體外診斷試劑-C反應(yīng)蛋白(CRP)測定試劑盒(膠乳增強免疫比濁法)臨床評價報告-血清

第⑵與已上市產(chǎn)品進(jìn)行比較研究：通過選擇目前臨床普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的產(chǎn)品作為比對試劑對********生物科技有限公司生產(chǎn)的C反應(yīng)蛋白測定試劑盒（膠乳增強免疫比濁法）進(jìn)行評價，以判斷其診斷檢測能力與已上市的檢測試劑盒無差異。1.4.2試驗設(shè)計及試驗方法選擇樣本量及樣本量確定的依據(jù)免于進(jìn)行臨床試驗的體外診斷試劑臨床評價資料基本要求可選擇總樣本量不少于100例并分別采用待評價試劑和對比試劑/參考方法進(jìn)行單次測定的方式。本臨床研究為方法學(xué)比對設(shè)計，采用相關(guān)系數(shù)檢驗(連續(xù)變量)計算樣本量，根據(jù)美國國家臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)化委員會制定的CLSIEP9-A2標(biāo)準(zhǔn)，考核試劑與參比試劑的檢測結(jié)果的相關(guān)系數(shù)不得低于0.975，預(yù)計本試驗的相關(guān)系數(shù)在0.985以上，故設(shè)定參數(shù)：α=0.05，s=1(單側(cè))，β=0.2，ρ0=0.975，ρ1=0.985，根據(jù)相關(guān)系數(shù)檢驗(連續(xù)變量)樣本量估算公式[3],計算樣本量，具體如下：根據(jù)以上公式計算得出樣本量為96例，結(jié)合法規(guī)要求及統(tǒng)計學(xué)要求，考慮5%的脫落剔除率，本次臨床試驗最終樣本量確定為不小于105例，若試驗過程中有脫落樣本或所測量數(shù)據(jù)不滿足分析要求，則需補充樣本量，直到滿足統(tǒng)計學(xué)或法規(guī)要求。樣本選擇依據(jù)本次臨床試驗旨在考查C反應(yīng)蛋白測定試劑盒（膠乳增強免疫比濁法）檢測性能，評價差異。內(nèi)。應(yīng)選擇需要評估C反應(yīng)蛋白濃度疾病患者和正常健康人群的樣本。另外，在臨床試驗中選擇部分含干擾物質(zhì)的樣本進(jìn)行對比研究，臨床角度驗證試劑的特異性。入選標(biāo)準(zhǔn)需滿足以下所有條件方可入選：選取臨床上符合上述特征的病例作為入選樣本，性別、年齡不限。排除標(biāo)準(zhǔn)樣本符合以下任意一條，則不能入選：⑴ 樣本收集時間或病例信息不明確；⑵ 試驗操作中因失誤導(dǎo)致樣本量不足檢測者；⑶ 研究者認(rèn)為該樣本不滿足檢測要求。剔除標(biāo)準(zhǔn)⑴ 測定試驗過程的樣本；⑵ 被測物質(zhì)濃度超過試劑的線性檢測范圍；⑶ 雙管平行測定結(jié)果只有考核試劑（或參比試劑）的檢測數(shù)據(jù)。樣本要求空腹不溶血血清或血漿，血漿可用EDTA、肝素、檸檬酸鈉抗凝。脂血樣本、含類風(fēng)濕因子和人抗鼠IgG抗體的樣本可使結(jié)果假性升高。樣本在2～8℃可穩(wěn)定7天，時間過長須置-20℃保存?？己嗽噭┱f明產(chǎn)品名稱：C反應(yīng)蛋白測定試劑盒（膠乳增強免疫比濁法）包裝規(guī)格：R1：2×60ml，R2：2×15ml。批號：180160有效期：2019-01-29生產(chǎn)商：********生物科技有限公司生產(chǎn)地址：********生產(chǎn)許可證號：********檢測報告編號：保存條件及有效期：未開封試劑于2～8℃避光貯存可穩(wěn)定12個月，開瓶后2～8℃避光貯存可穩(wěn)定30天。校準(zhǔn)品未開瓶在2～8℃無腐蝕性氣體中避光儲存，若無污染，可穩(wěn)定12個月，校準(zhǔn)品復(fù)溶后在2～8℃條件下可穩(wěn)定14天。