2022屆高考生物三輪復(fù)習(xí)選修1必考基礎(chǔ)知識復(fù)習(xí)圖解

選修1《生物技術(shù)實(shí)踐》知識歸納圖解.

聯(lián)春：

I①要先清洗后除枝粳lls：主妻菌制是薛瓦菌:

（避免除去枝梗時引聯(lián)意：酵母菌是異養(yǎng)兼性I

起葡萄破損，增加被6榨汁機(jī)要清洗干凈，厭氧微生物

GH12O6TC2H5OH+CO2：|原理：主要菌種是醋酸桿菌（異養(yǎng)需氧型）

雜菌污染的機(jī)會，同：并晾干（防雜菌污染）

I溫度：20℃左右最適合酵I|①當(dāng)氧氣糖源均充足時，糖T醋酸

時，防止葡萄汁流失）I②避免將果核壓破（因

母菌繁殖，一般控制||②當(dāng)氧氣充足、缺少糖源時，乙醇T乙醛T醋酸

在意;i@不能反復(fù)沖洗（避免i果核含有多種有害葡

”度：30℃~35℃o

選擇新鮮的葡萄卜菌種流失）i萄酒風(fēng)味的物質(zhì)）在18℃~25℃?

果

挑選葡萄|------＞沖洗——

酒榨汁-----------/酒精發(fā)酵醋酸發(fā)酵

和

果

-T果酒

醋：-X果醋I

▼

的?注意：I汪宣;一籥至前插天豆鼻】

制I①發(fā)酵裝置要清洗干凈，并用體積分?jǐn)?shù)為70%的酒精消毒I

作I②發(fā)酵瓶裝入葡萄汁后留有I/3的空間（目的是先讓酵母菌I

I進(jìn)行有氧呼吸快速繁殖，耗盡氧氣后再進(jìn)行酒精發(fā)酵；其I

；次，防止發(fā)酵過程中產(chǎn)生的C02造成發(fā)酵液的溢出）

I③如用帶蓋的瓶子制葡萄酒，每隔12h左右將瓶蓋擰松一次1

（注意不是打開瓶蓋，防雜菌污染），之后再將瓶蓋擰緊（目|篇著譽(yù)菽

的：排出多余的氣體放炸裂）I①由于醋酸菌和乳酸菌屬于原

1④裝入葡萄汁封閉充氣口（無氧環(huán)境和放雜菌污染）核生物，所以在利用者兩類

1⑤發(fā)酵過程中，隨著酒精度數(shù)的提高，葡萄酒呈現(xiàn)深紅色（因|I微生物時，其環(huán)境中一定不

紅葡萄皮的色素也進(jìn)入發(fā)酵液）能加入抗生素。

I②酵母菌在營養(yǎng)和氧氣充足時

1⑥酒精的鑒定：與酸性重銘■酸鉀T呈灰綠色

I進(jìn)行出芽生殖

;對照組T2mL白酒T^SniL/L的H2SO43滴T混勺T

實(shí)驗(yàn)組T2mL發(fā)酵液廠"重格酸鉀3滴T觀察

圖米酒和梟帶的發(fā)醉裝置:

l-4b試管甲T2mL發(fā)酵前液43mL/L的&S0"3滴T混勻T

示意圖;試管乙T2mL發(fā)酵后液J重銘"酸鉀3滴T觀察

微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)

（-）培養(yǎng)基的基本知識

1.培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分

營養(yǎng)物

定義作用主要來源及所涉及的微生物

質(zhì)

無機(jī)化合物：CO2、NaHCCh等（自養(yǎng)

