【超聲波輔助熱水浸提法進行綠茶茶多糖的提取實驗探究9100字（論文）】

茶茶葉最早發(fā)源于中國，到現(xiàn)在已經(jīng)有著六千多年的歷史。但是把茶作為飲料來飲用是在西漢后期到三國時代，茶才成為宮廷的高級飲料，而作為普通飲料是在西晉到隋朝時期[1]。在此之前，茶葉都是當做祭品或菜來使用。到現(xiàn)在已經(jīng)發(fā)展為世界三大飲料之一。根據(jù)茶的品種以及發(fā)酵程度的不同，茶分為六大茶系，包含綠茶、白茶、黃茶、烏龍茶、紅茶、黑茶；用毛茶或精制茶再次加工而成的茶稱為再加工茶，包括花茶、果味茶、藥用保健茶、含茶飲料等[2]。茶葉有著很好的醫(yī)療效用，在唐代就有“茶藥”一詞，而宋代林洪撰寫的《山家清供》中，也有“茶，即藥也”的描述[3]。經(jīng)過現(xiàn)代科學(xué)的研究發(fā)現(xiàn)，茶有著抗癌、抗菌、預(yù)防蛀牙與食物中毒、降低血糖與高血壓的療效。隴南綠茶原料采用單芽或一芽一、二葉，產(chǎn)品具有芽葉重實、內(nèi)含豐富、高香耐泡等獨特品質(zhì)[4]。外形以扁形和卷曲形為主；扁形茶芽葉扁平，挺直光滑，呈翠綠色或黃綠色，湯色綠亮或黃綠明亮，栗香或嫩香、清香，滋味鮮爽濃醇，葉底黃綠成朵。茶葉外形緊結(jié)卷曲，色澤綠潤，湯色嫩綠明亮，香氣高長，栗香或清香，個別有天然花香，滋味爽醇，葉底黃綠柔軟[4]。隴南茶園以小葉群體種為主，由于產(chǎn)茶區(qū)緯度高、海拔高、環(huán)境清潔度高，決定了隴南茶園休養(yǎng)時間長、采摘輪次少，所產(chǎn)綠茶芽頭重實、茶多酚含量高、香高耐泡[4]。

2茶多糖及提取方法2.1茶多糖茶多糖是茶葉中具有生理活性的天然大分子物質(zhì)，茶多糖是一種酸性糖蛋白，并結(jié)合有大量的礦質(zhì)元素，稱為茶葉多糖復(fù)合物，簡稱為茶葉多糖或茶多糖（TeaPolysaccharide）[5]。其中蛋白部分主要由約20種常見的氨基酸組成，糖的部分主要由阿拉伯糖、木糖、巖藻糖、葡萄糖、半乳糖等，礦質(zhì)元素主要由鈣、鎂、鐵、錳等及少量的微量元素組成[6]。茶多糖作為天然活性物質(zhì),一直是研究的重點。通過對茶多糖進行的大量實驗研究發(fā)現(xiàn)，茶多糖對于人體來說，有著多種作用，比如：降低血糖、免疫調(diào)節(jié)、抗凝血、抑菌、抗氧化等。此外茶葉多糖還對心血管健康有一定作用。2.2茶多糖的提取方法2.2.1酶法提取在茶葉多糖的提取過程中由于酶的加入破壞了組織的細胞壁，能夠有效的使細胞中的多糖類物質(zhì)流出，以此來提高效率。當前，對于茶葉多糖的提取主要的是胰蛋白酶、纖維素酶、果膠酶、水解酶以及復(fù)合酶[7-12]。酶法提取的方式目前主要有如下4種，如圖2.1所示：圖2.1茶多糖酶法提取工藝酶作為具有催化作用的生物高分子物質(zhì)，容易被多種因素影響，如溫度、濃度以及pH值等。但是相較于其他的提取方法酶法提取反應(yīng)條件溫和，選擇性較強，有著較高的浸出率。研究發(fā)現(xiàn)，酶法提取茶多糖的溫度約為40℃~55℃，pH為4.0~5.5,添加量為0.5%左右時最優(yōu)，而胰酶的反應(yīng)環(huán)境pH約為8.0左右，相對較高[7-12]。但是，由于酶種類和添加方式不同，就會導(dǎo)致茶多糖最終的提取率以及生理活性和組成等都不相同。對于不同酶的提取研究表明，茶多糖提取最多的是果膠酶，且糖醛酸含量最低[7]。2.2.2超聲波提取法超聲波能夠產(chǎn)生空化效應(yīng)、擾動效應(yīng)、機械效應(yīng)、擊碎、攪拌、乳化、分散等多種效應(yīng)，不單可以增大物質(zhì)分子的運動頻率和速度，還可以增大溶劑的穿透力，以此來加速茶多糖進入溶劑的過程，提高提取率。