適用儀器：奧林巴斯、貝克曼、日立、東芝、朕江全自動生化分析儀。參比試劑說明產(chǎn)品名稱：C反應(yīng)蛋白測定試劑盒（膠乳增強免疫比濁法）包裝規(guī)格：試劑：150mL（R1：2×60mL+R2：2×15mL）批號：20171009有效期：2018-10-08生產(chǎn)商：*****生物技術(shù)有限公司地址：*****產(chǎn)品注冊證號：*****保存條件及有效期：未開封試劑于2~8℃避光貯存可穩(wěn)定12個月，開瓶后2~8℃避光貯存可穩(wěn)定30天。

適用儀器：適用于奧林帕斯、貝克曼、日立、東芝、朕江生化分析儀。

對比試劑確立依據(jù)：********生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的C反應(yīng)蛋白測定試劑盒（膠乳增強免疫比濁法）與考核試劑方法學(xué)、檢測物質(zhì)、臨床預(yù)期用途、主要性能指標(biāo)、推薦的陽性判斷值或參考區(qū)間等方面基本一致，且參比試劑的臨床應(yīng)用廣泛，產(chǎn)品質(zhì)量好。因此，選擇該公司生產(chǎn)的試劑作為參比試劑。質(zhì)量控制方法果復(fù)核質(zhì)控要求，判定本次試驗有效。0數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析⑴離群點檢查表1方法間離群點檢查樣表1X1Y1D1D1'2X2Y2D2D2'3X3Y3D3D3'4X4Y4D4D4'……………平均值//EE'Di=|Yi-Xi|………...………….(1)Di'=|Yi-Xi|/Xi……………...……….………...(2)…………….…………………..…(3)…………….…………………..…(4)檢測界限為4E與4E'，把每一個Di和Di'分別與4E和4E'比較，標(biāo)記超出4E和4E'的點。任何一點（Xi,Yi）如同時未通過上述兩種檢測方法，則判斷為離群點。如果出現(xiàn)一個以上的離群點，但它們并未超出醫(yī)學(xué)上有臨床意義的界限，則可保留并使用這些數(shù)據(jù)。如果離群點超出醫(yī)學(xué)上有臨床意義的界限，應(yīng)刪除該點，但每組數(shù)據(jù)中被刪除的離群值不能超過2.5%。如果超過2.5%，則應(yīng)調(diào)查是否存在干擾、人為錯誤或儀器故障。如果有幾個分析物同時在同一儀器設(shè)備上評價，檢查出現(xiàn)明顯偏差的樣本的其它分析物的結(jié)果，同時也應(yīng)檢查同一分析批的質(zhì)量控制結(jié)果。⑵考核試劑與參比試劑定量結(jié)果評價1)回歸分析以考核試劑檢測結(jié)果為Y軸，參比試劑檢測結(jié)果為X軸作散點圖。采用最Y=a+bX。Y=a+bX…………(5)…………(6)…………………(7)N為樣本數(shù)量，i為樣本編號，其中：……………….……...…(8)………….………..…(9)2) 相關(guān)分析計算Pearson相關(guān)系數(shù)：………………..……..…(10)N為樣本數(shù)量，i為樣本編號，與同公式（8）、（9）。3) Bland-Altman圖以同一樣本考核試劑與參比試劑檢測濃度的均值為Y1.5臨床試驗結(jié)果及分析1.5.1入選與剔除********醫(yī)院共檢測124例受試者樣本，按方案剔除標(biāo)準(zhǔn)共剔除樣本30例為線性范圍外標(biāo)本，3例為離群值，剔除率為2.42%，最終納入分析121例。詳情見表2、表3。