凡是能提供微生構(gòu)成生物細(xì)胞、生物體及

生物）

碳源物所需碳元素的細(xì)胞代謝產(chǎn)物，有些能為

有機(jī)化合物：糖類、脂質(zhì)、花生粉

物質(zhì)異養(yǎng)生物提供能源

餅、石油等（異養(yǎng)生物）

凡是能提供微生合成蛋白質(zhì)、核酸及含氮無機(jī)化合物：色、NH3＞鏤鹽、硝酸

氮源物所需氮元素的的代謝產(chǎn)物，也可為異養(yǎng)鹽，自養(yǎng)生物有機(jī)化合物：尿素、

物質(zhì)微生物提供能源牛肉膏、蛋白腺等，異養(yǎng)生物

生物體內(nèi)含量最良好的溶劑、細(xì)胞生活及

水分培養(yǎng)基、大氣、代謝產(chǎn)物

高的組成成分，分生化反應(yīng)的介質(zhì)、參與物

為結(jié)合水和自由質(zhì)運(yùn)輸及參與生化反應(yīng)的

水反應(yīng)物

為微生物提供大細(xì)胞組成成分，生命調(diào)節(jié)

無機(jī)鹽量除C、H、0以外物質(zhì)，自養(yǎng)菌的能源或其培養(yǎng)基、大氣等環(huán)境

的各種元素他營養(yǎng)來源，酶的激活劑

微生物正常生長

生長因可作為酶與核酸等的組成

繁殖，必不可少的維生素、氨基酸、堿基等

子成分

微量有機(jī)物

自養(yǎng)微生物與異養(yǎng)微生物所需的營養(yǎng)物質(zhì)不同

(1)自養(yǎng)微生物所需的碳源、氮源來自含碳、含氮的無機(jī)物，而異養(yǎng)微生物需要

高考警的碳源、氮源來自含碳、含氮的有機(jī)物，因此可根據(jù)培養(yǎng)基中營養(yǎng)物質(zhì)判斷

示鐘微生物的代謝類型。

(2)含氮無機(jī)物不但能給自養(yǎng)微生物提供氮源，也能作為能源物質(zhì)，提供能量，

如NH3既作為硝化細(xì)菌的氮源也作為能源。

2.培養(yǎng)基的配制原則

(1)目的明確。要根據(jù)微生物的種類、培養(yǎng)目的等選擇原料、配制培養(yǎng)基。

(2)營養(yǎng)要協(xié)調(diào)。各種營養(yǎng)物質(zhì)要保證適當(dāng)?shù)臐舛群捅壤I養(yǎng)物質(zhì)比例過低，不能滿足微生物生長;

濃度過高則會抑制微生物的正常生長。營養(yǎng)物質(zhì)的濃度比(如C/N)還會直接影響某些微

生物的代謝產(chǎn)物，如谷氨酸生產(chǎn),C/N=4：1時,菌體大量繁殖，谷氨酸產(chǎn)量少;而C/N=3：

1時，菌體繁殖受抑制，但谷氨酸合成量大。

(3)pH要適當(dāng)。不同微生物生長所需pH不同。如細(xì)菌pH保持在6.5?7.5之間；放線菌保持在7.5?

8.5之間；真菌應(yīng)保持在5.0?6.0之間。

3.培養(yǎng)基的分類及作用：培養(yǎng)基種類很多，作用也不同。根據(jù)不同的分類標(biāo)準(zhǔn)，可將培養(yǎng)基分為不同

種類。

劃分培養(yǎng)基種

特點(diǎn)用途及實(shí)例

標(biāo)準(zhǔn)類

物理液體培養(yǎng)

不加凝固劑工業(yè)生產(chǎn)

性質(zhì)基

半固體培觀察微生物的運(yùn)動、分類鑒定、

關(guān)苴

加圣保臧菌種

加凝固劑，如：瓊脂

固.體培養(yǎng)

微生物分離、鑒定、活菌計(jì)數(shù)、

基

天然培養(yǎng)

含化學(xué)成分不明確的天然物質(zhì)工業(yè)生產(chǎn)

化學(xué)基

成分合成培養(yǎng)培養(yǎng)基成分明確（用化學(xué)成分已

分類、鑒定

基知的化學(xué)物質(zhì)配成）

培養(yǎng)、分離出特定微生物（如：

培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)，以培養(yǎng)酵母茵或霉菌，可在培養(yǎng)

選擇培養(yǎng)

