中藥復(fù)方治療緩慢性心律失常的機(jī)制與藥效研究

中藥復(fù)方治療緩慢性心律失常的機(jī)制與藥效研究

研究背景技術(shù)路線研究成果創(chuàng)新點(diǎn)社會(huì)經(jīng)濟(jì)效益匯報(bào)提綱研究背景我國(guó)目前已進(jìn)入老齡化社會(huì)。緩慢性心律失常作為心臟傳導(dǎo)系統(tǒng)退行性改變，隨著老齡化的進(jìn)展，成為老年人群中的常見病、多發(fā)病。占心臟性猝死總數(shù)的17%--20%。緩慢性心律失常的治療在心血管藥物藥物研發(fā)中是一個(gè)遲后的領(lǐng)域。目前尚無治療緩慢性心律失常長(zhǎng)期應(yīng)用的口服西藥。心臟起搏治療因其有創(chuàng)及高額費(fèi)用使很多患者難以接受。中藥技術(shù)路線檢索文獻(xiàn)778篇建立數(shù)據(jù)庫關(guān)聯(lián)規(guī)則聚類分析頻數(shù)統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)挖掘中藥-證型聚類分析中藥-證型聚類分析結(jié)果三維示意圖數(shù)據(jù)挖掘脈象-中藥關(guān)聯(lián)數(shù)據(jù)挖掘舌苔-中藥關(guān)聯(lián)數(shù)據(jù)挖掘證型-中藥關(guān)聯(lián)數(shù)據(jù)挖掘數(shù)據(jù)挖掘證型頻數(shù)分布癥狀頻數(shù)分布中藥頻數(shù)分布舌苔頻數(shù)分布數(shù)據(jù)挖掘脈象頻數(shù)分布數(shù)據(jù)挖掘頻數(shù)最高排列癥狀：心悸脈象：遲脈證型：心腎陽虛方劑：麻黃附子細(xì)辛湯中藥：附子溫陽補(bǔ)腎研究依據(jù)心腎陽虛麻黃附子細(xì)辛湯參仙升脈口服液藥效機(jī)制實(shí)驗(yàn)研究與空白組相比,模型組大鼠心率降低(P<0.01)；與模型組相比,參仙升脈組大鼠心率明顯升高(P<0.01)。藥效研究與空白對(duì)照組相比，模型組大鼠心率降低（p＜0.01），左室射血分?jǐn)?shù)明顯增加（p＜0.01）；與模型組比較，參仙升脈組心率升高（p＜0.01），射血分?jǐn)?shù)沒有明顯變化，心輸出量增加。組別N左室舒張末內(nèi)徑（mm）左室收縮末內(nèi)徑（mm）左室射血分?jǐn)?shù)（%）每搏量(ml)心輸出量(ml/min)空白對(duì)照組127.21±0.183.25±0.22800.32±0.0472.21±3.92模型組127.15±0.243.03±0.2878△0.31±0.0568.40±4.01△參仙升脈組127.18±0.223.22±0.1281