表2入選與剔除概況入選樣本（例）剔除樣本（例）剔除率符合樣本（例）12432.42%121表3剔除樣本詳情樣本編號性別年齡臨床診斷考核試劑（mg/L）參比試劑（mg/L）剔除原因1803050441男20健康查體0.340.46離群值1803050062男44健康查體1.872.37離群值1803191036男80肺部感染16.7014.32離群值1.5.2基線情況********醫(yī)院最終納入分析121例，其中男性59例，女性62例，平均年齡34.69±21.31，包括9例新生兒受試者。詳情見表4。表4基線概況（性別、年齡、臨床診斷）指標(biāo)********醫(yī)院性別（例）年齡（歲）1.5.3離群值根據(jù)離群值檢查方法，對********醫(yī)院納入的124例受試者樣本（不包括0例線性范圍外樣本）檢測濃度進(jìn)行方法間離群值檢查，共3例（編號1803050441,1803050062，1803191036）被判定為離群值，詳見表5。剔除此例離群值后再進(jìn)行離群值檢查，未發(fā)現(xiàn)離群值。表5離群值詳情樣本編號性別年齡臨床診斷考核試劑（mg/L）參比試劑（mg/L）是否剔除1803050441男20健康查體0.340.46剔除1803050062男44健康查體1.872.37剔除1803191036男80肺部感染16.7014.32剔除注：4E=2.2020，4E’=0.2497。1.5.4線性回歸與相關(guān)根據(jù)回歸分析和相關(guān)分析計算公式，計算********醫(yī)院數(shù)據(jù)Pearson相關(guān)系數(shù)r=0.9996，如圖1。進(jìn)行回歸分析，計算得截距（a）：0.0082（-0.1708,0.1872），斜率（b）：1.0025（0.9972,1.0079），回歸方程為：Y=0.0082+1.0025X，決定系數(shù)r2=0.9991。Pearson相關(guān)系數(shù)接近1，說明兩種試劑的相關(guān)關(guān)系密切?；貧w方程的截距（a）的95%CI包括0，斜率（b）95%CI包括1，說明兩種試劑的一致性比較好。圖1考核試劑與參比試劑回歸圖1.5.5Bland-Altman圖以考核試劑與參比試劑檢測濃度的差值為Y軸，均值為X軸繪制Bland-Altman散點圖，兩種試劑檢測濃度差值為-0.0534±0.8428mg/L（均值±標(biāo)準(zhǔn)2所示。兩種試劑檢測濃度差值的均值±1.96SD范圍在-1.7390mg/L到1.6322mg/L之間，超出置信區(qū)間的百分比為：0.00%。兩種試劑檢測濃度差值的變化呈檢測濃度均值越大差值越大的趨勢。圖2考核試劑與參比試劑差值的Bland-Altman圖以考核試劑與參比試劑檢測濃度的差值百分比為Y軸，均值為X軸繪制Bland-Altman散點圖，兩種試劑檢測濃度差值百分比為-0.2060±7.5190%（均值±3所示。從圖中可看出，兩種試劑檢測濃度差值百分比的均值±1.96SD范圍在-15.2441%到14.8321%之間，超出置信區(qū)間的百分比為：0.00%。兩種試劑檢測濃度差值百分比基本在±SD之間均勻分布。圖3考核試劑與參比試劑差值百分比的Bland-Altman圖1.5.6符合率及一致性分析符合率分析********醫(yī)院共納入血清樣本121例，考核試劑與參比試劑均檢測均在參考范圍外的標(biāo)本44例，均在參考范圍內(nèi)的標(biāo)本76例，參比試劑檢測在參考范圍外且考核試劑在參考范圍內(nèi)的標(biāo)本0例，參比試劑檢測在參考范圍內(nèi)且考核試劑在參考范圍外的標(biāo)本1例，詳見表6。表6定性檢測結(jié)果配對四格表考核試劑參比試劑合計參考范圍外參考范圍內(nèi)參考范圍外44（a）1（b）45參考范圍內(nèi)0(c）76（d）76合計4477121參考范圍外標(biāo)本符合率按公式a/(a+c)×100%計算；參考范圍內(nèi)標(biāo)本符合率按公式d/(b+d)×100%計算；總符合率按公式(a+d)/(a+b+c+d)×100%計算；符合率置信區(qū)間的計算公式為：p±1.96[p(1-p)/n]1/2(其中p符合率，n為樣本量，若p＞0.9，則采用校正的Wilsonscore方法。