超聲波提取有著效率高、操作方便、耗時短、溫度低等優(yōu)點，但是一定程度上會降低茶多糖的分子量變小，生物活性有所改變[13-16]。2.2.3微波提取法微波提取又稱為微波萃取，微波在加熱的過程中，微波會被細胞內(nèi)的水分吸收，從而產(chǎn)生熱量。致使細胞因被加熱膨脹而破裂，促進細胞內(nèi)的物質(zhì)流出。同時，還可以加速溶媒分子的滲透速度并促進提取目的成分的溶解，從而可以極大縮短提取所需時間，提高提取的效率。受益于微波提取溫度均勻且相對較低，避免了高溫引起的有效成分的分解，而大量應(yīng)用于天然成分的提取[17]。但是和超聲波提取相似的是，微波提取中茶多糖的生物活性也會有所改變[18-19]。2.2.4乙醇浸提法高濃度的乙醇不僅可以使得茶葉中的茶多糖析出沉淀，還可以使茶多酚、鞣質(zhì)、蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)析出沉淀。且在不同濃度乙醇時可以對不同物質(zhì)進行分級沉淀[20-22]。據(jù)研究發(fā)現(xiàn)浸提效果最好、提取率最高時的乙醇濃度為70%，并且蛋白含量少[22]。所以，對于茶多糖的提取可以先用高濃度乙醇進行提取茶葉中的各種大分子物質(zhì)，然后再通過熱水浸提富集茶多糖。2.2.5超臨界流體萃取作為一種新型萃取分離技術(shù)，是在上世紀六十年代左右發(fā)展起來的。流體溶劑常采用二氧化碳。采用響應(yīng)面法萃取茶籽多糖最優(yōu)參數(shù)為：時間150min、壓力45MPa、溫度60℃、夾帶劑濃度為65%[23]，在該條件下茶多糖的收率為13.23%。該方法具有低能耗、高效率、條件溫和以及污染小等優(yōu)勢，但是也有著設(shè)備昂貴和提取時間長等缺陷，當前只是用于貴重植物的有效成分的提取和制備。2.2.6反膠束萃取反膠束技術(shù)，有著操作方法簡單、選擇性高、可以進行大規(guī)模萃取的優(yōu)點。反膠束即極性基團位于膠束的內(nèi)部，而非極性基團位于膠束的外部的膠束。反膠束萃取就是利用表面活性劑在溶液中形成反膠束，從而使得蛋白以及親水性的其他物質(zhì)能夠溶解于反膠束的內(nèi)部，并且由于周圍基團的保護可以使得內(nèi)部溶解的蛋白不會失活。具有很好的應(yīng)用前景。且已有相關(guān)學(xué)者進行了研究，茶多糖的萃取率均較為良好[24]。這為反膠束萃取技術(shù)的大規(guī)模應(yīng)用奠定了堅實的根底。2.2.7協(xié)同浸提酶法提取、超臨界流體萃取、反膠束萃取、超聲波提取法、微波提取法等新技術(shù)各有優(yōu)缺點，相互之間配合提取就可以充分利用超聲波的空化效應(yīng)、酶的選擇性以及微波的內(nèi)加熱特性，就能夠充分提高茶葉多糖的提取效率。而且具備條件溫和、環(huán)保、提取率高的優(yōu)勢，具有良好的應(yīng)用前景。2.3茶多糖的精制經(jīng)過以上提取方法提取得到的茶葉粗多糖，還會存在有一些小分子化合物、單糖、寡糖、無機鹽、蛋白質(zhì)等雜質(zhì)，必需對粗多糖進行提純,除去非多糖類雜質(zhì)之后，才能再進行多糖的純化。2.3.1有機溶劑除雜質(zhì)常用有機溶劑沉淀法來對粗多糖進行精制，作為最常用的方法它采用的是多糖在有機溶劑中難以溶解的特性，多次使用乙醇或丙酮溶液進行沉淀、洗滌，就可以除去雜質(zhì)。采用乙醇進行沉淀，濃度大多為采用80%，靜止醇析后，絕大部分的多糖都能夠被沉淀析出，大多需要多次進行有機溶劑沉淀后，才能夠去除大部分雜質(zhì)。也可以在進行熱水提取之前，先采用石油醚、乙醚等溶劑進行回流浸提，再將藥渣干燥后用水或者含水乙醇對多糖進行提取。