體外診斷試劑-C反應(yīng)蛋白(CRP)測(cè)定試劑盒(膠乳增強(qiáng)免疫比濁法)臨床評(píng)價(jià)報(bào)告-血清

第⑵與已上市產(chǎn)品進(jìn)行比較研究：通過(guò)選擇目前臨床普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的產(chǎn)品作為比對(duì)試劑對(duì)********生物科技有限公司生產(chǎn)的C反應(yīng)蛋白測(cè)定試劑盒（膠乳增強(qiáng)免疫比濁法）進(jìn)行評(píng)價(jià)，以判斷其診斷檢測(cè)能力與已上市的檢測(cè)試劑盒無(wú)差異。1.4.2試驗(yàn)設(shè)計(jì)及試驗(yàn)方法選擇樣本量及樣本量確定的依據(jù)免于進(jìn)行臨床試驗(yàn)的體外診斷試劑臨床評(píng)價(jià)資料基本要求可選擇總樣本量不少于100例并分別采用待評(píng)價(jià)試劑和對(duì)比試劑/參考方法進(jìn)行單次測(cè)定的方式。本臨床研究為方法學(xué)比對(duì)設(shè)計(jì)，采用相關(guān)系數(shù)檢驗(yàn)(連續(xù)變量)計(jì)算樣本量，根據(jù)美國(guó)國(guó)家臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)制定的CLSIEP9-A2標(biāo)準(zhǔn)，考核試劑與參比試劑的檢測(cè)結(jié)果的相關(guān)系數(shù)不得低于0.975，預(yù)計(jì)本試驗(yàn)的相關(guān)系數(shù)在0.985以上，故設(shè)定參數(shù)：α=0.05，s=1(單側(cè))，β=0.2，ρ0=0.975，ρ1=0.985，根據(jù)相關(guān)系數(shù)檢驗(yàn)(連續(xù)變量)樣本量估算公式[3],計(jì)算樣本量，具體如下：根據(jù)以上公式計(jì)算得出樣本量為96例，結(jié)合法規(guī)要求及統(tǒng)計(jì)學(xué)要求，考慮5%的脫落剔除率，本次臨床試驗(yàn)最終樣本量確定為不小于105例，若試驗(yàn)過(guò)程中有脫落樣本或所測(cè)量數(shù)據(jù)不滿(mǎn)足分析要求，則需補(bǔ)充樣本量，直到滿(mǎn)足統(tǒng)計(jì)學(xué)或法規(guī)要求。樣本選擇依據(jù)本次臨床試驗(yàn)旨在考查C反應(yīng)蛋白測(cè)定試劑盒（膠乳增強(qiáng)免疫比濁法）檢測(cè)性能，評(píng)價(jià)差異。內(nèi)。應(yīng)選擇需要評(píng)估C反應(yīng)蛋白濃度疾病患者和正常健康人群的樣本。另外，在臨床試驗(yàn)中選擇部分含干擾物質(zhì)的樣本進(jìn)行對(duì)比研究，臨床角度驗(yàn)證試劑的特異性。入選標(biāo)準(zhǔn)需滿(mǎn)足以下所有條件方可入選：選取臨床上符合上述特征的病例作為入選樣本，性別、年齡不限。排除標(biāo)準(zhǔn)樣本符合以下任意一條，則不能入選：⑴ 樣本收集時(shí)間或病例信息不明確；⑵ 試驗(yàn)操作中因失誤導(dǎo)致樣本量不足檢測(cè)者；⑶ 研究者認(rèn)為該樣本不滿(mǎn)足檢測(cè)要求。剔除標(biāo)準(zhǔn)⑴ 測(cè)定試驗(yàn)過(guò)程的樣本；⑵ 被測(cè)物質(zhì)濃度超過(guò)試劑的線(xiàn)性檢測(cè)范圍；⑶ 雙管平行測(cè)定結(jié)果只有考核試劑（或參比試劑）的檢測(cè)數(shù)據(jù)。樣本要求空腹不溶血血清或血漿，血漿可用EDTA、肝素、檸檬酸鈉抗凝。脂血樣本、含類(lèi)風(fēng)濕因子和人抗鼠IgG抗體的樣本可使結(jié)果假性升高。樣本在2～8℃可穩(wěn)定7天，時(shí)間過(guò)長(zhǎng)須置-20℃保存?？己嗽噭┱f(shuō)明產(chǎn)品名稱(chēng)：C反應(yīng)蛋白測(cè)定試劑盒（膠乳增強(qiáng)免疫比濁法）包裝規(guī)格：R1：2×60ml，R2：2×15ml。批號(hào)：180160有效期：2019-01-29生產(chǎn)商：********生物科技有限公司生產(chǎn)地址：********生產(chǎn)許可證號(hào)：********檢測(cè)報(bào)告編號(hào)：保存條件及有效期：未開(kāi)封試劑于2～8℃避光貯存可穩(wěn)定12個(gè)月，開(kāi)瓶后2～8℃避光貯存可穩(wěn)定30天。