藥物鑒別試驗

關(guān)于藥物鑒別試驗第一節(jié)鑒別的定義與目的中國藥典2010年版定義定義：根據(jù)藥物的分子結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)，采用物理、化學(xué)或生物學(xué)方法來判斷藥物的真?zhèn)巍！镒⒁猓鸿b別試驗方法僅證實貯藏在有標簽容器中的藥物是否為其所標示的藥物，而非對未知物進行定性分析。（目的）第2頁,共61頁，星期六，2024年，5月意義：它是藥品質(zhì)量檢驗工作中的首項任務(wù)，只有在藥物鑒別無誤的情況下，進行藥物的雜質(zhì)檢查、含量測定等分析才有意義。性質(zhì)：藥物鑒別試驗的試驗方法雖有一定的專屬性，但不足以確證其結(jié)構(gòu)，因此不能賴以鑒別未知物。第3頁,共61頁，星期六，2024年，5月第二節(jié)鑒別試驗的項目性狀（Description)一般鑒別試驗

（generalidentificationtest）專屬鑒別試驗

（specificidentificationtest）第4頁,共61頁，星期六，2024年，5月（一）性狀藥物的性狀（description）反映了藥物特有的物理性質(zhì)，一般包括外觀、溶解度和物理常數(shù)等。1.外觀：指藥物的聚集狀態(tài)、晶型、色澤以及臭、味等性質(zhì)。2.溶解度：藥典采用“極易溶解、易溶、溶解、略溶、微溶、極微溶解、幾乎不溶或不溶”來描述藥品在不同溶劑中的溶解性能。第5頁,共61頁，星期六，2024年，5月例子：CHP2010中鹽酸異丙嗪的性狀描述：本品為白色或乳白色結(jié)晶性粉末；有微臭，味極苦；有引濕性；遇光漸變色；水溶液顯酸性反應(yīng)。鹽酸異丙嗪片的性狀描述：本品為糖衣片，除去包衣后顯白色。色澤晶型聚集狀態(tài)氣味其它第6頁,共61頁，星期六，2024年，5月鹽酸異丙嗪（英語：Promethazine，又名鹽酸普魯米近(PromethazineHydrochloride)或非那根(Phenergan)）是一種常見的止咳藥物，是一種抗組織胺藥，能競爭性阻斷組胺H1受體，對抗組胺所致之毛細血管擴張，并降低其通透性。因此，能夠平復(fù)因為氣管受刺激而引起的咳嗽。

第7頁,共61頁，星期六，2024年，5月水楊酸阿司匹林外觀白色細微的針狀結(jié)晶或白色結(jié)晶性粉末；無臭或幾乎無臭白色結(jié)晶或結(jié)晶性粉末；無臭或微帶醋酸臭溶解度在乙醇或乙醚中易溶；

在沸水中溶解；

在三氯甲烷中略溶；在水中微溶在乙醇中易溶；

在三氯甲烷或乙醚中溶解；

在水或無水乙醚中微溶；

在氫氧化鈉溶液或碳酸鈉溶液中溶解，但同時分解解熱鎮(zhèn)痛藥第8頁,共61頁，星期六，2024年，5月3.物理常數(shù):