0.31±0.0771.44±4.12△*藥效研究實(shí)驗(yàn)研究臨床研究藥效研究總體健康情感職能臨床研究藥效研究中藥治療優(yōu)于起搏治療大鼠Na+-K+-ATP酶的活性與空白對(duì)照組相比，模型組大鼠Na+-K+-ATP酶的活性明顯降低（p＜0.01）；與模型組相比，參仙升脈組大鼠Na+-K+-ATP酶的活性明顯升高（p＜0.05）。組別NNa+-K+-ATP酶的活性（umolPi/mgprotein/hour）空白對(duì)照組120.388±0.069模型組120.231±0.053△參仙升脈組120.303±0.056*機(jī)制研究大鼠cAMP/cGMP變化與空白對(duì)照組相比，模型組大鼠cAMP含量降低（p＜0.01），cGMP含量升高（p＜0.01，cAMP/cGMP比值降低（p＜0.01）；與模型組相比，參仙升脈組大鼠cAMP含量升高（p＜0.05），cGMP含量降低（p＜0.01），cAMP/cGMP比值升高（p＜0.01）。組別NcAMP含量（pmol/l）cGMP含量(pmol/l)cAMP/cGMP（比值）空白對(duì)照組120.510±0.1286.65±1.720.079±0.022模型組120.369±0.049△9.19±1.52△0.042±0.012△參仙升脈組120.474±0.064*6.11±1.33**0.083±0.032**機(jī)制研究大鼠心肌組織中Cx45蛋白的表達(dá)與空白組相比,模型組縫隙連接蛋白Cx45表達(dá)降低(P<0.01);與模型組相比,參仙升脈組縫隙連接蛋白Cx45表達(dá)升高(P<0.01)?機(jī)制研究免疫組化照片大鼠心肌組織中Cx45蛋白的表達(dá)機(jī)制研究大鼠左室功能變化與空白對(duì)照組相比，模型組大鼠心率降低（p＜0.01），左室射血分?jǐn)?shù)明顯增加（p＜0.01）；與模型組比較，參仙升脈組心率升高（p＜0.01），射血分?jǐn)?shù)沒有明顯變化，心輸出量增加。組別N左室舒張末內(nèi)徑（mm）左室收縮末內(nèi)徑（mm）左室射血分?jǐn)?shù)（%）每搏量(ml)心輸出量(ml/min)空白對(duì)照組127.21±0.183.25±0.22800.32±0.0472.21±3.92模型組127.15±0.243.03±0.2878△0.31±0.0568.40±4.01△參仙升脈組127.18±0.223.22±0.1281

0.31±0.0771.44±4.12△*機(jī)制研究急性單離大鼠心肌細(xì)胞[Ca2+]i變化。注：**，與給藥前相比，t-檢驗(yàn)P<0.01。麻黃堿、β-細(xì)辛醚和去甲烏藥堿對(duì)細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的影響表所示，F(xiàn)luo-3/AM熒光探針法表明，2μM麻黃堿使單離大鼠心肌細(xì)胞[Ca2+]i升高，達(dá)給藥前濃度的122.99±6.93%，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而2μMβ細(xì)辛醚和2μM去甲烏藥堿則使[Ca2+]i下降約17%和11%，與給藥前相比有顯著差異性。β-細(xì)辛醚使心肌細(xì)胞[Ca2+]i降低作用與其在皮質(zhì)神經(jīng)元的作用基本相同。機(jī)制研究鈣離子濃度

麻黃堿、β-細(xì)辛醚和去甲烏藥堿對(duì)細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的影響細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的升高來源有細(xì)胞內(nèi)鈣釋放和外鈣內(nèi)流兩途徑。當(dāng)細(xì)胞外液鈣濃度降為零時(shí)，細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度升高與外鈣內(nèi)流無關(guān)。因此，2μM麻黃堿使[Ca2+]i升高的鈣離子來源可通過細(xì)胞外液鈣離子濃度為零確定。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見下表，在細(xì)胞外鈣為零時(shí)，2μM麻黃堿不再使[Ca2+]i升高，說明麻黃堿可使細(xì)胞外鈣離子通過通道流入而使[Ca2+]i升高。

細(xì)胞外液鈣濃度變化對(duì)2μM麻黃堿在單離大鼠心肌細(xì)胞引起[Ca2+]i變化的影響注：**，P<0.01，與給藥前相比，經(jīng)t-檢驗(yàn)呈顯著性差異。機(jī)制研究鈣離子濃度麻黃堿、β細(xì)辛醚和去甲烏藥堿對(duì)高電壓依賴性鈣離子通道的影響全細(xì)胞電壓鉗法測(cè)定心肌細(xì)胞高電壓依賴性鈣離子電流。設(shè)定保持電位-40mV，指令電壓為-50～+50mV，步階電壓10mV，刺激頻率為2Hz，刺激間隔為6s，記錄ICa。為消除細(xì)胞間誤差，電流值以電流密度（pA/pF）表示。2μM麻黃堿顯著提高了心肌細(xì)胞約30%ICa峰電流密度，由給藥前的1.65±0.08pA/pF升高至2.15±0.27pA/pF，與[Ca2+]i變化呈相同趨勢(shì)，說明麻黃堿對(duì)于鈣離子流動(dòng)的影響在于可使細(xì)胞膜電壓依賴性的鈣通道開放，鈣離子大量流入細(xì)胞內(nèi)，從而使[Ca2+]i升高。而2μMβ-細(xì)辛醚和2μM去甲烏藥堿并未提高心肌細(xì)胞ICa峰電流密度，相反有下降趨勢(shì)，也與其對(duì)[Ca2+]i的影響呈同向，但尚未有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。設(shè)定保持電位-40mV，指令電壓為-50~+50mV，步階電壓10mV，刺激頻率為2Hz，刺激間隔為6s，記錄ICa。與給藥前相比，麻黃堿給藥后的高電壓依賴性鈣通道電流密度顯著性提高。*，P<0.05，與給藥前相比，配對(duì)t-檢驗(yàn)有顯著性差異。機(jī)制研究鈣離子通道麻黃堿、β細(xì)辛醚和去甲烏藥堿各單體給藥前后鈣離子峰電流密度變化比較2μM麻黃堿顯著性提高了峰電流密度，而2μM細(xì)辛醚或2μM去甲烏藥堿沒有提高鈣通道峰電流密度，反呈下降趨勢(shì)，但尚未呈顯著性差異。與給藥前相比，*P<0.05。機(jī)制研究鈣離子峰電流密度