抑制不需要的微生物的生長，促基中加入青霉素；培養(yǎng)金黃色

用途基

進(jìn)所需要的微生物的生長葡萄球菌，引在培養(yǎng)基中加入

高濃度食鹽）

鑒別培養(yǎng)根據(jù)微生物的代謝特點(diǎn)，在培養(yǎng)鑒別不同種類的微生物，如可

基基中加入某種指示劑或化學(xué)藥用伊紅一美藍(lán)培養(yǎng)基鑒別飲用

品水或乳制品中是否啟大腸桿菌

(若有，茵落呈深紫色，并帶有

金屬光澤)

說明：①病.毒為非細(xì)胞結(jié)構(gòu)的生物體，專營活細(xì)胞寄生，目前不能利用人工培養(yǎng)基來培養(yǎng)，需接種在動

植物組織中才能增殖。常用于培養(yǎng)病毒的是活雞胚。

②加入培養(yǎng)基中的凝固劑(如瓊脂)，一般不能被微生物利用，只起到凝固作用。

③選擇培養(yǎng)基一般只生長具有特定的微生物，鑒別培養(yǎng)基可以存在其他微生物，而且能鑒別特定的

微生物。

注意：選擇培養(yǎng)基的選擇方法

(1)在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)。例如，加入青霉素可以分離出酵母菌和霉菌；加入高濃度的食鹽

可以得到金黃色葡萄球菌這里的加入是在主要營養(yǎng)成分完整的基礎(chǔ)上加入。

(2)改變培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分。例如缺乏氮源時可以分離出固氮微生物；石油作為惟一碳源時，可

以分離出消除石油污染的微生物。

(3)改變微生物的培養(yǎng)條件。例如，將培養(yǎng)基放在高溫環(huán)境下培養(yǎng)，可以得到耐高溫的微生物。

(-)滅菌技術(shù)

1.無菌技術(shù)的概念

在微生物培養(yǎng)中，獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止外來雜菌入侵，其主要技術(shù)是無菌操作。無菌技術(shù)

是指通過一定物理、化學(xué)的手段，防止實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)物被外來微生物污染。無菌技術(shù)主要圍繞如何避免雜

菌污染展開的。

2.消毒、滅菌的方法

項(xiàng)

概念常用方法應(yīng)用范圍

目

使用較為溫和的物理或巴氏消毒法：70?75℃水中煮30min一些小耐圖溫的物體如

化學(xué)方法，僅殺死物體表或在80℃水中煮15min牛奶

消

面或內(nèi)部一部分對人體煮沸消毒法：在100。。水浴中煮沸

毒一般物品

等有害的微生物(不包括5?6min

抱子和芽抱)化學(xué)藥藥」消毒法：用乙醇、氯氣、可用來對環(huán)境、雙手和衣

漂白粉、KMnCh等藥劑來殺死或抑制物等消毒

細(xì)菌生長或繁殖

紫外線消毒法：30W紫外燈照射

接種室

30.min

接種工具如接種環(huán)、.接種

灼燒火菌法：酒精燈火焰

針等

使用強(qiáng)烈的理化因素殺十熱火菌法：在16U?17?！婕訜崛绮Ａ髅螅ㄎ?、培養(yǎng)

滅

死物體內(nèi)外所有的微生1?2h皿）和金屬用具

菌

物，包括芽抱和抱子局壓蒸汽滅菌：壓力為100kPa,

溫度為121C的條件下，維持15?培養(yǎng)基及容器的火菌

30min

注意：

①無菌操作是微生物培養(yǎng)過程中，防止雜茵污染的關(guān)鍵步驟。

②消毒只能消滅或抑制營養(yǎng)體的活動，而不能達(dá)到徹底滅菌。酒精消毒用體積分?jǐn)?shù)為70%的酒精效果最

好，因濃度過高，會使菌體表面蛋白凝固成一層保護(hù)膜，乙醇分子不能進(jìn)入其中；濃度過低，殺菌力

減弱。而滅菌除殺死營養(yǎng)體外,，還必須殺死芽抱和抱子。

③滅菌消毒的原理，就是通過一定理化手段，使病原茵蛋白質(zhì)變性，失去生命活性。

（三）微生物的純化培養(yǎng)技術(shù)

1.常用細(xì)菌培養(yǎng)基一一蛋白陳培養(yǎng)基配制流程：

注意：注意：

①溶化瓊脂時要控制火力的大小并不①可用高壓蒸汽滅菌法

注意：分裝至試管時

斷攪拌，以免培養(yǎng)基溢出或燒焦；I②用干熱滅菌法時溫度160?170℃

培養(yǎng)基的高度I

I注意：舞配方并真叫②加熱過程中部分水分蒸發(fā)，待瓊脂（不能超過180℃,否則易引起報(bào)紙等燃燒）I

不要超過試管I③一般是培養(yǎng)基先滅菌再倒平板，也可先倒|

制一定體積培養(yǎng)基I完全溶化后應(yīng)補(bǔ)加蒸儲水，以保持

高度的1/5;平板，再滅菌!