不僅對藥品具有鑒別意義，也反映了該藥品的純雜程度。藥典收載的物理常數(shù)包括：相對密度、餾程、熔點、凝點、比旋度、折光率、黏度、酸值、皂化值、羥值、碘值、吸收系數(shù)。水楊酸阿司匹林熔點158-161℃135-138℃（1）熔點：固體→液體的溫度第9頁,共61頁，星期六，2024年，5月在一定波長與溫度下，偏振光透過長1dm且每1mL中含有旋光性物質(zhì)1g的溶液時測得的旋光度。作用：反映手性藥物特性及其純度的主要指標，用以區(qū)別藥品、檢查純度或測定制劑的含量。維生素C的比旋度測定：20.5°~21.5°例子手性（2）比旋度第10頁,共61頁，星期六，2024年，5月[α]為比旋度；α為旋光度；l為光程長短（dm）；c為每100ml中含有干燥品物質(zhì)重量（g）第11頁,共61頁，星期六，2024年，5月（3）吸收系數(shù)：在給定的波長、溶劑和溫度等條件下，吸光物質(zhì)在單位濃度、單位液層厚度時的吸收度稱為吸收系數(shù)。有兩種表示方式：摩爾吸收系數(shù)和百分吸收系數(shù)。后者是中國藥典收載的方法，它是指在一定波長下，溶液濃度為1％（W/V)，厚度為lcm時的吸收度，用表示，用于考查藥品的質(zhì)量，定量分析。第12頁,共61頁，星期六，2024年，5月幾種常見喹諾酮類藥物的紫外吸收特征藥物介質(zhì)λmax(nm)諾氟沙星0.1mol/LNaOH2731098司帕沙星0.025mol/LNaOH291691洛美沙星0.1mol/LHCl287975吡哌酸0.1mol/LHCl2751630氧氟沙星0.1mol/LHCl226；294918甲磺酸培氟沙星0.1mol/LHCl2771001第13頁,共61頁，星期六，2024年，5月常見的氟喹諾酮類藥物第14頁,共61頁，星期六，2024年，5月喹諾酮類結(jié)構(gòu)通式A、B環(huán)稠合而成A環(huán)：芳香雜環(huán)，4-酮-3-羧酸吡啶衍生物X：C原子或雜原子N：有取代基B環(huán)：芳環(huán)、雜環(huán)（含取代基）第15頁,共61頁，星期六，2024年，5月(二)一般鑒別試驗（generalidentificationtest）

依據(jù)某一類藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)或理化性質(zhì)的特征，通過化學(xué)反應(yīng)來鑒別藥物的真?zhèn)?。無機藥物：藥物中的陰離子和陽離子的特殊反應(yīng)；有機藥物：典型的官能團反應(yīng)。一般鑒別試驗只能證實是某一類藥物，而不能證實是哪一種藥物。通常一般鑒別試驗不適用于數(shù)種化學(xué)藥物的混合物鑒別或在有干擾物質(zhì)存在時鑒別。第16頁,共61頁，星期六，2024年，5月一般鑒別試驗項目

丙二酰脲類：苯巴比妥芳香第一胺類：對乙酰氨基酚托烷生物堿類：硫酸阿托品有機酸鹽：無機金屬鹽類：無機酸鹽：有機氟化物類：氟康唑鈉、鉀、鋰、鎂、鐵、鈣、。。。水楊酸、苯甲酸等亞硫酸、亞硫酸氫鹽等第17頁,共61頁，星期六，2024年，5月苯巴比妥：用作鎮(zhèn)靜和催眠藥物，適用于治療神經(jīng)過度興奮引起的失眠癥，能引起安穩(wěn)的睡眠。但不宜長期服用，因其會引起全身無力、嘔吐、頭痛等副作用。對乙酰氨基酚：鎮(zhèn)痛解熱藥。常用于發(fā)熱、頭痛和其他輕微疼痛。硫酸阿托品：抗膽堿藥，用于胃腸道、膽絞痛，散瞳檢查驗光，角膜炎，有機磷農(nóng)藥中毒、感染性休克等綜合癥的治療。氟康唑：是治療真菌感染的一種藥物，為廣譜抗真菌藥，對人和動物的真菌感染均有治療作用，目前市場上有片劑、膠囊、粉針劑和注射液幾種劑型。