β細(xì)辛醚給藥前后鈉離子電流變化給藥前鈉電流基礎(chǔ)值約為29.9±3.4pA/pF，而1×10-5M細(xì)辛醚使電流降低至18.4±2.3pA/pF（n=4）。根據(jù)Student’st-test統(tǒng)計(jì)P

＜0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。機(jī)制研究鈉離子電流自律性鈉鉀ATP酶↑CAMP↑CGMP↓緩慢性心律失常中藥復(fù)方細(xì)胞活性麻黃堿β細(xì)辛醚去甲烏藥堿Cx45Ca濃度↑Na濃度↓抑制Ca超載興奮β受體CAMP/CGMP↑If離子電機(jī)械偶聯(lián)傳導(dǎo)性興奮心肌細(xì)胞↑改善傳導(dǎo)系統(tǒng)供血抑制心肌細(xì)胞凋亡延長(zhǎng)動(dòng)作電位時(shí)程機(jī)制與靶點(diǎn)本研究中應(yīng)用關(guān)聯(lián)規(guī)則、聚類分析、頻數(shù)統(tǒng)計(jì)等數(shù)據(jù)挖掘手段總結(jié)緩慢性心律失常中醫(yī)心腎陽虛為其發(fā)病之本，血脈瘀阻為發(fā)病之標(biāo)的證治規(guī)律。創(chuàng)新點(diǎn)12將中藥復(fù)方制劑與心臟起搏治療在提高心率與生活質(zhì)量改善方面做了頭對(duì)頭的比較研究，為中藥在臨床治療緩慢性心律失常的應(yīng)用提供了循證依據(jù)。創(chuàng)新點(diǎn)3在治療機(jī)制研究中發(fā)現(xiàn)中藥復(fù)方制劑對(duì)大鼠心肌細(xì)胞離子泵、縫隙連接蛋白、離子通道的影響，證實(shí)了中藥復(fù)方可以從多途徑、多環(huán)節(jié)、多靶點(diǎn)來治療緩慢性心律失常。研究中采用了目前最前沿的分子生物學(xué)研究方法—膜片鉗技術(shù)。創(chuàng)新點(diǎn)每例患者起搏治療總費(fèi)用平均在5萬元左右，使用壽命約6-8年左右，平均費(fèi)用達(dá)6500元/年推廣應(yīng)用應(yīng)用價(jià)值接受藥物治療的患者治療費(fèi)用平均約1500元/年，按此計(jì)算，應(yīng)用中藥復(fù)方治療每延緩起搏治療1年，可減少年醫(yī)療費(fèi)用5000元左右。目前在我省三所醫(yī)院統(tǒng)計(jì)年均治療病人3000例，平均降低醫(yī)療支出1500萬元。推廣應(yīng)用應(yīng)用價(jià)值預(yù)計(jì)推廣應(yīng)用后全省每年可減少醫(yī)療支出2億元。推廣應(yīng)用應(yīng)用貢獻(xiàn)緩慢性心律失常但未達(dá)到起搏器治療標(biāo)，中藥治療可延緩部分患者起搏治療的時(shí)間。達(dá)到起搏