HPV的檢測(cè)和其臨床應(yīng)用培訓(xùn)課件

HPV乳頭瘤病毒科屬小DNA病毒乳頭瘤病毒的基因組主要編碼三組基因三個(gè)癌基因，包括E5、E6和E7，負(fù)責(zé)調(diào)節(jié)癌細(xì)胞轉(zhuǎn)化過(guò)程；兩個(gè)調(diào)節(jié)基因，包括E1和E2，負(fù)責(zé)調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄和病毒基因組的復(fù)制；兩個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白基因，包括L1和L2，組成病毒顆粒8/23/20241HPV的檢測(cè)和其臨床應(yīng)用HPV感染屬于常見(jiàn)的性傳播感染直接的皮膚-皮膚接觸是傳播的最有效途徑病毒不通過(guò)血液或體液傳播（例如精液）8/23/20242HPV的檢測(cè)和其臨床應(yīng)用HPV感染生殖器HPV感染的潛伏期變化極大。一般來(lái)說(shuō)，生殖器疣在HPV感染3-6月后顯現(xiàn)，然而也有研究表明潛伏期有數(shù)個(gè)月甚至幾十年；絕大多數(shù)的HPV感染是一過(guò)性的，新發(fā)感染大多1-2年內(nèi)會(huì)發(fā)生自愈；僅有少數(shù)的HPV感染會(huì)保持潛伏性，幾年或幾十年后會(huì)再激活。8/23/20243HPV的檢測(cè)和其臨床應(yīng)用多數(shù)生殖道HPV感染無(wú)臨床癥狀與HPV相關(guān)的宮頸疾病包括：宮頸濕疣、宮頸病變和宮頸癌等從HPV感染到釋放病毒約有3周。但是，HPV感染至出現(xiàn)損傷之間可能數(shù)周到數(shù)月。病毒感染的早期可能存在免疫逃逸，故沒(méi)有炎癥反應(yīng)8/23/20244HPV的檢測(cè)和其臨床應(yīng)用完整的HPV感染循環(huán)HPV感染顆粒突破下肛殖道表皮HPV感染顆粒進(jìn)入表皮細(xì)胞的基底層隨著基底層干細(xì)胞的子細(xì)胞分裂以及在垂直方向上的成熟化，病毒在基底層以上鱗狀細(xì)胞中復(fù)制成熟的病毒在表面細(xì)胞分離時(shí)釋放到環(huán)境中8/23/20245HPV的檢測(cè)和其臨床應(yīng)用HPV分型最重要的分類學(xué)單元是型(type)與宮頸癌相關(guān)程度較為清楚的HPV型歸為高危型HPV（16,18,31,33,35,39,45,51,52,56,58,59,68,73）和疑似高危型HPV（26,53,66）與尖銳濕疣等良性疾病相關(guān)的HPV被歸入低危型HPV（6,11,40,42,43,44,54,61,70,72,81，89），一般認(rèn)為這類HPV的感染不會(huì)誘導(dǎo)宮頸癌的發(fā)生