第18頁,共61頁，星期六，2024年，5月1.有機氟化物（P72）有機氟化物變成無機氟化物第19頁,共61頁，星期六，2024年，5月氧瓶燃燒法是將試樣包在無灰濾紙內(nèi)，點燃后，立即放入充滿氧氣的燃燒瓶中，以鉑絲（或鎳鉻絲）作催化劑，進行燃燒分解，燃燒產(chǎn)物被預(yù)先裝入瓶中的吸收液吸收，試樣中的鹵素、硫、磷、硼、金屬分別形成鹵離子、硫酸根離子、磷酸根離子、硼酸根離子及金屬氧化物而被溶解在吸收液中。然后，根據(jù)各個元素的特點采用一般方法（通常是容量法）來測定其中的各個元素的含量。第20頁,共61頁，星期六，2024年，5月2.有機酸鹽FeCl3反應(yīng):②加稀HCl，即析出白色水楊酸沉淀；分離，沉淀溶于醋酸銨溶液。①中性時呈紅色酸性時呈紫色水楊酸鹽第21頁,共61頁，星期六，2024年，5月取供試品中性溶液，置潔凈的試管中，加氨制硝酸銀試液數(shù)滴，置水浴中加熱，即生成游離銀并附在試管內(nèi)壁形成銀鏡。酒石酸鹽第22頁,共61頁，星期六，2024年，5月3.芳香第一胺類:橙黃到猩紅色第23頁,共61頁，星期六，2024年，5月4.托烷生物堿類:Vitali反應(yīng)托烷生物堿均有莨菪酸結(jié)構(gòu)醌型產(chǎn)物Vitali反應(yīng)莨菪酸的特征反應(yīng)

第24頁,共61頁，星期六，2024年，5月硫酸阿托品

--生物堿類抗膽堿藥

第25頁,共61頁，星期六，2024年，5月臨床應(yīng)用內(nèi)臟（特別是胃腸）絞痛擴瞳、遺尿、盜汗、流涎癥、緩慢性心律失常、抗休克有機磷農(nóng)藥（膽堿酯酶抑制劑）中毒等第26頁,共61頁，星期六，2024年，5月結(jié)構(gòu)特點α位莨菪醇β位偽莨菪醇內(nèi)消旋無旋光性莨菪烷骨架153三個手性碳莨菪酸天然(-)-莨菪酸為S-構(gòu)型莨菪堿酯α-羥甲基苯乙酸第27頁,共61頁，星期六，2024年，5月5.無機金屬鹽:焰色反應(yīng)鑒定。（P74）

鈉黃鉀紫鈣磚紅鋇黃綠

另外銨鹽的檢測:第28頁,共61頁，星期六，2024年，5月6.無機酸根的鑒別:氯化物:硝酸銀鑒定法以及二氧化錳氧化法硫酸鹽:氯化鋇鑒定法以及醋酸鉛鑒定法以及鹽酸排除法硝酸鹽:硫酸及硫酸亞鐵顯棕色法與銅反應(yīng)生成紅棕色蒸氣高錳酸鉀排除法第29頁,共61頁，星期六，2024年，5月（三）專屬鑒別試驗

是證實某一種藥物的依據(jù)，它是根據(jù)每一種藥物化學(xué)結(jié)構(gòu)的差異及其所引起的物理化學(xué)特性的不同，選用某些特有的靈敏定性反應(yīng)，來鑒別藥物真?zhèn)巍Ｔ诘诹乱院髸敿氈v解。例子:同屬巴比妥類使溴褪色硫化鉛沉淀注意與一般鑒別試驗的區(qū)別★共性中找尋個性差異第30頁,共61頁，星期六，2024年，5月加碳酸鈉試液煮沸后放冷，加過量稀硫酸，析出白色沉淀，并有醋酸臭味+H2SO4CH3COOH第31頁,共61頁，星期六，2024年，5月藥物鑒別一般鑒別專屬鑒別以某些類別藥物的共同化學(xué)結(jié)構(gòu)為依據(jù),根據(jù)其相同的物理化學(xué)性質(zhì)進行藥物真?zhèn)蔚蔫b別,可以區(qū)別不同藥物類別。在一般鑒別的基礎(chǔ)上,利用各種藥物化學(xué)結(jié)構(gòu)的差異來鑒別藥物,可以區(qū)別同類藥物或具有相同化學(xué)結(jié)構(gòu)部分的各個藥物單體。第32頁,共61頁，星期六，2024年，5月第三節(jié)鑒別方法化學(xué)鑒別法呈色反應(yīng)鑒別法沉淀生成反應(yīng)鑒別法熒光反應(yīng)鑒別法