但后一種方法相對前者來說，耗費更多的溶劑和時間，所以多采用第一種方法，先對樣品提取之后，再用有機溶劑對多糖溶液進行沉淀，對多糖進行精制[17]。2.3.2透析法除雜質(zhì)透析法主要是去除粗多糖中的小分子量以及無機鹽等水溶性物質(zhì)，而多糖等大分子物質(zhì)由于分子量或溶解性等因素無法通過透析袋，所以不會被去除。透析袋的選擇通常是根據(jù)分離目的產(chǎn)物的分子量大小決定的。對于多糖來說，通常選用3000~10000Da的透析袋。在使用前，先將透析袋高溫處理2～3小時，除去其中可能含有的雜質(zhì)，再將多糖溶液放置于透析袋內(nèi)，采用水溶液進行透析。若操作時間長，且溫度適宜，則應(yīng)當注意防腐，以免霉菌生長影響實驗。對于處理多糖中的小分子量物質(zhì)以及無機鹽等水溶性物質(zhì)來說，這是一種較好的方法。2.3.3除蛋白由于蛋白質(zhì)與多糖的化學(xué)結(jié)構(gòu)、性質(zhì)相似，同樣都是強極性生物大分子物質(zhì)，所以，粗多糖中含有蛋白質(zhì)是無法避免的，因此，在多糖的提純過程中，蛋白質(zhì)必須要去除。主要的方法有：Sevage法、三氟三氯乙烷法、三氯乙酸法、酶法等。Sevage法是利用有機溶劑可以使蛋白質(zhì)變性的特點。有機溶劑一般采用氯仿和丁醇。在多糖水溶液中按順序加入氯仿、丁醇，其體積比為25:5:1?；旌虾髣×覔u勻，然后離心，而變性蛋白就處于上下兩層交界處。該方法條件簡單，多糖性質(zhì)穩(wěn)定。但是單次去除率不高，需要多處理幾次，就導(dǎo)致該方法復(fù)雜、耗時長、樣品提取率也不高，主要由于損耗高導(dǎo)致。在三氟三氯乙烷法的操作中，V(三氟三氯乙烷):V(多糖溶液)=1:1，混合后攪拌均勻,靜置沉淀，然后進行離心操作。蛋白質(zhì)就會處于溶劑層，而多糖處于水層。由于三氟三氯乙烷有著易揮發(fā)的缺點，所以不適合于大規(guī)模使用，但是該方法有著效率高的優(yōu)點。三氯乙酸法是利用了蛋白質(zhì)能夠被三氯乙酸沉淀析出的原理。在實際操作中，采用的是5%～30%的三氯乙酸。往多糖溶液中加入等量的三氯乙酸溶液，在低溫下混合，攪拌均勻，靜置沉淀，然后進行離心處理，以除去蛋白質(zhì)的膠狀沉淀。但是該方法反應(yīng)較為劇烈，對于部分多糖有著分解的作用，所以，不適合使用。但是該方法工藝簡單、效率高。酶法除蛋白是運用了酶對于蛋白質(zhì)能夠降解的性質(zhì)，就可以除去粗多糖中的絕大部分的蛋白質(zhì)。在操作中常用胰蛋白酶、木瓜蛋白酶等。在操作中，先往粗多糖溶液中加入相適宜的酶，然后調(diào)節(jié)溶液的溫度以及Ph值的方式，使其處于酶解的最佳條件下，以此來去除大部分的蛋白質(zhì)。但是，使用該方法應(yīng)當注意的是原溶液中蛋白質(zhì)的初始含量，若初始含量高，則使用該方法較為合適，但如果初始含量較低，則相當于加入了新的雜質(zhì)蛋白質(zhì)。所以，該方法不能夠徹底的去除蛋白質(zhì)。綜上所述，Sevage法、三氟三氯乙烷法、三氯乙酸法、酶法等各種方法各有利弊。所以在實際使用時，可以使用多種方式協(xié)同使用，就可以高效的把粗多糖中的蛋白質(zhì)除去。2.3.4脫色由于色素在粗多糖提純過程中有著很大的影響，所以色素的去除是很有必要的。對于粗多糖中色素的去除方法也有很多，比如：氧化法、吸附法、離子交換法。采用氧化法時常用氧化劑為H2O2，使用H2O2時，pH需要保持在弱堿性，若堿性過高則對于多糖的結(jié)構(gòu)會有破壞，且溶液溫度要保持在低溫狀態(tài)，否則高溫會引起多糖的分解。