8/23/20246HPV的檢測(cè)和其臨床應(yīng)用HPV與宮頸癌的相關(guān)性年輕性活躍的女性HPV感染率最高，感染高峰年齡為18～28歲多屬于一過(guò)性感染，通過(guò)自身免疫將HPV消滅只有持續(xù)感染HPV的婦女,才成為子宮頸癌高發(fā)人群HPV感染到發(fā)展成為子宮頸癌需要9-25年時(shí)間30%發(fā)展成為CIN1,10%發(fā)展成為CIN2,10%進(jìn)一步發(fā)展成為CIN3，1%發(fā)展成為子宮頸癌8/23/20247HPV的檢測(cè)和其臨床應(yīng)用宮頸癌前病變宮頸上皮細(xì)胞內(nèi)瘤變（CIN）；包括宮頸非典型增生和宮頸原位癌，反映宮頸癌發(fā)生、發(fā)展的過(guò)程。從細(xì)胞學(xué)分為CINI、Ⅱ、III級(jí)，包含宮頸鱗狀上皮細(xì)胞內(nèi)病變和腺細(xì)胞內(nèi)病變。8/23/20248HPV的檢測(cè)和其臨床應(yīng)用宮頸癌現(xiàn)狀女性第二大常見(jiàn)惡性腫瘤全世界每年新病例數(shù)為56.5萬(wàn)在發(fā)展中國(guó)家宮頸癌的發(fā)生率為發(fā)達(dá)國(guó)家6倍，有50%的病例發(fā)生在中國(guó)和印度中國(guó)每年新病例為18.15萬(wàn)中國(guó)每年有3萬(wàn)多的婦女死于宮頸癌8/23/20249HPV的檢測(cè)和其臨床應(yīng)用發(fā)展中國(guó)家的新發(fā)病例多是晚期患者未能早期診斷細(xì)胞學(xué)檢查未能普及陰道鏡應(yīng)用條件受到限制民眾對(duì)宮頸癌的防范意識(shí)欠缺8/23/202410HPV的檢測(cè)和其臨床應(yīng)用發(fā)病年齡原位癌的發(fā)病年齡為35-39歲浸潤(rùn)癌為40-49歲8/23/202411HPV的檢測(cè)和其臨床應(yīng)用宮頸癌的新動(dòng)向近年來(lái)由于生活方式的改變發(fā)病率:有上升趨勢(shì)發(fā)病年齡:趨向年輕化8/23/202412HPV的檢測(cè)和其臨床應(yīng)用HPV感染和宮頸癌在不同年齡組的發(fā)生率年齡(Years)HPV感染率(%)40-4415-1920-2425-2930-3435-3945-4950-54051015202530051015202530每10萬(wàn)人中宮頸癌發(fā)生率8/23/202413HPV的檢測(cè)和其臨床應(yīng)用哪些些婦女更容易患宮頸癌性生活過(guò)早早孕多產(chǎn)或多次人工流產(chǎn)自己或性伴侶有多個(gè)性伴侶曾經(jīng)或正患有生殖道HPV感染有或曾經(jīng)患有其它性病吸煙、吸毒和營(yíng)養(yǎng)不良內(nèi)分泌紊亂或免疫力低下的婦女8/23/202414HPV的檢測(cè)和其臨床應(yīng)用現(xiàn)在基本明確宮頸癌的病因就是高危型HPV的持續(xù)性感染。感染HPV病毒到發(fā)展成浸潤(rùn)癌需要大約十年的歷程，這是重要不可忽視的時(shí)間，只要定期進(jìn)行婦科健康檢查，就可以及早發(fā)現(xiàn)子宮頸癌癌前病變并加以治療，就可有效地扼制其癌變;預(yù)防子宮頸癌的發(fā)生。宮頸癌可以預(yù)防和治愈8/23/202415HPV的檢測(cè)和其臨床應(yīng)用引起宮頸癌幾個(gè)方面因素8/23/202416HPV的檢測(cè)和其臨床應(yīng)用HPV致宮頸癌機(jī)理5--10yearsHPV感染持續(xù)HPV感染細(xì)胞分化異常CIN高度CIN>30<30宮頸癌輔助—致癌劑免疫因素8/23/202417HPV的檢測(cè)和其臨床應(yīng)用HPVE6癌蛋白與宮頸惡性病變的關(guān)系8/23/202418HPV的檢測(cè)和其臨床應(yīng)用HPVE7癌蛋白的分子生物學(xué)特性

