示蹤技術(shù)分類課件

示蹤技術(shù)分類同位素（放和非）

非同位素（放和非）

1.放射性核素…（1923.Hevesy大豆-鉛）(藥物動(dòng)力,酶促…..)2.穩(wěn)定性核素…3.免疫酶…4.生物素-親合素系統(tǒng)5.免疫熒光…6.重金屬…(鐵蛋白…膠體金…)7.半抗原標(biāo)記…8.稀土元素…(鑭系熒光免疫…元素:銪Eu鋱Tb釤Sm鏑Dy/15種)9.化學(xué)發(fā)光免疫…示蹤技術(shù)分類

第三章放射性示蹤技術(shù)

利用放射性物質(zhì)(元素或化合物)追蹤被研究物質(zhì)的行為、狀態(tài)、分布、吸收、累積、轉(zhuǎn)化、數(shù)量等，以達(dá)到科學(xué)研究之目的的技術(shù)方法。示蹤技術(shù)分類放射性同位素示蹤法幾個(gè)重要概念

1、

同位素示蹤法（isotopetracers）

2、

示蹤劑（Tracer）

3、

被示蹤物（Tracer）

4、

示蹤平衡（Tracerequilibrium）

5.放射性強(qiáng)度,活度（Radioactivity）A

示蹤技術(shù)分類6、

比強(qiáng)度（Specificactivity）a7、計(jì)數(shù)率（Countrate）r8、

本底計(jì)數(shù)率（Backgroundrate）rb9、

凈計(jì)數(shù)率（Netcountrate）rn10、計(jì)數(shù)效率（Countingefficienty）E示蹤技術(shù)分類

一、

放射性示蹤法原理和特點(diǎn)

1、

原理：物理性質(zhì)的可探測(cè)性化學(xué)性質(zhì)的相同性生物代謝中無異常變化

示蹤技術(shù)分類2、

特點(diǎn)：

1.靈敏度高

化學(xué)分析法：一般10-6g

光譜法：10-10—10-12g

示蹤法：10-14—10-18g例32P：A(Bq)3.7×104

質(zhì)量（g）

3.5×10-12

很容易測(cè)量3.7Bq(=222dpmLSC的rb<10dpm)示蹤技術(shù)分類2.測(cè)量方法簡(jiǎn)便：活體、鮮樣、干樣測(cè)量…3.合乎生理?xiàng)l件4.可分辨出原有的核素和新加入的核素5.可準(zhǔn)確定位示蹤技術(shù)分類

二

、放射性同位素示蹤法的工作程序

1、試驗(yàn)設(shè)計(jì)

2、示蹤劑準(zhǔn)備

3、供試材料的準(zhǔn)備

4、示蹤劑引入試驗(yàn)體系和管理

5、試樣采集和預(yù)處理

6、測(cè)樣的制備

7、試樣的放射性測(cè)量

8、數(shù)據(jù)處理

9、結(jié)果分析及報(bào)告

10、放射性廢棄物處理

示蹤技術(shù)分類

三、農(nóng)業(yè)上常用放射性核素制備

天然核反應(yīng)堆核裂變產(chǎn)物中子源放射性核素分離濃縮標(biāo)記化合物（供示蹤用）輻射源（供輻照用）例：63Li+10n→He+3H（反應(yīng)堆）

32S（n、p）32P

35cl(n、p)35S

45Se(n、p)45Ca示蹤技術(shù)分類四、示蹤劑選擇：

1．影響因子：T1/2射線的種類E…

常用核素：32P、14C、3H、45Ca、35S、65Zn、33P等十余種。

2.標(biāo)記位置：注意標(biāo)記化合物

示蹤技術(shù)分類

3．用量估算：原則：保證精確度：最低r>3—5rb，無輻射效應(yīng)影響因子：①稀釋度②吸收率③分布的不均勻性④儀器效率，測(cè)量時(shí)間示蹤技術(shù)分類4、適當(dāng)?shù)摹扒绑w”：（特別是化合物）