I時各成分的用量溶液的濃度?_________?

一廠k

計(jì)「--

I注意:I注意：I注意：

:①牛肉膏較粘稠，應(yīng)玻棒挑取，在稱油于不同微生物適宜I①倒平板時，燒杯口要通過酒精燈火焰滅菌。

;量紙上稱量的pH不同，因此在熔②平板冷凝后要將平板倒置，以確保拿放方便，同時避免水分蒸發(fā)

修）牛肉膏蛋白陳易吸潮，動作要迅速|(zhì)化后，必須用NaOH或以利微生物生長，也可防止皿蓋上凝結(jié)的水滴滴入培養(yǎng)基，影響I

;HCI來調(diào)節(jié)pHpH;其次防止細(xì)菌透過皿底、皿蓋的縫隙，落在培養(yǎng)基上。

?_____________________|③倒平板時，不能將培養(yǎng)基濺在皿底與皿蓋之間，以防止雜菌滋生」

［污染培養(yǎng)基J

2.純化大腸桿菌

I.原理：在培養(yǎng)基上將細(xì)菌稀釋或分散成單個細(xì)胞，使其長成單個的菌落，這個菌落就是純化的細(xì)菌

菌落。

II.微生物接種方法:

3'

⑴平板劃線法：平板劃線法中細(xì)

幾種劃線方法示意圖

胞的分離和稀釋

過程發(fā)生在接種環(huán)在固體平板表面上的劃線和移動過程中。在線的開始部分，微生物

往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成純種的單個菌落。

(如圖)

(2)稀釋涂布平板法：10倍系列稀釋操作

劃線操作時注意:

(1)用接種環(huán)取菌種之前、每次劃線之前和劃線結(jié)束都要進(jìn)行灼燒滅菌，灼燒后要在酒精燈附近冷卻

后再操作；(第一次操作：殺死接種環(huán)上原有的微生物。每次劃線之前：殺死上次劃線后接種環(huán)上

殘留的菌種，使下次劃線的菌種直接來源于上次劃線的末端。劃線結(jié)束后：殺死接種環(huán)上殘存的

菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者)

(2)劃線時不要劃破培養(yǎng)基，如果采用分段劃線法操作從第二次操作應(yīng)總在上一次劃線末端開始，首

尾區(qū)不能相連；

(3)操作必須始終在酒精燈火焰旁進(jìn)行。

涂布操作時注意：

(1)配制系列梯度稀釋液時，所用的試管和移液管均需滅菌，必須用無菌水配制；

(2)涂布器用70%的酒精消毒，多余酒精在燒杯中滴盡，沾有少量酒精的涂布器在酒精燈火焰引燃。不

要將過熱的涂布器放入盛有酒精的燒杯中，一面引燃其中的酒精；

(3)配制系列梯度稀釋液和轉(zhuǎn)移菌液以及涂布過程等必須都在酒精燈火焰旁進(jìn)行，移液管頭不能接觸

任何物體。

3.菌種的保存

①對于頻繁使用的菌種，可以采用臨時保藏的方法。②對于需要長期保存的菌種，可以采用甘油管

藏的方法。

注意：①菌種保藏的原理是：低溫、干燥和隔絕空氣，使微生物代謝能力和繁殖能力降低。

②不同菌種的保藏方法因不同菌種而異。需氧型，必須低溫有氧，而厭氧型必須低溫?zé)o氧；腐生微

生物可提供牛肉膏蛋白月東培養(yǎng)基，而寄生微生物需提供活體組織.等非人工培養(yǎng)基，如病毒需提供

活雞胚。

(三)微生物的篩選與計(jì)數(shù)(以“土壤中分解尿素的細(xì)菌”為例)