8/23/202419HPV的檢測(cè)和其臨床應(yīng)用宮頸上皮細(xì)胞發(fā)生異常和瘤變的進(jìn)化過(guò)程基底細(xì)胞膜正常輕度中度原位鱗狀細(xì)胞癌變 上皮 變型HSIL細(xì)胞異型CIN1CIN2CIN3LSIL巴氏涂片活檢8/23/202420HPV的檢測(cè)和其臨床應(yīng)用HPV致宮頸癌進(jìn)展示意圖LSILLSILCISCA8—10年（100%治愈）2—5年（死亡）正常低度病變高度病變?cè)话┙?rùn)癌8/23/202421HPV的檢測(cè)和其臨床應(yīng)用關(guān)于HPV感染HPV感染多數(shù)不發(fā)展成為宮頸癌，可以在9-16(8-10)個(gè)月消失;間隔半年2次HPV（＋）;HPV持續(xù)感染;28%的持續(xù)感染者,在2年內(nèi)發(fā)展為CINI；70%的持續(xù)感染者4年內(nèi)發(fā)展為CINII;8/23/202422HPV的檢測(cè)和其臨床應(yīng)用HPV實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)8/23/202423HPV的檢測(cè)和其臨床應(yīng)用

臨床常用的HPV檢測(cè)方法病理學(xué)檢查細(xì)胞學(xué)檢查免疫組化檢測(cè)原位雜交技術(shù)檢測(cè)聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù)DNA芯片分型檢測(cè)雜交捕獲DNA分析8/23/202424HPV的檢測(cè)和其臨床應(yīng)用病理學(xué)檢查鱗狀上皮疣狀乳頭狀增生表皮角化不全棘層不規(guī)則增厚基底層增生上皮腳延長(zhǎng)中表層出現(xiàn)灶狀分布的挖空細(xì)胞等。8/23/202425HPV的檢測(cè)和其臨床應(yīng)用細(xì)胞學(xué)檢查凹空細(xì)胞、角化不良及濕疣外底層細(xì)胞細(xì)胞學(xué)診斷HPV感染敏感性較差8/23/202426HPV的檢測(cè)和其臨床應(yīng)用免疫組化檢測(cè)檢測(cè)HPV的衣殼抗原來(lái)進(jìn)一步明確HPV感染所得陽(yáng)性反應(yīng)定位明確,判斷可靠必須在HPV-DNA復(fù)制成熟后才有衣殼裝備敏感性較低8/23/202427HPV的檢測(cè)和其臨床應(yīng)用原位分子雜交用來(lái)測(cè)定基因或特定核苷酸序列在核酸分子的所在部位，檢測(cè)重組體DNA）通過(guò)非放射性探針對(duì)石蠟組織進(jìn)行檢測(cè),能作定位檢測(cè),假陽(yáng)性率低,但靈敏度不高,大大降低了臨床使用價(jià)值。8/23/202428HPV的檢測(cè)和其臨床應(yīng)用

聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù)設(shè)計(jì)與HPV-DNA互補(bǔ)的一對(duì)特異性核苷酸引物,以HPV-DNA為模板以指數(shù)增長(zhǎng)的速率進(jìn)行體外擴(kuò)增敏感性最高,可對(duì)HPV進(jìn)行分型,測(cè)定病毒載量,發(fā)現(xiàn)新基因型,對(duì)基因進(jìn)行序列分析缺點(diǎn)為樣品間易交叉污染導(dǎo)致假陽(yáng)性8/23/202429HPV的檢測(cè)和其臨床應(yīng)用雜交捕獲DNA分析標(biāo)本中的HPV-DNA與液相中的RNA探針結(jié)合,形成特異性的RNA-DNA雜交體,被微孔板內(nèi)的特異抗體所捕獲,然后被所加的發(fā)光底物檢測(cè),其發(fā)光的強(qiáng)度與標(biāo)本中的DNA量成比例,因而可對(duì)HPV進(jìn)行半定量檢測(cè)效率高,適于大量人群檢測(cè),臨床上操作簡(jiǎn)便8/23/202430HPV的檢測(cè)和其臨床應(yīng)用DNA裂解→RNA-DNA雜交→抗體捕獲→化學(xué)發(fā)光→計(jì)算機(jī)判讀裂解加入探針雜交加入二抗和發(fā)光劑8/23/202431HPV的檢測(cè)和其臨床應(yīng)用