14C、3H—氨基酸→蛋白質(zhì)

3H—TdR(胸腺嘧啶核苷)→DNA14C—腺嘌呤→RNA（DNA、RNA也可用32P正磷酸鹽作前體）

35S—甲硫氨酸（半胱氨酸）培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞（哺乳）。示蹤技術(shù)分類5、生物學(xué)研究中常放射性核素核素同位素T1/2β-E能（Mev）3H1H、2H、3H12.4y0.01814C8C—18C5720y0.15532P29P—34P14.3d1.7133P24.8d0.2735S31S—37S87.1d0.1745Ca40Ca-48Ca_152d0.25465Zn64Zn-70Zn250d0.315示蹤技術(shù)分類五．放射性制劑的開瓶/分裝1．詳查說明書2．開瓶分裝：即mci/ml→μci/ml(稀釋)

a)

由公式：a1v1→a0v0a：比強(qiáng)v：質(zhì)量或體積

示蹤技術(shù)分類b)金屬物質(zhì)稀釋：如：65Zn：Hcl過量溶解后應(yīng)用NaOH中和pH值。注意：大量稀釋時(shí)應(yīng)加載體或反載體。

示蹤技術(shù)分類六．放射性衰變的校正

在下述二種情況需校正：

●從出廠→開始使用

●試驗(yàn)過程中，結(jié)束：經(jīng)過t1、t2……

示蹤技術(shù)分類校正方法：

1、由T推算:1T2T3T…2、由At=Ao·e-λt查表

3、由Ao/At=eλt=e0.693t/T

令K=e0.693t/T（由此得K值表）則K=Ao/At(K值法)At=AO/K示蹤技術(shù)分類

放射性衰變表

t/Te-λtK0.960.51411.94510.980.50701.97241.000.5000

2.0000

t：一個(gè)變量

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七、放

射性制劑引入生物體

1．一般原則：

a)試驗(yàn)對(duì)象生長(zhǎng)正常一致。

b)

設(shè)置足夠的重復(fù)。

c)

防污染的管理措施。

d)

滿足生物生長(zhǎng)的水、氣、光、溫等。個(gè)別生物需進(jìn)行試驗(yàn)前馴化、以適應(yīng)試驗(yàn)條件。

示蹤技術(shù)分類

動(dòng)物試驗(yàn)準(zhǔn)備收集放射性廢棄物的裝置。防止飼料和類便的相互污染。大劑量操作，注意人身安全。因特殊試驗(yàn)，喂飲時(shí)應(yīng)小心。妥善處理放射性飼料、排泄物、尸體等。

示蹤技術(shù)分類2．示蹤劑引入方法：●植物：（1）氣體示蹤劑引入方法

A、

植物營(yíng)養(yǎng)室。

B、葉室（多用14Co2的引入等）。

(2）液體示蹤劑引入方法：

A、噴霧法B、注射法

C、點(diǎn)滴法D、涂抹法

E、紙粘法F、土培、水培、沙培法

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（3）固體示蹤劑引入方法：

A、

溶解成液體，如上法引入。

B、

土培、水培、沙培法（地下部分）。

C、大田施肥。

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●動(dòng)物：

A、注射法：皮下、肌肉、腹腔、靜脈注射。

B、口腔引入法；食物、水、胃管、投丸。

C、吸入法：通過呼吸道、易揮發(fā)示蹤劑。

D、涂布法。

E、

噴涂法。

F、扦入法：將60Co、182Ta、226Ra金屬絲扦入生物體。

示蹤技術(shù)分類示蹤技術(shù)分類示蹤技術(shù)分類示蹤技術(shù)分類示蹤技術(shù)分類示蹤技術(shù)分類董p134

單作

CK間作示蹤技術(shù)分類示蹤技術(shù)分類

3．引入量的估算（逆推法）由本底：r1>3-5rbE：由儀器計(jì)數(shù)效率：r1÷E=r2X%：生物體內(nèi)稀釋度：r2÷X%=r3

Y%：在生物體內(nèi)不均勻性：r3÷Y%=r4Z%：同位素利用率：r4÷Z%=r5衰變因素：r5=A/K查K值表A；引入量注：不同試驗(yàn)對(duì)象有不同的影響因子。由于儀器的效果不一樣等，數(shù)據(jù)也會(huì)有變化。