篩選菌株--------------------------------------?菌落計(jì)數(shù)-----------------------------------I菌種的鑒定|

II

原則：天％提畫而前宇回I劉煦一麗接前的南葬篡亶手和響遍度但薪靜說兩:癥實(shí)靜篁臭吞和親南為意i

萬蘇一槍赫養(yǎng)釐「

I統(tǒng)計(jì)茵落數(shù)目的方法：IPH

的菌生長的條件，I的變化判斷：

同時抑制或阻止苴1(1)顯微鏡直接計(jì)數(shù)法

原理：在細(xì)菌分解尿素1

i①原理：利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)算一定容積樣品中微生物數(shù)量

他微生物的生長i時，分泌的胭酶|

培養(yǎng)基的成分：尿素作知②方法：用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。③缺點(diǎn)：不能區(qū)分死菌與活菌。將尿素分解為|

1(2)間接計(jì)數(shù)法(活菌計(jì)數(shù)法)

惟一的氮源(選擇墻氨，氨使培養(yǎng)基，

①原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌，通過

養(yǎng)基、固體培養(yǎng)基)i堿性增高，pHl

統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。升高

②計(jì)算公式：每克樣品中的菌株數(shù)=(C+V)XM,其中，C代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)，V|

代表涂布平板時所用的稀釋液的體積(mL),M代表稀釋倍數(shù)。

I③操作：設(shè)置重復(fù)組，增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說服力與準(zhǔn)確性。同時為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30-300;

的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。

菊花的組織培養(yǎng)

溫度:18~22℃

光照：在初期菊花的組織培養(yǎng)需光照，月季的花藥培養(yǎng)不需光照（有利愈傷組織

形成），二者后期均需要光照（有利葉綠素形成和光合作用）

注意：生長素和細(xì)胞分裂素的使用

使用順序不同T結(jié)果不同

（先生長素，后細(xì)胞分裂素：有利于細(xì)胞分裂，但不分化

先細(xì)胞分裂素，后生長素：細(xì)胞既分裂也分化

材料：植物的種類、年齡、保存時間

同時使用：分化頻率提高）

消毒原因：大部分來自田間，帶有大量病毒、

用量比例不同T發(fā)育方向不同

細(xì)菌

（高：利用根的分化，抑制芽的形成

菊花莖段消毒：所用消毒劑為體積分?jǐn)?shù)為

低：利用芽的分化，抑制根的形成注意：培養(yǎng)一株完整的試管苗，必須

70%的酒精和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%的氯化

適中：促進(jìn)愈傷--組--織---的生長）先進(jìn)行生芽培養(yǎng)，然后進(jìn)行生根培

汞溶液，所使用的清洗液是無菌水。A養(yǎng)，如果順序顛倒，先誘導(dǎo)生根，

注意：不同植株或同一植株的不同部位，所

果膠酶在果汁生產(chǎn)中的作用

一、果膠酶的組成和作用：包括多聚半乳糖醛酸酶、果膠分解酶、果膠酯酶等。果膠酶能分解果膠，瓦

解植物的細(xì)胞壁及胞間層。其實(shí)質(zhì)是果膠分解成可溶性的半乳糖醛酸。

注意：①果膠酶是分解果膠的一類酶的總稱，不是一種酶。②植物、霉菌、酵母菌等細(xì)胞均能產(chǎn)

生果膠酶，但通常動物細(xì)胞不產(chǎn)生果膠酶。

③在植物細(xì)胞工程中，應(yīng)用纖維素酶和果膠酶來破壞細(xì)胞壁，獲得原生質(zhì)體。

二、探究溫度對果膠酶活性的影響

(1)實(shí)驗(yàn)原理：果膠酶活性受溫度影響，處于最適溫度時，活性最高；低于或高于最適溫度，酶活性受

到抑制。即果肉的出汁率、果汁的澄清度與果膠酶的活性大小成正比。

(2)設(shè)計(jì)思路：設(shè)置一系列梯度溫度，從中選出酶活性最高的溫度，然后再以該溫度為中心，縮小溫度

梯度向兩個方面各設(shè)置梯度溫度，以進(jìn)一步確定最適溫度范圍。所選擇的溫度只能接近

最適溫度，但不一定就是最適溫度。

(3)實(shí)驗(yàn)操作流程及注意事項(xiàng)