校準(zhǔn)品未開(kāi)瓶在2～8℃無(wú)腐蝕性氣體中避光儲(chǔ)存，若無(wú)污染，可穩(wěn)定12個(gè)月，校準(zhǔn)品復(fù)溶后在2～8℃條件下可穩(wěn)定14天。適用儀器：奧林巴斯、貝克曼、日立、東芝、朕江全自動(dòng)生化分析儀。參比試劑說(shuō)明產(chǎn)品名稱(chēng)：C反應(yīng)蛋白測(cè)定試劑盒（膠乳增強(qiáng)免疫比濁法）包裝規(guī)格：試劑：150mL（R1：2×60mL+R2：2×15mL）批號(hào)：20171009有效期：2018-10-08生產(chǎn)商：*****生物技術(shù)有限公司地址：*****產(chǎn)品注冊(cè)證號(hào)：*****保存條件及有效期：未開(kāi)封試劑于2~8℃避光貯存可穩(wěn)定12個(gè)月，開(kāi)瓶后2~8℃避光貯存可穩(wěn)定30天。

適用儀器：適用于奧林帕斯、貝克曼、日立、東芝、朕江生化分析儀。

對(duì)比試劑確立依據(jù)：********生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的C反應(yīng)蛋白測(cè)定試劑盒（膠乳增強(qiáng)免疫比濁法）與考核試劑方法學(xué)、檢測(cè)物質(zhì)、臨床預(yù)期用途、主要性能指標(biāo)、推薦的陽(yáng)性判斷值或參考區(qū)間等方面基本一致，且參比試劑的臨床應(yīng)用廣泛，產(chǎn)品質(zhì)量好。因此，選擇該公司生產(chǎn)的試劑作為參比試劑。質(zhì)量控制方法果復(fù)核質(zhì)控要求，判定本次試驗(yàn)有效。0數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析⑴離群點(diǎn)檢查表1方法間離群點(diǎn)檢查樣表1X1Y1D1D1'2X2Y2D2D2'3X3Y3D3D3'4X4Y4D4D4'……………平均值//EE'Di=|Yi-Xi|………...………….(1)Di'=|Yi-Xi|/Xi……………...……….………...(2)…………….…………………..…(3)…………….…………………..…(4)檢測(cè)界限為4E與4E'，把每一個(gè)Di和Di'分別與4E和4E'比較，標(biāo)記超出4E和4E'的點(diǎn)。任何一點(diǎn)（Xi,Yi）如同時(shí)未通過(guò)上述兩種檢測(cè)方法，則判斷為離群點(diǎn)。如果出現(xiàn)一個(gè)以上的離群點(diǎn)，但它們并未超出醫(yī)學(xué)上有臨床意義的界限，則可保留并使用這些數(shù)據(jù)。如果離群點(diǎn)超出醫(yī)學(xué)上有臨床意義的界限，應(yīng)刪除該點(diǎn)，但每組數(shù)據(jù)中被刪除的離群值不能超過(guò)2.5%。如果超過(guò)2.5%，則應(yīng)調(diào)查是否存在干擾、人為錯(cuò)誤或儀器故障。如果有幾個(gè)分析物同時(shí)在同一儀器設(shè)備上評(píng)價(jià)，檢查出現(xiàn)明顯偏差的樣本的其它分析物的結(jié)果，同時(shí)也應(yīng)檢查同一分析批的質(zhì)量控制結(jié)果。⑵考核試劑與參比試劑定量結(jié)果評(píng)價(jià)1)回歸分析以考核試劑檢測(cè)結(jié)果為Y軸，參比試劑檢測(cè)結(jié)果為X軸作散點(diǎn)圖。采用最Y=a+bX。Y=a+bX…………(5)…………(6)…………………(7)N為樣本數(shù)量，i為樣本編號(hào)，其中：……………….……...…(8)………….………..…(9)2) 相關(guān)分析計(jì)算Pearson相關(guān)系數(shù)：………………..……..…(10)N為樣本數(shù)量，i為樣本編號(hào)，與同公式（8）、（9）。3) Bland-Altman圖以同一樣本考核試劑與參比試劑檢測(cè)濃度的均值為Y1.5臨床試驗(yàn)結(jié)果及分析1.5.1入選與剔除********醫(yī)院共檢測(cè)124例受試者樣本，按方案剔除標(biāo)準(zhǔn)共剔除樣本30例為線(xiàn)性范圍外標(biāo)本，3例為離群值，剔除率為2.42%，最終納入分析121例。