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中華人民共和國(guó)出入境檢驗(yàn)檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)轉(zhuǎn)基因成分檢測(cè)1轉(zhuǎn)基因成分檢測(cè)本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了大豆中轉(zhuǎn)基因成分的PCR-DHPGB/T19495.7轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè)抽樣和制樣方法變性高效液相色譜技術(shù)(denaturinghigh-performanceliquidchromatography,DHPLC)是一種簡(jiǎn)腈(0.025%),DHPLC緩沖液B:TEAA(0.1mol/L,pH7.0)、乙腈(25%),DHPLC緩沖液D:乙腈26DNA提取及濃度測(cè)定驟1次；e)加入等體積預(yù)冷的異丙醇，輕輕搖晃，置于-20℃冰箱靜置30min,12000r/min離心f)棄上清液，加入70%乙醇500μL,12000r/min離心3min,去上清液，重復(fù)該步驟2次；DNA濃度=50×OD?somg/mL正向引物lectin-F:5’-CGTGGCCTCGCGATCTGACTT反向引物lectin-R:5’-CTCAGCGGCGGAGCTACAGAGGTTTTGGGGTGCCGTTT-3’。正向引物CaMV35S-F:5’-CGTGGCCTCGCGATCTGAC正向引物NOS-F:5’-CGTGGCCTCGCGATCTGACTTGAATCC正向引物CP4-F:5’-CGTGGCCTCGCGATCTGACTCCCACCGGTCCTTCATGTT-3’。反向引物CP4-R:5’-CTCAGCGG反向引物RRS-R:5’-CTCAGCGGCGGAGCTACAGATGCGAAGGATAGTGGGATTGT-3’。第一組反應(yīng)體系總體積為50μL,各成分分別為：多重PCR反應(yīng)混合液MultiplexPCRMix第二組反應(yīng)體系總體積為50μL,各成分分別為：多重PCR反應(yīng)混合液MultiplexPCRMixb)打開DHPLC控制軟件Navigator,在檢測(cè)方法中選擇DS.MultipleFragments,同時(shí)設(shè)定最大——洗脫峰為196bp,判定樣本中含有外源基因CaMV35S;——洗脫峰為184bp,判定樣本中含有外源基因NOS; 結(jié)果
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