確定溫度梯度一探討控制溫度的方法和措施

設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案ri

LL確定水果的種類一確定制備果汁的方法一確定實(shí)驗(yàn)用的水果量一確定果膠酶的量一探討測定果膠酶活性的方法：

I制備水果泥I-------4匪S7母巢「爵麗葡葡尊永窠部可以作為反的廠永巢示甬泰「茹甬軍巢為原福廠二酸時按每不用辱天人

「1的蘋果加水100?200mL的比例進(jìn)行攪拌，獲得稀的蘋果泥

I制備臬膠酶|

I水果近、果膠酶分別水浴保溫卜-A原因：將果泥和果膠酶分裝在不同的試管中恒溫處理，可以保證底物和酶在混合時的溫度是相同的,

避免了果泥和果膠酶混合時影響混合物的溫度，從而影響果膠酶活性的問題

水果泥、果膠酶混合水浴保溫--A原餐髓而巢肢演羌芬缸反應(yīng)曲面］

?過濾;出果汁T蕾藍(lán)蠹堞漏

y通過測定濾出的蘋果汁的體積大小來判斷果膠酶活性的高低原因：

I記錄窠汁量4果膠酶將果膠分解為小分子物質(zhì)，小分子物質(zhì)可以通過濾紙，因此蘋果汁的體積大小反應(yīng)了果I

膠酶的催化分解果膠的能力。在不同的溫度和pH下，果膠酶的活性越大，蘋果汁的體積就越大|

改變不同溫度后重復(fù)上面實(shí)驗(yàn)（也可同時進(jìn)行不同溫度的實(shí)驗(yàn)）I--A

1自變量：溫度（應(yīng)控制為唯一）對照：相互對照

［無關(guān)變量：果泥量、果膠酶的濃度和用量、水浴時間和混合物的

,記錄表格設(shè)計(jì)溫度/℃102030405060pH等所有其他條件（應(yīng)控制為相同）

果汁量/mL

注意：①每個探究實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)，都要遵循實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的一般原則，特別是單因子變量控制原則。

②每個探究實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)思路希是大梯度差值尋找最適范圍，再小梯度差值選出最適溫度、pH或酶用量。

③如果隨酶濃度增加，果汁體積也增大，說明酶用量不足；當(dāng)酶用量達(dá)一定值時，再增加酶用量，果汁

體積不變，則說明這個值就是酶的最適用量。

④如果變量（溫度、pH、酶濃度）梯度無法滿足實(shí)驗(yàn)，即出現(xiàn)過高、過低等現(xiàn)象，則應(yīng)及時調(diào)整實(shí)驗(yàn)。

血紅蛋白的提取和分離

一、實(shí)驗(yàn)原理：蛋白質(zhì)的物化理性質(zhì)：形狀、大小、電荷性質(zhì)和多少、溶解度、吸附性質(zhì)、親和力等千

差萬別，由此提取和分離各種蛋白質(zhì)。

1.凝膠色譜法（分配色譜法）：

（1）原理：分子量大的分子通過多孔凝膠顆粒的間隙，路程短，流動快；分子量小的分子穿過多

孔凝膠顆粒內(nèi)部，路程長，流動慢。

（2）凝膠材料：多孔性，多糖類化合物，如葡聚糖、瓊脂糖。鏟/0/8

（3）分離過程：混合物上柱一洗脫一大分子流動快、小分子流動慢一收集大分子一收集小分子洗脫：

從色譜柱上端不斷注入緩沖液，促使蛋白質(zhì)分子的差速流動。

（4）作用：分離蛋白質(zhì)，測定生物大分子分子量，蛋白質(zhì)的脫鹽等。

2.緩沖溶液

（1）原理：由弱酸和相應(yīng)的強(qiáng)堿弱酸鹽組成（如H2c。3—NaHCCh,NaH2PCU/NazHPCU等），調(diào)節(jié)酸和