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植物：土培：200-400μCi/Kg土水培：〈200μCi/L.危害劑量：>500μCi/Kg土（禾本科）

示蹤技術(shù)分類

動(dòng)物小白鼠：131I：9μCi/g

32P：0.8μCi/g

24Na：0.7μCi/g

89Sr：0.5μCi/g孑孓培養(yǎng)液：32P：0.5μCi/ml

示蹤技術(shù)分類示蹤技術(shù)分類示蹤技術(shù)分類

植物營(yíng)養(yǎng)室中14Co2計(jì)算例：已知：營(yíng)養(yǎng)室總體積V=2L，已有Na214CO3a=4μCi/ml要求：營(yíng)養(yǎng)室內(nèi)初始比強(qiáng)度為5μCi/L，CO2濃度為1%。問：需用Na2CO3？Na214Co3？解：∵V=2L∴Co2總體積為V×1%=0.02L?！?LCo2重1.88g(氣壓760mm汞柱、氣溫20℃)∴0.02LCo2重0.02×1.88=0.0376g示蹤技術(shù)分類

由反應(yīng)式：

Na2CO3+H2SO4=Na2SO4+CO2+H2O10644x0.0376∴X=0.09g(即為使用Na2CO3的量)∵a=5μCi/ml（由要求）∴營(yíng)養(yǎng)室需用：2L×5=10μCi10uCi÷4μCi/ml=2.5ml(取Na214CO3的體積)

最后再算出H2SO4用量（過量），通常用乳酸反應(yīng)。

示蹤技術(shù)分類八、

放射性試驗(yàn)材料管理

1、

普通管理制度。

2、放射性標(biāo)志。

示蹤技術(shù)分類九、

樣品的采集和制備

1、

樣品的采集：代表性減少操作誤差防止相互污染

示蹤技術(shù)分類

2、

制備測(cè)樣的要求：制備手續(xù)簡(jiǎn)單、安全。盡可能高的計(jì)數(shù)率。樣品均勻一致。便于保存。示蹤技術(shù)分類

3、

制樣方法：（1）活體：固定部位、固定距離、固定面積。

（2）

鮮樣：打孔法、取液法、勻漿法。（3）

干粉法：70-80℃烘干粉碎稱量。（4）

燃燒法：C、H→Co2、H2O（5）

消解法：使用強(qiáng)酸、強(qiáng)堿消化。（6）

灰化法：濃縮樣品。（7）提取分離法……示蹤技術(shù)分類

液閃樣品的幾種制樣形式干灰化法均相樣品濕灰化法樣品乳濁液樣品（使用乳化劑）非均相樣品懸浮顆粒樣品（使用凝膠劑、超聲波）

固相樣品（濾紙吸附等）

示蹤技術(shù)分類

例1燃燒法：樣品量(mg)耗氧量(ml)乙醇胺(ml)(吸收劑)5025021005005示蹤技術(shù)分類示蹤技術(shù)分類

例2、消解法：

(適用于3H、14C、35S、45Ca、32P等)樣品量(mg)Hclo4(ml)H2O2(ml)溫度(℃)時(shí)間

100.20.470-801h

完全溶解后，還可加助溶劑（乙醇胺、無水乙醇）

示蹤技術(shù)分類

注意：

1.放射性樣品制成后，加入15-20ml閃爍液則稱液體閃爍樣品。

2.切倫科夫計(jì)數(shù)則是放射性樣品制成后，加入15-20ml蒸餾水即成。

示蹤技術(shù)分類示蹤技術(shù)分類示蹤技術(shù)分類

十、

測(cè)量結(jié)果表示

1、

相對(duì)測(cè)量：計(jì)數(shù)率（Countrate）rcpm/g(生物樣品)