吸附法也是一種常用的除色素方法，吸附劑常用活性炭、硅藻土、吸附樹脂等具有吸附作用的材料，使其吸附雜質(zhì)色素從而達到對產(chǎn)品提純的要求。一般廣泛使用最多的吸附劑是活性炭和吸附樹脂，在使用中應(yīng)當對溫度、時間、用量等影響因素進行嚴格把控。離子交換法不僅可以除去色素，還可以利用不同離子的強度不同這一特性對其進行分離，這使得離子交換法成為了一種最為常用的方法。王松柏等通過研究不同樹脂對防風粗多糖的脫色效果，實驗結(jié)果表明陰離子大孔交換樹脂D280和D390的效果最佳，其脫色率分別達到了84.3%和76.4%[25]。除去以上幾種方法外，對粗多糖進行脫色處理還有金屬配合法、金屬絡(luò)合物法、聚酰胺柱色譜等方法，在具體應(yīng)用時應(yīng)根據(jù)實際情況需求來選擇最適宜的脫色方法。2.4茶多糖的純化2.4.1膜分離技術(shù)膜分離是1960年發(fā)展起來的，作為一種分離的新技術(shù)，它可以對不同產(chǎn)品中不同組分的氣相或液相進行分離或者富集，而它的推動力來源則是外界的能量或者溶液本身的化學(xué)位差。有著效率高、能耗低、方法簡單、污染低且不會使目標產(chǎn)物發(fā)生相變等優(yōu)勢。在環(huán)境保護以及水處理等相關(guān)領(lǐng)域得到了普遍的使用，已經(jīng)成為了現(xiàn)今分離學(xué)科中最為重要的辦法之一。采用膜分離技術(shù)進行分離或者富集，沒有有機溶劑的污染、能耗低、方法簡單，具有良好的工業(yè)化應(yīng)用前景。2.4.2吸附樹脂技術(shù)吸附樹脂法是以大孔吸附樹脂等不同樹脂或聚合物作為載體，對產(chǎn)品中的不同組分分別吸附，并且進行一定的篩選。以此來對植物中的天然成分進行分離以及提純。有著低能耗、可再生、無污染等優(yōu)勢，現(xiàn)如今已普遍應(yīng)用于環(huán)保、合成化學(xué)、生物醫(yī)藥等相關(guān)領(lǐng)域。與傳統(tǒng)方式的脫色脫蛋白辦法相比，吸附樹脂技術(shù)對于去除粗茶多糖中的色素和蛋白質(zhì)有著很大的優(yōu)勢，并且吸附樹脂法的工藝簡單、生產(chǎn)周期短，還能夠保留多糖的生理活性，合乎綠色化學(xué)的要求。2.4.3柱色譜法柱色譜法，又稱為柱層析法，不同組分上柱吸附后經(jīng)等度或梯度洗脫后，就可以得到純度較高的不同組分，柱填料與洗脫劑的選擇對于組分的分離有著很大的影響。對于茶多糖分離的柱填料國內(nèi)外主要是分配層析的纖維素和凝膠柱層析的Sephadex及Sepharose，然而受限于高額的成本和較低的提取率，該方法目前僅用在實驗室來制備不同純度的茶多糖，用以對其結(jié)構(gòu)和生理活性的研究[26]。

3實驗材料、方法及實驗設(shè)計3.1材料研究材料：市售隴南綠茶實驗主要試劑：無水乙醇；5%苯酚溶液；濃硫酸。實驗主要儀器：FA1004型電子天平（上海良平儀器儀表有限公司）；UCM-10型超聲波清洗機（上海皓莊儀器有限公司）；2L-ARE型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海皓莊儀器有限公司）；TDL80-2B臺式離心機（上海安亭科學(xué)儀器廠制造）；723N可見分光光度計（上海儀電分析儀器有限公司）。GZX-GF101-3-S電熱恒溫鼓風干燥箱（上海躍進醫(yī)療器械有限公司）；3.2實驗方法3.2.1方法采用超聲波輔助熱水浸提法進行茶多糖的提取，使用無水乙醇對茶多糖進行析出沉淀。對提取率的測定采用苯酚-硫酸法進行測定。3.2.2提取工藝流程茶葉→粉碎→超聲波輔助50℃溫水恒溫浸提→減壓濃縮→加入無水乙醇沉淀→離心分離得沉淀物→無水乙醇洗滌2次→取沉淀烘干→粗茶多糖提取物3.3實驗設(shè)計3.3.1單因素實驗設(shè)計單因素實驗取離心時間、超聲時間、沉淀劑用量三因素作為單因素設(shè)計變量，以茶多糖得率為指標討論各因素對茶多糖提取率的影響。