鹽的用量，可配制不同pH的緩沖液。

(2)緩沖液作用：抵制外界酸、堿對溶液pH的干擾而保持pH穩(wěn)定。

3.凝膠電泳法：

(1)原理：不同蛋白質(zhì)的帶電性質(zhì)、電量、形狀和大小不同，在電場中受到的作用力大小、方向、

阻力不同，導(dǎo)致不同蛋白質(zhì)在電場中的運(yùn)動方向和運(yùn)動速度不同。

(2)分離方法：瓊脂糖凝膠電泳、聚丙烯酰胺凝膠電泳等。

(3)分離過程：在一定pH下，使蛋白質(zhì)基團(tuán)帶上正電或負(fù)電；加入帶負(fù)電荷多的SDS,形成“蛋白

質(zhì)一SDS復(fù)合物”，使蛋白質(zhì)遷移速率僅取決于分子大小。

二、實(shí)驗(yàn)步驟及注意事項(xiàng)

應(yīng)程「靛藕落痂杼檬酸輛防正血襁胡二靛逮短肝兩面前正百細(xì)麗沅頡二獺血五象二④1踵直永薇［防紅

紅細(xì)胞___」細(xì)胞破裂）一緩慢攪拌（防止紅細(xì)胞破裂釋）⑤低速短時離心一⑥重復(fù)洗滌三次一⑦上清液中無黃色，表明紅細(xì)胞已

洗滌干凈。

的洗滌［目的：除去雜蛋白

1.樣品處理

血紅蛋白|過程：加蒸儲水一加40%體積的甲苯一磁力攪拌器攪拌

目的：紅細(xì)胞破裂，釋放出血紅蛋白

的釋放.|注意：加入蒸儲水后紅細(xì)胞液體積與原血液體積要相同。加入甲苯的目的是溶解細(xì)胞膜，有利于血紅蛋白的釋放和分離：

1過福：離心（2000r/min）

分離血紅|目的：分離血紅蛋白和其他雜質(zhì)

第層（最上層）：甲苯層（無色透明）第層（中上層）：脂溶性物質(zhì)的沉淀層（白色薄層固體）

蛋白溶液結(jié)果12

第3層（中下層）：血紅蛋白的水溶液層（紅色透明液體）第4層（最下層）：雜質(zhì)的沉淀層（暗紅色）

2.粗分離

源理：透析袋能使小分子自由進(jìn)出，而將大分子保留在袋內(nèi)

透析--［過程：血紅蛋白溶液裝入透析袋一將透析袋放入磷酸緩沖液中一透析12h?