詳情見(jiàn)表2、表3。表2入選與剔除概況入選樣本（例）剔除樣本（例）剔除率符合樣本（例）12432.42%121表3剔除樣本詳情樣本編號(hào)性別年齡臨床診斷考核試劑（mg/L）參比試劑（mg/L）剔除原因1803050441男20健康查體0.340.46離群值1803050062男44健康查體1.872.37離群值1803191036男80肺部感染16.7014.32離群值1.5.2基線(xiàn)情況********醫(yī)院最終納入分析121例，其中男性59例，女性62例，平均年齡34.69±21.31，包括9例新生兒受試者。詳情見(jiàn)表4。表4基線(xiàn)概況（性別、年齡、臨床診斷）指標(biāo)********醫(yī)院性別（例）年齡（歲）1.5.3離群值根據(jù)離群值檢查方法，對(duì)********醫(yī)院納入的124例受試者樣本（不包括0例線(xiàn)性范圍外樣本）檢測(cè)濃度進(jìn)行方法間離群值檢查，共3例（編號(hào)1803050441,1803050062，1803191036）被判定為離群值，詳見(jiàn)表5。剔除此例離群值后再進(jìn)行離群值檢查，未發(fā)現(xiàn)離群值。表5離群值詳情樣本編號(hào)性別年齡臨床診斷考核試劑（mg/L）參比試劑（mg/L）是否剔除1803050441男20健康查體0.340.46剔除1803050062男44健康查體1.872.37剔除1803191036男80肺部感染16.7014.32剔除注：4E=2.2020，4E’=0.2497。1.5.4線(xiàn)性回歸與相關(guān)根據(jù)回歸分析和相關(guān)分析計(jì)算公式，計(jì)算********醫(yī)院數(shù)據(jù)Pearson相關(guān)系數(shù)r=0.9996，如圖1。進(jìn)行回歸分析，計(jì)算得截距（a）：0.0082（-0.1708,0.1872），斜率（b）：1.0025（0.9972,1.0079），回歸方程為：Y=0.0082+1.0025X，決定系數(shù)r2=0.9991。Pearson相關(guān)系數(shù)接近1，說(shuō)明兩種試劑的相關(guān)關(guān)系密切?；貧w方程的截距（a）的95%CI包括0，斜率（b）95%CI包括1，說(shuō)明兩種試劑的一致性比較好。圖1考核試劑與參比試劑回歸圖1.5.5Bland-Altman圖以考核試劑與參比試劑檢測(cè)濃度的差值為Y軸，均值為X軸繪制Bland-Altman散點(diǎn)圖，兩種試劑檢測(cè)濃度差值為-0.0534±0.8428mg/L（均值±標(biāo)準(zhǔn)2所示。兩種試劑檢測(cè)濃度差值的均值±1.96SD范圍在-1.7390mg/L到1.6322mg/L之間，超出置信區(qū)間的百分比為：0.00%。兩種試劑檢測(cè)濃度差值的變化呈檢測(cè)濃度均值越大差值越大的趨勢(shì)。圖2考核試劑與參比試劑差值的Bland-Altman圖以考核試劑與參比試劑檢測(cè)濃度的差值百分比為Y軸，均值為X軸繪制Bland-Altman散點(diǎn)圖，兩種試劑檢測(cè)濃度差值百分比為-0.2060±7.5190%（均值±3所示。從圖中可看出，兩種試劑檢測(cè)濃度差值百分比的均值±1.96SD范圍在-15.2441%到14.8321%之間，超出置信區(qū)間的百分比為：0.00%。兩種試劑檢測(cè)濃度差值百分比基本在±SD之間均勻分布。圖3考核試劑與參比試劑差值百分比的Bland-Altman圖1.5.6符合率及一致性分析符合率分析********醫(yī)院共納入血清樣本121例，考核試劑與參比試劑均檢測(cè)均在參考范圍外的標(biāo)本44例，均在參考范圍內(nèi)的標(biāo)本76例，參比試劑檢測(cè)在參考范圍外且考核試劑在參考范圍內(nèi)的標(biāo)本0例，參比試劑檢測(cè)在參考范圍內(nèi)且考核試劑在參考范圍外的標(biāo)本1例，詳見(jiàn)表6。表6定性檢測(cè)結(jié)果配對(duì)四格表考核試劑參比試劑合計(jì)參考范圍外參考范圍內(nèi)參考范圍外44（a）1（b）45參考范圍內(nèi)0(c）76（d）76合計(jì)4477121參考范圍外標(biāo)本符合率按公式a/(a+c)×100%計(jì)算；參考范圍內(nèi)標(biāo)本符合率按公式d/(b+d)×100%計(jì)算；總符合率按公式(a+d)/(a+b+c+d)×100%計(jì)算；符合率置信區(qū)間的計(jì)算公式為：p±1.96[p(1-p)/n]1/2(其中p符合率，n為樣本量，若p＞0.9，則采用校正的Wilsonscore方法。