單因素實驗設(shè)計如下：離心時間對茶多糖提取率的影響：在其他條件相同的情況下，超聲時間設(shè)置為35min、沉淀劑用量設(shè)置為1:2，離心時間分別設(shè)置為3min、6min、10min，討論離心時間對茶多糖提取率的影響。設(shè)計結(jié)果匯總于表3.1。表3.1離心時間對茶多糖提取率的影響編號離心時間(A)/min超聲時間(B)/min沉淀劑用量(C)13351:226351:2310351:2超聲時間對茶多糖提取率的影響：其他條件相同，離心時間設(shè)置為6min、沉淀劑用量設(shè)置為1:2，超聲時間分別設(shè)置為35min，45min，55min，討論超聲時間對茶多糖提取率的影響。設(shè)計結(jié)果匯總于表3.2。表3.2超聲時間對茶多糖提取率的影響編號離心時間(A)/min超聲時間(B)/min沉淀劑用量(C)16351:226451:236551:2沉淀劑用量對茶多糖提取率的影響：其他條件相同，離心時間設(shè)置為6min、超聲時間設(shè)置為35min，沉淀劑用量分別設(shè)置為1:1、1:2、1:3，討論沉淀劑用量時間對茶多糖提取率的影響。設(shè)計結(jié)果匯總于表3.3。表3.3沉淀劑用量對茶多糖提取率的影響編號離心時間(A)/min超聲時間(B)/min沉淀劑用量(C)16351:126351:236351:33.3.2正交實驗設(shè)計以單因素實驗為基礎(chǔ)，采用SPSS20.0軟件進行正交實驗設(shè)計，設(shè)計條件見表3.2，設(shè)計結(jié)果見表3.3，以茶多糖的得率作為實驗指標，來確定茶多糖提取的最佳工藝條件。表3.4茶多糖提取正交實驗設(shè)計條件水平離心時間(A)/min超聲時間(B)/min沉淀劑用量(C)13351:126451:2310551:3表3.5茶多糖提取正交實驗設(shè)計結(jié)果編號實驗因素離心時間(A)/min超聲時間(B)/min沉淀劑用量(C)1111212231334213522162327312832393314.茶多糖的制備4.1茶葉處理將茶葉放置于電熱恒溫鼓風干燥箱中，定溫90℃，烘干后，粉碎待用。4.2茶多糖的制備單因素實驗茶多糖的制備：取10g茶葉粉末，加入100ml蒸餾水，在超聲波中恒溫50℃進行冷凝回流浸提，時間分別為35min、45min、55min。超聲功率固定為300W。使用濾布將茶葉與濾液分離，取濾液在80℃下在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上蒸餾至剩余10ml。取濃縮液并加入無水乙醇，進行沉淀，無水乙醇分別為10ml、20ml、30ml。放置沉淀1-2小時后，進行離心分離操作，離心轉(zhuǎn)速設(shè)置為固定轉(zhuǎn)速3000r/min，離心時間分別為3min、6min、10min。然后除去上層清液，將沉淀用無水乙醇進行多次清洗，取沉淀物在36℃烘箱中烘干即為粗茶多糖提取物。正交實驗茶多糖的制備：在各正交實驗條件下，取10g茶葉粉末，加入100ml蒸餾水，在超聲波中恒溫50℃進行冷凝回流浸提。超聲功率固定為300W。使用濾布將茶葉與濾液分離，取濾液在80℃下在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上蒸餾至剩余10ml。取濃縮液并加入無水乙醇，進行沉淀。放置沉淀1-2小時后，進行離心分離操作，離心轉(zhuǎn)速設(shè)置為固定轉(zhuǎn)速3000r/min。