怛的：除去樣品中分子量較小的雜質(zhì)或用于更換樣品的緩沖液|

修竦「面正館譜桂系直面比在芟弼二曩埴幅漏脛翻液二測I曩域T二族潘語皈一便海膠頌曝藥

要求：緊密、均勻（否則，會在色譜柱內(nèi)形成無效的空隙，使本該進(jìn)入凝膠內(nèi)部的樣品分子從這些空隙中通過，攪亂洗脫液的

凝膠色譜柱流動次序，影響分離的效果）

裝填裝填成功檢測：①凝膠是一種半透明的介質(zhì)，可在凝膠柱旁放一支與凝膠柱垂直的日光燈，檢查凝膠是否裝填得均勻。

②加入大分子的有色物質(zhì)，觀察色帶移動是否均勻、狹窄、平整。如紋路或是氣泡，輕輕敲打柱體以消除氣泡，否則重

新裝柱。

調(diào)節(jié)緩沖液面卜-?肝并街i桂下襦的流曲ET便桂丙源膠而王的凌沛液夔廛下晦到耳硬膠而乖弄「奚麗田五

而破葡透析后麗前曾靡環(huán)綴稼麗畫1廨麗麻廠加S后7幣并下端由瓦一便癢鬲麗麻凝丙；等詢免至函

加入蛋白質(zhì)樣品卜一：入藩膠層后,關(guān)閉出口

調(diào)節(jié)緩沖液面I------H加入20mmol/L的磷酸緩沖液到適當(dāng)高度1

胡蘿卜素的提取

一、胡蘿卜素基礎(chǔ)知識

1.原理：根據(jù)胡蘿卜素易溶于有機(jī)溶劑的特點(diǎn)，可采取有機(jī)溶劑萃取的方法來提取胡蘿卜素。即將粉

碎、干燥的植物原料用有機(jī)溶劑浸泡，使胡蘿卜素溶解在有機(jī)溶劑中，再蒸發(fā)出有機(jī)溶劑可

獲得。

2.萃取劑的選擇

(1)有機(jī)溶劑的分類：分為水溶性(如乙醇和丙酮)和水不溶性(如石油醴、乙酸乙酯、乙酸、苯、

四氯化碳)兩類。多數(shù)對人體有一定毒性。

(2)選取萃取胡蘿卜素的有機(jī)溶劑的原則

①具有較高的熔點(diǎn)，能夠充分溶解胡蘿卜素，并且不與水混溶；②萃取效率高；③對人無毒、不易

燃、易與產(chǎn)品分離、不影響產(chǎn)品質(zhì)量

萃取胡蘿卜素的有機(jī)溶劑應(yīng)該具有較高的沸點(diǎn)，能夠充分溶解胡蘿卜素且不與水混溶。另外，還要

考慮對人體是否有毒性等安全問題。因乙醛的沸點(diǎn)較低，苯和四氯化碳對人體有毒性，所以本實(shí)驗(yàn)選用

石油醴或乙酸乙酯作為萃取劑。

注意：

二、操作流程及注意:價選擇干燥的濾紙，為防止操作時濾紙的污染，應(yīng)盡量避免用手直接接

觸濾紙，可以戴手套進(jìn)行操作

您點(diǎn)樣時應(yīng)注意點(diǎn)樣斑點(diǎn)不能太大（直徑應(yīng)小于0.5cm）,如果用吹風(fēng)機(jī)

|目禹：除王看抗溶劑蓑宣：塞同裝亶吹干，溫度不宜太高，否則斑點(diǎn)會變黃

目的：除去水分

卜主意：①不能明火加熱⑶卷紙時注意濾紙兩邊不能互相接觸，以免因毛細(xì)現(xiàn)象導(dǎo)致溶劑沿濾紙

注意：控制溫度、

②收集瓶口可用錫箔或牛皮紙遮蓋1兩邊的移動加性，溶劑前沿不齊，影響效果________________________

時間

胡蘿卜粉碎干燥萃取過濾濃縮胡蘿卜素胡蘿卜素粗品的鑒定

I--1-

|目的：便于胡蘿卜素i歸的：使胡蘿卜素充分溶解11目的:i方法：紙層析法，

能充分溶解;1注意：①不能明火加熱饞去顆粒］除理：混合物各組分在層析液中的溶解度不同，隨層析液在濾紙上的擴(kuò)散速度不同，溶解度大的

j注意：顆粒要小②冷凝回流，防萃取1匿罡曳」隨層析液在濾紙上的擴(kuò)散速度快，反之則慢，這樣，同一種物質(zhì)在濾紙上的擴(kuò)散速度相同,

最終位置也相同。

影響因素：主要是萃取劑的流程:量作基線:下端距底邊2cm處劃基線，在基線上取A、B、C、D四個點(diǎn)

性質(zhì)和量；其次是原料對照點(diǎn)樣:在A、D點(diǎn)點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)樣品，B、C點(diǎn)點(diǎn)提取樣品

顆粒的大小、緊密程度、干燥層析:吹干濾紙溶劑，放入層析容器中層析

含水量、萃取的溫度、對比觀察:對比觀察樣品色素點(diǎn)與標(biāo)準(zhǔn)色素點(diǎn)的異同。

萃取時間的長短等結(jié)果分析：如果萃取樣品中出現(xiàn)了和標(biāo)準(zhǔn)樣品一樣的層析帶，說明提取胡蘿卜素的實(shí)驗(yàn)成功。由

于提取物中含有雜質(zhì)，萃取樣品的顏色可能比標(biāo)準(zhǔn)樣品的顏色淺，我們也可以通過顏

色的比較，初步確定提取的胡蘿卜素的量。

2022年1月January

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