對(duì)考核試劑和參比試劑的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行Kappa值檢驗(yàn)，當(dāng)k＞0.8時(shí)，考核試劑與檢測(cè)試劑的檢測(cè)結(jié)果高度一致。經(jīng)計(jì)算，考核試劑定性檢測(cè)結(jié)果參考范圍外標(biāo)本符合率為100.00%（96.34%,100.00%），參考范圍內(nèi)標(biāo)本符合率為98.70%（94.11%,99.72%），總符合率為99.17%（94.87%,99.97%）。進(jìn)行Kappa一致性分析，Kappa值k=0.9822。表7考核試劑檢測(cè)符合率及95%置信區(qū)間100.0%（96.3%,100.0%）98.70%（94.11%,99.72%）99.17%（94.87%,99.97%）注：符合率均超過(guò)90%，置信區(qū)間采用校正的Wilsonscore方法不一致樣本分析********醫(yī)院共1例樣本考核試劑與參比試劑檢測(cè)結(jié)果不一致，本次試驗(yàn)，不一致樣本比例很低，詳見(jiàn)表8，且在臨界值附近，誤差在產(chǎn)品技術(shù)要求規(guī)定的范圍內(nèi)，可以判定為試驗(yàn)允許誤差范圍內(nèi)的結(jié)果不一致，不再用第三方試劑復(fù)核。表定性檢測(cè)結(jié)果不一致樣本詳情樣本編號(hào)性別年齡臨床診斷考核試劑（mg/L）考核試劑定性結(jié)果參比試劑（mg/L）參比試劑定性結(jié)果1803210843女87肺部感染8.26參考區(qū)間外7.88參考區(qū)間內(nèi)1.5.7含干擾物質(zhì)樣本檢測(cè)為綜合、全面的評(píng)價(jià)考核試劑的檢測(cè)性能，樣本中應(yīng)包括一定數(shù)量的含干擾物質(zhì)的樣本。檢測(cè)結(jié)果如表9所示。試驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明，考核試劑和參比試劑檢測(cè)結(jié)果無(wú)差異。表明考核試劑和參比試劑的抗干擾性能有較好的一致性。表9含干擾物質(zhì)樣本詳情樣本編號(hào)性別年齡臨床診斷干擾物考核試劑（mg/L）參比試劑（mg/L）1803200260女0新生兒黃疸膽紅素1.021.081803140593女0新生兒黃疸膽紅素0.780.791803170017男0新生兒黃疸膽紅素1.161.231803060582男0新生兒黃疸膽紅素0.210.201803040126男0新生兒黃疸膽紅素0.760.851.6討論和結(jié)論討論：********醫(yī)院共檢測(cè)124例受試者樣本，按方案剔除標(biāo)準(zhǔn)共剔除樣本3例，其中0例為線(xiàn)性范圍外標(biāo)本，3例為離群值標(biāo)本，剔除率為2.42%，最終納入分析121例，其中男性59例，女性62例，平均年齡34.69±21.31歲（包括9本次臨床試驗(yàn)結(jié)果的Pearson相關(guān)系數(shù)接近1，說(shuō)明兩種試劑的相關(guān)關(guān)系越密切?；貧w方程的截距（a）的95%CI包括0，斜率（b）接近1，說(shuō)明兩種試劑均在允許偏差范圍內(nèi)?？己嗽噭┡c參比試劑檢測(cè)濃度的差值Bland-Altman散點(diǎn)圖顯示：兩種試劑-0.0534±0.8428mg/L值±1.96SD范圍在-1.7390mg/L到1.6322mg/L超出置信區(qū)間的百分比為：0.00%。差值百分比Bland-Altman散點(diǎn)圖顯示：兩種試劑檢測(cè)濃度差值百分比為-0.2060±7.5190%（均值±標(biāo)準(zhǔn)差），兩種試劑檢測(cè)濃度差值百分比的均值±1.96SD范圍在-15.2441%到14.8321%之間。超出置信區(qū)間的百分比為：0.00%。經(jīng)計(jì)算，考核試劑定性檢測(cè)結(jié)果參考范圍外標(biāo)本符合率為100.00%（96.34%,100.00%），參考范圍內(nèi)標(biāo)本符合率為98.70%（94.