氣體生成反應(yīng)鑒別法測定生成物的熔點使試劑褪色的鑒別法維C應(yīng)用少原則：反應(yīng)迅速、現(xiàn)象明顯，具有明確的原理第33頁,共61頁，星期六，2024年，5月1.呈色反應(yīng)鑒別法：系指供試品溶液中加入適當(dāng)?shù)脑噭┤芤?，在一定條件下進行反應(yīng)，生成易于觀測的有色產(chǎn)物。在鑒別試驗中最為常用的反應(yīng)類型有：（1）三氯化鐵呈色反應(yīng)：一般都含有酚羥基或水解后產(chǎn)生酚羥基；（2）異羥酸鐵反應(yīng)：一般多為芳酸及其脂類、酰胺類；第34頁,共61頁，星期六，2024年，5月（3）茚三酮呈色反應(yīng)：氨基酸及氨基糖苷；（4）重氮化一偶合顯色反應(yīng)：一般都有芳伯氨基或能產(chǎn)生芳伯氨基；第35頁,共61頁，星期六，2024年，5月例：葡萄糖的鑒別——呈色反應(yīng)取本品約0.2g，加水5ml溶解后，緩緩滴入微溫的堿性酒石酸銅試液中，即生成氧化亞銅的紅色沉淀第36頁,共61頁，星期六，2024年，5月斐林（Fehling）試驗斐林溶液是含硫酸銅和酒石酸鉀鈉的氫氧化鈉溶液，它能使脂肪醛和還原性糖發(fā)生氧化，同時生成紅色氧化亞銅沉淀。但不能氧化芳香醛和非還原性糖。第37頁,共61頁，星期六，2024年，5月2.沉淀生成反應(yīng)鑒別法：系指供試品溶液中加入適當(dāng)?shù)脑噭┤芤海谝欢l件下進行反應(yīng)，生成不同顏色和具有特殊形狀的沉淀。常用的沉淀反應(yīng)有：（1）與重金屬離子的沉淀反應(yīng)：在一定條件下，藥物和重金屬離子反應(yīng)，生成不同形式的沉淀；（2）與硫氰化鉻胺（雷氏鹽）的沉淀反應(yīng)：這類藥物多為生物堿及其鹽和具有芳香環(huán)的有機堿及其鹽；第38頁,共61頁，星期六，2024年，5月硝酸銀——丙二酰脲類、氯化物、微C銀鏡反應(yīng)——異煙肼氧化亞銅——葡萄糖銅鹽——磺胺類三氯化鐵——苯甲酸鹽重金屬離子——利多卡因生物堿沉淀劑——氮雜環(huán)類第39頁,共61頁，星期六，2024年，5月3.熒光反應(yīng)鑒別法常用的熒光發(fā)射形式有以下類型：（1）藥物本身（2）藥物溶液加硫酸使呈酸性后（3）藥物和溴反應(yīng)后（4）藥物和間苯二酚反應(yīng)后在可見光下發(fā)射熒光；第40頁,共61頁，星期六，2024年，5月4.氣體生成反應(yīng)鑒別法胺類藥物、酰脲類藥物以及某些酰胺類藥物：經(jīng)強堿處理后，加熱，產(chǎn)生氨氣；含硫的藥物：可經(jīng)強酸處理后，加熱，發(fā)生硫化氫氣體；含碘有機藥物：經(jīng)直火加熱，可生成紫色碘蒸氣；含醋酸酯和乙酰胺類藥物：經(jīng)硫酸水解后，加乙醇可產(chǎn)生醋酸乙酯的香味。第41頁,共61頁，星期六，2024年，5月光譜鑒別法UV鑒別法IR鑒別法NIR鑒別法AAS鑒別法NMR鑒別法MS鑒別法XRD鑒別法紫外近紅外紅外原子吸收核磁共振質(zhì)譜法X射線衍射第42頁,共61頁，星期六，2024年，5月1.紅外光譜法專屬性強、應(yīng)用較廣（固體、液體、氣體樣品）主要用于組分單一、結(jié)構(gòu)明確的原料藥，特別適合于結(jié)構(gòu)復(fù)雜、細微差別同類藥物，如磺胺類、甾體激素類和抗生素類藥品。鑒別方法：中國藥典和BP均采用標準圖譜對照法；USP采用對照品法。第43頁,共61頁，星期六，2024年，5月第44頁,共61頁，星期六，2024年，5月2.紫外光譜法★光譜簡單，專屬性差?！锍Ｓ玫姆椒ㄓ校?/p>