對考核試劑和參比試劑的檢測結(jié)果進(jìn)行Kappa值檢驗，當(dāng)k＞0.8時，考核試劑與檢測試劑的檢測結(jié)果高度一致。經(jīng)計算，考核試劑定性檢測結(jié)果參考范圍外標(biāo)本符合率為100.00%（96.34%,100.00%），參考范圍內(nèi)標(biāo)本符合率為98.70%（94.11%,99.72%），總符合率為99.17%（94.87%,99.97%）。進(jìn)行Kappa一致性分析，Kappa值k=0.9822。表7考核試劑檢測符合率及95%置信區(qū)間100.0%（96.3%,100.0%）98.70%（94.11%,99.72%）99.17%（94.87%,99.97%）注：符合率均超過90%，置信區(qū)間采用校正的Wilsonscore方法不一致樣本分析********醫(yī)院共1例樣本考核試劑與參比試劑檢測結(jié)果不一致，本次試驗，不一致樣本比例很低，詳見表8，且在臨界值附近，誤差在產(chǎn)品技術(shù)要求規(guī)定的范圍內(nèi)，可以判定為試驗允許誤差范圍內(nèi)的結(jié)果不一致，不再用第三方試劑復(fù)核。表定性檢測結(jié)果不一致樣本詳情樣本編號性別年齡臨床診斷考核試劑（mg/L）考核試劑定性結(jié)果參比試劑（mg/L）參比試劑定性結(jié)果1803210843女87肺部感染8.26參考區(qū)間外7.88參考區(qū)間內(nèi)1.5.7含干擾物質(zhì)樣本檢測為綜合、全面的評價考核試劑的檢測性能，樣本中應(yīng)包括一定數(shù)量的含干擾物質(zhì)的樣本。檢測結(jié)果如表9所示。試驗結(jié)果說明，考核試劑和參比試劑檢測結(jié)果無差異。表明考核試劑和參比試劑的抗干擾性能有較好的一致性。表9含干擾物質(zhì)樣本詳情樣本編號性別年齡臨床診斷干擾物考核試劑（mg/L）參比試劑（mg/L）1803200260女0新生兒黃疸膽紅素1.021.081803140593女0新生兒黃疸膽紅素0.780.791803170017男0新生兒黃疸膽紅素1.161.231803060582男0新生兒黃疸膽紅素0.210.201803040126男0新生兒黃疸膽紅素0.760.851.6討論和結(jié)論討論：********醫(yī)院共檢測124例受試者樣本，按方案剔除標(biāo)準(zhǔn)共剔除樣本3例，其中0例為線性范圍外標(biāo)本，3例為離群值標(biāo)本，剔除率為2.42%，最終納入分析121例，其中男性59例，女性62例，平均年齡34.69±21.31歲（包括9本次臨床試驗結(jié)果的Pearson相關(guān)系數(shù)接近1，說明兩種試劑的相關(guān)關(guān)系越密切。回歸方程的截距（a）的95%CI包括0，斜率（b）接近1，說明兩種試劑均在允許偏差范圍內(nèi)?？己嗽噭┡c參比試劑檢測濃度的差值Bland-Altman散點圖顯示：兩種試劑-0.0534±0.8428mg/L值±1.96SD范圍在-1.7390mg/L到1.6322mg/L超出置信區(qū)間的百分比為：0.00%。差值百分比Bland-Altman散點圖顯示：兩種試劑檢測濃度差值百分比為-0.2060±7.5190%（均值±標(biāo)準(zhǔn)差），兩種試劑檢測濃度差值百分比的均值±1.96SD范圍在-15.2441%到14.8321%之間。超出置信區(qū)間的百分比為：0.00%。經(jīng)計算，考核試劑定性檢測結(jié)果參考范圍外標(biāo)本符合率為100.00%（96.34%,100.00%），參考范圍內(nèi)標(biāo)本符合率為98.70%（94.