然后除去上層清液，將沉淀用無水乙醇進行多次清洗，取沉淀物在36℃烘箱中烘干即為粗茶多糖提取物。4.3標準曲線的繪制精密吸取標準溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.8ml分別于20ml試管中，各自加入蒸餾水至2.0ml，順序加入5％苯酚溶液1.0ml、濃硫酸5.0ml，靜置10min后搖勻，室溫放置20min后在490nm波長下測量吸光度(A值)[27]。以葡萄糖濃度（C）為橫坐標，吸光度(A值)為縱坐標做標準曲線，得回歸方程Y=4.7550x-0.0295（R2=0.9904）[28]。4.4茶多糖得率計算稱取粗茶多糖提取物1g，使用蒸餾水溶解并且定容至50ml，吸取1ml后加蒸餾水至2.0ml，依次加入5％苯酚溶液1.0ml、濃硫酸5.0ml，靜置10min后搖勻，室溫放置20min后在490nm波長下測量吸光度(A值)[27]，根據(jù)回歸方程求得茶多糖濃度。再以茶多糖濃度計算茶多糖得率，茶多糖得率計算公式如下[29]：(3.1)式中C為茶多糖提取物溶液中葡萄糖濃度(mg/ml)；V為茶多糖提取物溶液體積(ml)；W為茶葉的質(zhì)量(g)；f為換算因子[30]。5實驗結(jié)果5.1單因素實驗結(jié)果5.1.1離心時間對茶多糖提取率的影響圖5.1離心時間對茶多糖提取率的影響實驗結(jié)果由圖5.1可知，在離心時間為6min時，茶多糖的沉淀最多，且沉淀量與離心時間成反比關(guān)系，時間越長，沉淀量減少。所以，離心時間選取6min較為理想。5.1.2超聲時間對茶多糖提取率的影響圖5.2超聲時間對茶多糖提取率的影響實驗結(jié)果由圖5.2可知，在超聲時間為55min時，茶多糖的沉淀最多，且沉淀量與超聲時間在該段時間里成正比關(guān)系，隨著時間的增加，沉淀量增加。所以，超聲時間在55min左右時較為良好。5.1.3沉淀劑用量對茶多糖提取率的影響圖5.3沉淀劑用量對茶多糖提取率的影響實驗結(jié)果由圖5.3可知，在沉淀劑用量為1:3時，茶多糖的沉淀最多，且沉淀量與沉淀劑用量成正比關(guān)系，隨著沉淀劑用量的加大，沉淀的量也在加大。所以，沉淀劑用量選取1:3效果較好。5.2正交實驗結(jié)果表5.1L9(33)正交實驗結(jié)果編號實驗因素得率%離心時間(A)/min超聲時間(B)/min沉淀劑用量(C)11113.01421223.18631333.88942133.73052213.39462323.45673123.120續(xù)表5.1編號實驗因素得率%離心時間(A)/min超聲時間(B)/min沉淀劑用量(C)83234.52993313.469K13.3633.2883.292K23.5263.7033.254K33.7063.6054.049R0.3430.4150.795由表可知，茶多糖提取率的影響因素比重順序為C>B>A，即茶多糖提取率影響因素比重順序為沉淀劑用量>超聲時間>離心時間。醇析水提法提取茶多糖的較優(yōu)提取工藝為A3B2C3，即離心時間為10min，超聲時間為45min，沉淀劑用量為1:3，在此實驗條件下，茶多糖的提取率最高，為4.529%。

