實(shí)驗(yàn)三-食品中微生物菌落總數(shù)的測(cè)定

實(shí)驗(yàn)三

食品中微生物菌落總數(shù)的測(cè)定一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶W(xué)習(xí)并掌握標(biāo)準(zhǔn)平皿活菌計(jì)數(shù)（SPC）的基本原理和方法明確菌落總數(shù)測(cè)定對(duì)被檢樣品進(jìn)行衛(wèi)生學(xué)評(píng)價(jià)的意義二、實(shí)驗(yàn)原理菌落總數(shù)：食品檢樣經(jīng)過(guò)處理，在一定條件下（如培基基、培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時(shí)間等）培養(yǎng)后，所得每g（mL）檢樣中形成的微生物菌落總數(shù)。標(biāo)準(zhǔn)平皿活菌計(jì)數(shù)法（SPC法）是最常用的活菌計(jì)數(shù)法將微生物細(xì)胞充分稀釋到單個(gè)分散，把這些單個(gè)分散的細(xì)胞通過(guò)混菌法或涂布法使其均勻分布在平皿培養(yǎng)基上，培養(yǎng)后長(zhǎng)出的菌落肉眼可見，每個(gè)菌落都由原液中單個(gè)細(xì)胞發(fā)育而來(lái)。反映食品被細(xì)菌污染的程度由于傾注平板法的局限，會(huì)有一部分細(xì)菌在該實(shí)驗(yàn)條件下不生長(zhǎng)，故計(jì)數(shù)結(jié)果要比實(shí)際值低。三、實(shí)驗(yàn)器材（一）培養(yǎng)基平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基（二）實(shí)驗(yàn)材料市售飲料（三）其他

1、無(wú)菌培養(yǎng)皿7套

2、無(wú)菌吸管（1支10mL，5支1mL）

3、無(wú)菌生理鹽水（225mL三角瓶1個(gè)，9mL試管5支）（四）儀器

超凈工作臺(tái)四、實(shí)驗(yàn)步驟1、樣品處理：以無(wú)菌操作，先用酒精棉球擦拭樣品表面后，用無(wú)菌剪刀將包裝剪破，量取檢樣25mL放入225mL滅菌生理鹽水當(dāng)中，充分振蕩，混合均勻，制成10-1稀釋度樣品2、梯度稀釋法依次稀釋樣品到10-4菌落總數(shù)操作流程圖3、選擇10-2、10-3、10-4三個(gè)稀釋度的樣品均液，用無(wú)菌移液管分別吸取1mL到無(wú)菌平皿中，每個(gè)稀釋度做2個(gè)平皿；同時(shí)，吸取1mL無(wú)菌生理鹽水到1個(gè)平皿中作為空白對(duì)照4、熔化培養(yǎng)基5、及時(shí)將已冷卻到46℃的培養(yǎng)基傾入到平皿中，并轉(zhuǎn)動(dòng)平皿使其混合均勻6、37℃倒置培養(yǎng)2天7、按照計(jì)數(shù)原則計(jì)數(shù)五、菌落計(jì)數(shù)方法有較大片狀菌落生長(zhǎng)者不宜采用，若片狀小于平板一半時(shí)且余部均勻分布，則以半個(gè)平板菌落數(shù)2倍報(bào)告無(wú)明顯界限鏈狀菌落每條單鏈視為一個(gè)菌落選取菌落數(shù)在30~300cfu之間，無(wú)蔓延生長(zhǎng)的平板計(jì)數(shù)低于30的記錄具體菌落數(shù)，大于300的可記錄為多不可計(jì)，每個(gè)稀釋度采用2個(gè)平行的均數(shù)1、計(jì)數(shù)結(jié)果的表述若只有一個(gè)稀釋度平板在30~300CFU，則計(jì)算兩平行平板的均數(shù)，再乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之若有連續(xù)兩個(gè)稀釋度符合計(jì)數(shù)要求則按下公式：例：10-2=232，24410-3=33，35菌落總數(shù)所有符合計(jì)數(shù)要求的平板菌落數(shù)之和較低稀釋度有效平板數(shù)較高稀釋度有效平板數(shù)較低稀釋度N=

(232+244+33+35)

(2+2×0.1)×10-2=24727結(jié)果表述10-1均數(shù)10-2均數(shù)描述最終結(jié)果25536均在30~300間則按計(jì)數(shù)公式2.6×103多不可計(jì)345各平板均>300，取稀釋度最高者報(bào)告，余計(jì)為多不可數(shù)3.5×104122均小于30則取稀釋度最低者報(bào)告1.2×10233029所有平板均不在30~300CFU且一部分<30或>300者以最接近30或300者報(bào)告2.9×10300所有平板均無(wú)菌落則記為<

1乘以最低稀釋倍數(shù)報(bào)告<1×10即<

102、報(bào)告方式菌落數(shù)在100cfu內(nèi)時(shí)按四舍五入修約，采用兩位有效數(shù)字報(bào)告大于或等于100時(shí)，第三位數(shù)四舍五入修約，取前兩位數(shù)字，例：205043210000or2.1×105所有平板均為蔓延菌落而無(wú)法計(jì)數(shù)者報(bào)告菌落蔓延若空白對(duì)照有菌落則此次檢測(cè)結(jié)果無(wú)效固體樣品以cfu/g，液體以cfu/mL為單位六、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析

樣品菌落總數(shù)N=cfu/mL

稀釋倍數(shù)10-2

10-3

10-4菌落數(shù)(CFU)