hC2方法，特異性強(qiáng)，準(zhǔn)確率高，并能做到定量，但不能分出亞型。芯片技術(shù)，可在相同的條件下，分出亞型，但不能定量。因此，HPV亞型分類和定量檢測(cè)研究將成為今后的重要課題。亞型和量化，可能對(duì)疾病的演變和轉(zhuǎn)歸提供更有利的證據(jù)。8/23/202432HPV的檢測(cè)和其臨床應(yīng)用宮頸癌的篩查8/23/202433HPV的檢測(cè)和其臨床應(yīng)用篩查對(duì)象21歲以上有性生活史或具有性生活三年以上的任何婦女。高危人群：有多個(gè)性伴侶、性生活過(guò)早、HIV/HPV感染、機(jī)體免疫功能低下、衛(wèi)生條件差/性保健知識(shí)缺乏。某些情況無(wú)需進(jìn)行篩查，如因良性疾病摘除子宮的婦女。

8/23/202434HPV的檢測(cè)和其臨床應(yīng)用起始年齡：

在我國(guó)經(jīng)濟(jì)發(fā)達(dá)地區(qū)為25－30歲；經(jīng)濟(jì)欠發(fā)達(dá)地區(qū)為35－40歲。對(duì)于高危婦女人群，篩查起始年齡應(yīng)適當(dāng)提前。終止年齡：

65歲后患子宮頸癌的危險(xiǎn)性極低，故一般不主張對(duì)65歲以上的婦女進(jìn)行子宮頸癌篩查。

8/23/202435HPV的檢測(cè)和其臨床應(yīng)用篩查間隔1、每年一次細(xì)胞學(xué)檢查，連續(xù)2次（-），可3年一次2、連續(xù)2次HPV（-），細(xì)胞學(xué)檢查（-）可5～8年一次3、高危人群：最好每年一次（CIN及以上、特殊職業(yè)、30歲以上高危HPV感染者）8/23/202436HPV的檢測(cè)和其臨床應(yīng)用篩查方案根據(jù)《中國(guó)癌癥預(yù)防與控制規(guī)劃綱要（2004-2010）》推薦，一般可以選擇下面兩種篩查方案。

8/23/202437HPV的檢測(cè)和其臨床應(yīng)用醋酸或碘染色后肉眼觀察（VIA/VILI）

陽(yáng)性陰性陰道鏡+病理定期篩查（1次/年）相應(yīng)治療初級(jí)篩查方案流程圖8/23/202438HPV的檢測(cè)和其臨床應(yīng)用醫(yī)生取材HPV檢測(cè)+傳統(tǒng)巴氏涂片（TBS分級(jí)）HPV（-）HPV（+）HPV（-）HPV（+）細(xì)胞學(xué)≤ASCUS細(xì)胞學(xué)≤ASCUS細(xì)胞學(xué)≥

ASC-H細(xì)胞學(xué)≥

ASC-H陰道鏡檢查/多點(diǎn)活檢+ECC篩查（1次/3~5年）隨訪（1次/年）相應(yīng)治療

一般篩查方案流程圖8/23/202439HPV的檢測(cè)和其臨床應(yīng)用取材HPV檢測(cè)+液基細(xì)胞學(xué)檢查（TBS分級(jí)）HPV（-）HPV（+）HPV（-）HPV（+）細(xì)胞學(xué)≤ASCUS細(xì)胞學(xué)≤ASCUS細(xì)胞學(xué)≥ASC-H細(xì)胞學(xué)≥ASC-H

陰道鏡檢查/多點(diǎn)活檢+ECC篩查隨訪（1次/3~5年）（1次/年）相