（＋）（＋）其活性（－）

氟化鈉克制不敏感被氟化鈉克制

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過氧化酶染色判斷為4＋陽性的原則是

A.顆粒粗大、密集、分布較廣，占胞質(zhì)的1/2～2/3

B.顆粒較粗、局灶分布

C.顆粒成團塊狀，充斥胞質(zhì)，并覆蓋胞核

D.顆粒細小、彌散分布

E.無顆粒[答疑編號]

【對的答案】C

【答案解析】POX染色原理是血細胞內(nèi)的過氧化酶分解H2O2，釋出初生態(tài)氧，使無色聯(lián)苯胺氧化成藍色聯(lián)苯胺，後者深入變成棕黑色化合物，從容于胞質(zhì)內(nèi)。成果判斷：陽性成果為胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黑色顆粒。①（壹），無顆粒。②（±），顆粒細小、彌散分布。③（＋），顆粒較粗、局灶分布。④（＋＋），顆粒粗大、密集、分布較廣，占胞質(zhì)的1/2～2/3。⑤（＋＋＋），顆粒粗大、成團塊，幾乎充斥胞質(zhì)。⑥（＋＋＋＋），顆粒成團塊狀，充斥胞質(zhì)，并覆蓋胞核。

過碘酸-雪夫反應(yīng)化學(xué)染色中復(fù)染所用試劑是

A.中性紅

B.甲基綠

C.蘇木精

D.剛果紅

E.沙黃[答疑編號]

【對的答案】B

【答案解析】細胞化學(xué)染色過程