6結(jié)論與分析6.1實驗結(jié)論以隴南綠茶為研究原料，采用醇析水提法以超聲波輔助進行茶多糖的提取，以苯酚-硫酸法來測定提取液中茶多糖的含量。通過單因素實驗研究了不同影響因素對茶多糖提取率的影響，在離心時間為6min時，茶多糖的沉淀量最多；在超聲時間為55min時，茶多糖的沉淀量最大；在沉淀劑用量為1:3時，茶多糖的沉淀量最高。再以正交實驗得到茶多糖的最佳提取工藝為A3B2C3，即離心時間為10min，超聲時間為45min，沉淀劑用量為1:3，在此實驗條件下，茶多糖的提取率最高，為4.529%。6.2數(shù)據(jù)分析實驗中茶多糖的得率在3.014%-4.529%范圍內(nèi)，與相關(guān)文獻報道[31]結(jié)論相似。但可能由于實驗中操作水平以及實驗條件的限制，實驗結(jié)果可能偏小。主要誤差操作存在于提取液的濃縮過程以及加入沉淀劑后沉淀時間的長短不同造成。參考文獻[1]安徽農(nóng)學(xué)院主編.制茶學(xué).北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2010.9[2]郭亞東.西餐烹飪.北京：中國食品出版社，1988.3[3]鞏發(fā)永,齊桂年,李靜,花旭斌,史碧波.超聲波輔助提取邊茶中茶多糖工藝條件研究[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2006(05):139-140.[4]廖獻就,覃鳳英,蒙嫻,周海明,徐麗琳,黃鎖義.凌云白毫茶多糖的提取和含量測定[J].廣東化工,2016,43(24):33-34.[5]馮歡歡.機械化學(xué)法輔助提取茶末有效成分的工藝研究[D].長江大學(xué),2015.[6]劉素強,鐘應(yīng)富,吳全,等.茶多糖的研究及其利用[J].南方農(nóng)業(yè),2009(5):111-113.[7]周小玲,汪東風,李素臻,周恂,侯仰鋒,王遠紅.不同酶法提取工藝對茶多糖組成的影響[J].茶葉科學(xué),2007(01):27-32.[8]張元,林強,崔玉梅，等.烏龍茶多糖的酶法提取及降血糖活性初步研究[J]?中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜志，2008，25(4)：286-288.[9]BaikJI，ShinKS，ParkY，elat.Biotransformationofcatechinandextractionofactivepolysaccharidefromgreentealeavesviasimultaneoustreatmentwithtannaseandpectinase[J].JournaloftheScienceofFoodandAgriculture,2015,95(11)：2337-2344.[10]王元鳳,金征宇.酶法提取茶多糖工藝的研究[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2005(03):122-124.[11]郭艷紅,魏新林,王元鳳,張嘉辰.酶法提取茶多糖工藝條件的研究[J].農(nóng)產(chǎn)品加工(學(xué)刊),2009(04):4-7.[12]何傳波,吳蘭蘭,湯鳳霞,熊何健.鐵觀音茶多糖的酶法提取及脫蛋白工藝研究[J].云南民族大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版),2009,18(01):41-44.[13]黃永春,馬月飛,謝清若,等.超聲波輔助提取茶多糖及其分子量變化的研究[J].食品科學(xué),2007(7):170-173.[14]張忠,李靜,李正濤,鞏發(fā)永.超聲波輔助提取茶籽多糖工藝條件的研究[J].安徽農(nóng)學(xué)通報,2007(10):49-50+99.[15]李星科,劉芳麗，李素云，等.信陽紅茶多糖的超聲波提取工藝及抗氧化活性研究[J].食品工業(yè),2014，（12):162-164.[16]苗爰清，孫)世利，曾瓊，等.超聲波輔助提取綠茶多糖的體外抗氧化活性研究[J].廣東茶業(yè)，2010,(1):40-42.[17]屠鵬飛主編.天然糖化學(xué).北京：