（1）測定最大吸收波長或同時測定最小吸收波長；

（2）規(guī)定一定濃度的供試液在最大吸收波長處的吸收度；

（3）規(guī)定吸收波長和吸收系數(shù)法；

（4）規(guī)定吸收波長和吸收度比值法；

（5）經(jīng)化學(xué)處理后，測定其反應(yīng)產(chǎn)物的吸收光譜特性。

以上方法可以單個應(yīng)用，也可幾個結(jié)合起來使用，以提高方法的專屬性。第45頁,共61頁，星期六，2024年，5月

示例一取色甘酸鈉，加磷酸鹽緩沖液（pH7.4）溶解并稀釋成每1ml中約含10μg的溶液，照紫外-可見分光光度法（附錄IVA）測定，在238nm與326nm波長處有最大吸收。對比吸收光譜特征參數(shù)第46頁,共61頁，星期六，2024年，5月

示例二取對氨基水楊酸鈉250mg，加1mol/L氫氧化鈉溶液3mL，溶解后轉(zhuǎn)移至500mL量瓶中，用水稀釋至刻度，混勻。精密吸取5mL溶液置于內(nèi)含pH7磷酸鹽緩沖液12.5mL的250mL量瓶中，用水稀釋至刻度，混勻，即為供試品溶液。另配制相同濃度緩沖溶液的空白對照液。于265

2nm和295

2nm波長處測定吸收度A265和A295，規(guī)定A265/A295的值應(yīng)在1.50～1.56之間。對比規(guī)定吸收波長的吸收度比值第47頁,共61頁，星期六，2024年，5月

示例三

USP(30)采用對照品法，將樣品與對照品按同法處理，在200400nm波長范圍內(nèi)掃描兩溶液，要求在相同的波長處有最大吸收、最小吸收和相同的吸收系數(shù)，或吸收比在規(guī)定的限度內(nèi)。

阿替洛爾的紫外光譜鑒別：“本品50μg/ml甲醇溶液顯示的紫外光譜圖與相同條件下測得的USP阿替洛爾參考標準品的紫外光譜圖一致”對比吸收光譜一致性第48頁,共61頁，星期六，2024年，5月色譜鑒別法TLC鑒別法HPLC鑒別法GC鑒別法第49頁,共61頁，星期六，2024年，5月1.薄層色譜法ChP2010中對TLC鑒別法的要求對照品供試品對照品混合供試品供試品結(jié)構(gòu)類似品供試品混合結(jié)構(gòu)類似品比移值+顏色綜合考慮一致性實驗中考慮：供試品/對照品；薄層板；展開劑；顯色劑第50頁,共61頁，星期六，2024年，5月2.HPLC和GC法一般規(guī)定按供試品含量測定項下的色譜條件進行試驗。要求供試品和對照品色譜峰的保留時間應(yīng)一致。

內(nèi)標法時，要求藥物與內(nèi)標物峰的保留時間比值也應(yīng)相同。第51頁,共61頁，星期六，2024年，5月顯微鑒別法主要用于中藥及其制劑的鑒別第52頁,共61頁，星期六，2024年，5月生物學(xué)鑒別法利用藥效學(xué)和分子生物學(xué)等有關(guān)技術(shù)來鑒定藥物品質(zhì)的一種方法,主要用于抗生素、生物藥物以及中藥的鑒別,通常分為生物效應(yīng)鑒別法和